Métodos y soportes sólidos para la preparación de muestras utilizando transposomas.

Un método para preparar una biblioteca inmovilizada de fragmentos de ADN marcados que comprende:

(a) proporcionar un soporte sólido que tiene una pluralidad de complejos de transposoma inmovilizados en el mismo, en donde cada complejo de transposoma comprende:

una transposasa unida de manera no covalente a un primer polinucleótido de un ácido nucleico bicatenario que comprende el primer y un segundo polinucleótido, en donde dicho primer polinucleótido está inmovilizado en dicho soporte sólido, y en donde dicho primer polinucleótido comprende

(i) una parte 3' que comprende una secuencia terminal de transposón y

(ii) un primer marcador que comprende un primer dominio de marcador;

y en donde dicho segundo polinucleótido comprende una región complementaria a dicha secuencia terminal de transposón;

y en donde los complejos de transposoma son homodímeros, comprendiendo los homodímeros una primera pluralidad de homodímeros que comprenden un primer marcador de una primera secuencia y una segunda pluralidad de homodímeros que comprenden un primer marcador de una segunda secuencia;

(b) aplicar un ADN bicatenario diana al soporte sólido en condiciones en las que el ADN diana es fragmentado por los complejos de transposomas y la secuencia terminal de transposón en 3' del primer polinucleótido se transfiere a un extremo 5' de al menos una cadena de los fragmentos; produciendo de este modo una biblioteca inmovilizada de fragmentos bicatenarios en donde al menos una cadena está marcada en 5' con el primer marcador de la primera secuencia y al menos una cadena está marcada en 5' con el primer marcador de la segunda secuencia.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/IB2014/000610.

Solicitante: ILLUMINA CAMBRIDGE LIMITED.

Nacionalidad solicitante: Reino Unido.

Dirección: Chesterford Research Park Little Chesterford Nr Saffron Walden Essex CB10 1XL REINO UNIDO.

Inventor/es: SMITH,GEOFFREY PAUL, GORMLEY,NIALL ANTHONY.

Fecha de Publicación: 8 de Febrero de 2019.

Clasificación Internacional de Patentes:

C12Q1/6834 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › Acoplamiento enzimático o bioquímico de los ácidos nucleicos a una fase sólida.
C12Q1/6869 C12Q 1/00 […] › Métodos de secuenciación.

PDF original: ES-2699262_T3.pdf

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