Agentes de unión específicos de la angiopoietina-2 humana.

Un polipéptido que comprende al menos una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consistede SEQ ID NO:

6, y SEQ ID NO: 119 a SEQ ID NO: 142, inclusive, donde dicho polipéptido es capaz de unirse aAng-2 y sales fisiológicamente aceptables de esta.

Agentes de unión específicos de la angiopoietina-2 humana.

Campo de la invención La presente invención se relaciona con agentes de unión específicos que reconocen y se unen a la angiopoietina-2 5 (Ang-2) . Más específicamente, la invención se relaciona con la producción, el uso en diagnóstico y terapéutico de agentes de unión específicos y fragmentos de estos, que se unen específicamente a Ang-2.

Antecedentes de la invención La angiogénesis, formación de nuevos vasos sanguíneos a partir de los existentes, es fundamental para muchos procesos fisiológicos y patológicos. Normalmente, la angiogénesis está regulada por factores pro y anti angiogénicos, pero en el caso de enfermedades como el cáncer, las enfermedades neovasculares oculares, artritis y psoriasis, el proceso puede fallar. Folkman, J., Nat. Med., 1:27-31 (1995) .

Se conocen muchas enfermedades asociadas con la angiogénesis desregulada o indeseada. Dichas enfermedades incluyen, a modo no taxativo, la neovascularización ocular, como retinopatías (incluso retinopatía diabética) , degeneración macular asociada con la edad, psoriasis, hemangioblastoma, hemangioma, arterioesclerosis,

enfermedades inflamatorias como una enfermedad inflamatoria reumática o reumatoidea, especialmente artritis (incluso artritis reumatoidea) o trastornos inflamatorios crónicos como asma crónico, aterosclerosis arterial o post trasplante, endometriosis y enfermedades neoplásicas, por ejemplo, los llamados tumores sólidos o líquidos (o hematopoiéticos) (como leucemias y linfomas) . Otras enfermedades asociadas con Angiogénesis indeseada serán evidentes para los entendidos en la técnica.

A pesar de que muchos sistemas de transducción de señales han estado implicados en la regulación de la angiogénesis, uno de los sistemas de selección de células endoteliales mejor caracterizados involucra la tirosina quinasa receptora Tie-2 (denominada "Tie-2" o "Tie-2R" (también denominada "ORK") ; Tie-2 murina también se denomina “tek") y sus ligandos, las angiopoietinas (Gale, N. W. and Yancopoulos, G. D., Genes Dev. 13:1055-1066 [1999]) . Hay 4 angiopoietinas conocidas: de angiopoietina1 ("Ang-1") a angiopoietina-4 ("Ang-4") . Estas angiopoietinas también se denominan “ligandos Tie-2". (Davis, S., et al, Cell, 87:1161-1169 [1996]; Grosios, K., et al, Cytogenet Cell Genet, 84:118-120 [1999]; Holash, J., et al, Investigative Ophthalmology & Visual Science, 42:16171625 [1999]; Koblizek, T. I., et al, Current Biology, 8:529-532 [1998]; Lin, P., et al, Proc Natl Acad Sci USA, 95:88298834 [1998]; Maisonpierre, P. C., et al, Science, 277:55-60 [1997]; Papa-petropoulos, A., et al, Lab Invest, 79:213223 [1999]; Sato, T. N., et al, Nature, 375:70-74 [1998]; Shyu, K. G., et al, Circulation, 98:2081-2087 [1998]; Suri, C.,

et al, Cell, 87:1171-1180 [1996]; Suri, C., et al, Science, 282:468-471 [1998]; Valenzuela, D. M., et al, Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA, 96:1904-1909 [1999]; Witzenbichler, B., et al, J Biol Chem, 273:18514-18521 [1998]) . Mientras que la unión de Ang-1 alTie-2 estimula la fosforilación de receptores en células endoteliales cultivadas, se ha observado que Ang-2 agoniza y antagoniza la fosforilación del receptor de Tie-2 (Davis, S., et al, [1996], supra; Maisonpierre, P.C., et al, [1997], supra; Kim, I., J.H. Kim, et al, Oncogene 19 (39) :

4549-4552 (2000) ; Teichert-Kuliszewska, K., P.C. Maisonpierre, et al, Cardiovascular Research 49 (3) : 659-70 (2001) ) .

Los fenotipos de Tie-2 y Ang-1 noqueador de ratones son similares y sugieren que la fosforilación de Tie-2 estimulada por Ang-1 media el remodelado y la estabilización del desarrollo de vasos en el útero a través del mantenimiento de la adhesión celular con apoyo de células endoteliales (Dumont, D. J., et al, Genes & Development, 40 8:1897-1909 [1994]; Sato, T. N., et al, Nature, 376:70-74 [1995]; Suri, C., et al, [1996], supra) . Se cree que la función de Ang-1 en la estabilización de los vasos se conserva en el adulto, donde se expresa en forma amplia y constitutiva (Hanahan, D., Science, 277:48-50 [1997]; Zagzag, D., et al, Experimental Neurology, 159:391-400 [1999]) . Por el contrario, la expresión de Ang-2 está limitada principalmente a sitios de remodelado vascular, donde se considera que bloquea la función de Ang-1, induciendo así el estado de plasticidad vascular que conduce a la angiogénesis 45 (Hanahan, D., [1997], supra; Holash, J., et al, Science, 284:1994-1998 [1999]; Maisonpierre, P. C., et al, [1997], supra) .

Varios estudios publicados aparentemente demostraron la expresión de Ang-2 selectiva para vasos en enfermedades asociadas con Angiogénesis. Estos trastornos patológicos incluyen, por ejemplo, psoriasis, degeneración macular y cáncer, (Bunone, G., et al, American Journal of Pathology, 155:1967-1976 [1999]; Etoh, T., 50 et al, Cancer. Research, 61:2145-2153 [2001]; Hangai, M., et al, Investigative Ophthalmology & Visual Science, 42:1617-1625 [2001]; Holash, J., et al, [1999] supra; Kuroda, K., et al, Journal of Investigative Dermatology, 116:713720 [2001]; Otani, A., et al, Investigative Ophthalmology & Visual Science, 40:1912-1920 [1999]; Stratmann, A., et al, American Journal of Pathology, 153:1459-1466 [1998]; Tanaka, S., et al, J Clin Invest, 103:34-345 [1999]; Yoshida, Y., et al, International Journal of Oncology, 15:1221-1225 [1999]; Yuan, K., et al, Journal of Periodontal Research, 55 35:165-171 [2000]; Zagzag, D., et al, [1999] supra) . La mayoría de estos estudios se han enfocado en el cáncer, donde muchos tipos de tumores tienen una expresión de Ang-2 vascular. A diferencia de su expresión en una angiogénesis patológica, la expresión de Ang-2 en tejidos normales es muy limitada (Maisonpierre, P. C., et al, [1997], supra; Mezquita, J., et al, Biochemical and Biophysical Research Communications, 260:492-498 [1999]) . En el adulto normal, los tres sitios principales de angiogénesis son el ovario, la placenta, y el útero. Se trata de los tejidos principales en los tejidos normales (es decir, no cancerosos) en donde se detectó ARNm de Ang-2.

Algunos estudios funcionales sugieren que Ang-2 puede estar involucrada en la angiogénesis tumoral. Ahmad et al. (Cancer Res., 61:1255-1259 [2001]) describen una sobreexpresión de Ang-2 y muestran que está supuestamente asociada con un aumento en el crecimiento tumoral en un modelo de xenoinjerto en ratones. Véase también Etoh et al, supra, and Tanaka et al, supra, donde se presenta información que asocia la sobre expresión de Ang-2 con hipervascularidad de tumores. Sin embargo, por otro lado Yu et al. (Am. J. Path., 158:563-570 [2001]) presentan datos que muestran una sobre expresión de Ang-2 en el carcinoma de pulmón de Lewis y las células de cáncer mamario TA3 supuestamente prolongaron la supervivencia del ratón que recibió inyecciones de los transfectantes correspondientes.

En los últimos años, varias publicaciones han sugerido a Ang-1, Ang-2 y/o Tie-2 como un objetivo posible para la terapia contra el cáncer. Por ejemplo, las patentes de los EE.UU. nos. 6, 166, 185, 5, 650, 490, y 5, 814, 464 divulgan el concepto de anticuerpos de ligando anti-Tie-2 y cuerpos receptores. Lin et al. (Proc. Natl. Acad. Sci USA, 95:88298834 [1998]) inyectaron que expresa Tie-2 soluble adenovirus en ratones; la Tie-2 soluble supuestamente disminuyó el número y tamaño de los tumores que se desarrollaron en los ratones. En un estudio relacionado, Lin et al (J. Clin. Invest., 100:2072-2078 [1997]) inyectaron una forma soluble de Tie-2 a ratas; este compuesto redujo supuestamente el tamaño del tumor en ratas. Siemeister et al. (Cancer Res., 59:3185-3189 [1999]) generaron líneas celulares de melanoma humano que expresaban el dominio extracelular de Tie-2, se inyectaron estas líneas celulares en ratones desnudos y llegaron a la conclusión que Tie-2 soluble supuestamente resultó en una “inhibición significativa” del crecimiento tumoral y la angiogénesis tumoral. Ante esta información y dado que Ang-1 y Ang-2 se unen a Tie-2, no queda claro a partir de estos estudios si Ang-1, Ang-2 o Tie-2 serían un objetivo atractivo para la terapia contra el cáncer.

La fusión de algunos péptidos en una proteína plasmática estable como una región constante lg para mejorar la vida media de estas moléculas se encuentra descrita en, por ejemplo, la patente PCT WO 00/24782, publicada el 4 de mayo de 2000.

La fusión de una proteína o un fragmento de esta en una proteína plasmática estable como una región constante lg para mejorar la vida media de estas moléculas se ha descrito en diversas ocasiones (Véase, por ejemplo, patente de los EE.UU. 5, 480, 981; Zheng et al, J. Immunol., 154:5590-5600, (1995) ; Fisher et al, N. Engl.... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido que comprende al menos una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste de SEQ ID NO: 6, y SEQ ID NO: 119 a SEQ ID NO: 142, inclusive, donde dicho polipéptido es capaz de unirse a Ang-2 y sales fisiológicamente aceptables de esta.

2. Un polipéptido de fusión que comprende al menos un péptido de conformidad con la reivindicación 1 y una molécula que previene la degradación y/o aumenta la vida media, reduce la toxicidad, reduce la inmugenicidad o aumenta la actividad biológica de dicho péptido, donde dicho polipéptido de fusión es capaz de unirse a Ang-2 y sales fisiológicamente aceptables de esta.

3. El polipéptido de fusión de conformidad con la reivindicación 2, donde dicha molécula es al menos uno de un 10 dominio de Fc, polietilenglicol, un lípido, un grupo colesterol, un carbohidrato y un oligosacárido.

4. Un dímero o multímero de los polipéptidos de conformidad con la reivindicación 1.

5. Un polinucleótido que codifica un polipéptido de conformidad con la reivindicación 1.

6. Una célula receptora que comprende el polinucleótido de la reivindicación 5.

7. Un polipéptido de conformidad con la SEQ ID NO: 6.

8. Un polipéptido de conformidad con la reivindicación 2 para su uso en la inhibición de angiogénesis indeseada en mamíferos.

9. Un polipéptido de conformidad con la reivindicación 2 para su uso en la inhibición del crecimiento tumoral caracterizado por la angiogénesis indeseada en mamíferos.