Montaje de ADN mediado por nucleasas.
Un método in vitro para ensamblar en forma continua dos o más ácidos nucleicos de doble cadena,
que comprende:
(a) poner en contacto un primer ácido nucleico con al menos un agente nucleasa para generar un primer ácido nucleico digerido con una porción final eliminada;
(b) poner en contacto el primer ácido nucleico digerido con un segundo ácido nucleico, un oligo de unión de doble cadena y una exonucleasa, en donde el oligo de unión es un ADN lineal de doble cadena que es de aproximadamente 50 pb a aproximadamente 400 pb y comprende:
(i) una primera secuencia complementaria que es complementaria al primer ácido nucleico digerido;
(ii) un espaciador; y
(iii) una segunda secuencia complementaria que es complementaria al segundo ácido nucleico, en el que el espaciador comprende una secuencia idéntica a la porción final,
en el que no hay bases de ácido nucleico presentes entre la primera secuencia complementaria y la secuencia idéntica a la porción final, y no hay bases de ácido nucleico presentes entre la segunda secuencia complementaria y la secuencia idéntica a la porción final, y
en el que la exonucleasa expone las primera y segunda secuencias complementarias; y
(c) ensamblar el oligo de unión con el primer ácido nucleico digerido y el segundo ácido nucleico, en el que el ensamblaje reconstituye la porción final.
Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E18162656.
Solicitante: REGENERON PHARMACEUTICALS, INC..
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 777 Old Saw Mill River Road Tarrytown, NY 10591 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: MCWHIRTER,JOHN, MACDONALD,LYNN, MURPHY,ANDREW, VALENZUELA,DAVID, SCHOENHERR,CHRIS, MOMONT,COREY, MONTAGNA,CAITLIN, WARSHAW,GREGG, ROJAS,JOSE, LAI,KA-MAN.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12N15/10 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
- C12N15/64 C12N 15/00 […] › Métodos generales para la preparación del vector, para su introducción en la célula o para la selección del huésped que contiene el vector.
- C12N15/66 C12N 15/00 […] › Métodos generales para insertar un gen en un vector para formar un vector recombinante, utilizando la escisión y la unión; Utilización de "linkers" no funcionales o de adaptadores, p. ej. "linkers" que contienen la secuencia para una endonucleasa de restricción.
PDF original: ES-2781323_T3.pdf
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