Método para la detección de cepas de Legionella spp. en muestras ambientales basadas en la amplificación isotérmica mediada por bucle (lamp), reactivo de detección y conjunto de cebadores.
Un método para la detección de cepas de Legionella spp. en una muestra ambiental basándose en la amplificación isotérmica mediada por bucle caracterizado por que comprende las etapas de:
(a) recogida de la muestra;
(b) extracción de material genético de la muestra con un reactivo de extracción que comprende al menos reactivos de lisis celular y una solución de soporte magnetizable;
(c) elución del material genético desde el soporte magnetizable y retrotranscripción isotérmica de ARN y amplificación de ADNc con un reactivo de detección que comprende al menos soluciones de elución, retrotranscriptasa, amplificación y lectura, en donde la solución de amplificación comprende un conjunto de cebadores de LAMP para amplificar las regiones específicas del gen de ARNr 16S de Legionella; y
(d) lectura del resultado,
en donde el conjunto de cebadores de LAMP para amplificar regiones específicas del gen de ARNr 16S de Legionella en la etapa (c) comprende al menos:
un cebador directo F3 que comprende una secuencia de nucleótidos tal como se establece en la SEQ ID NO: 1;
un cebador directo F2 que comprende una secuencia de nucleótidos tal como se establece en la SEQ ID NO: 2;
un cebador directo F1c que comprende una secuencia de nucleótidos tal como se establece en la SEQ ID NO: 3;
un cebador inverso B3 que comprende una secuencia de nucleótidos tal como se establece en la SEQ ID NO: 4;
un cebador inverso B2 que comprende una secuencia de nucleótidos tal como se establece en la SEQ ID NO: 5;
un cebador inverso B1c que comprende una secuencia de nucleótidos tal como se establece en la SEQ ID NO: 6;
un cebador directo interno FIP que comprende una secuencia de nucleótidos tal como se establece en la SEQ ID NO: 7; y
un cebador inverso interno BIP que comprende una secuencia de nucleótidos tal como se establece en la SEQ ID NO: 8.
Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E15382680.
Solicitante: FUNDACION GAIKER.
Nacionalidad solicitante: España.
Provincia: VIZCAYA.
Inventor/es: VERDOY BERASTEGUI,Dolores, OLABARRIA DE PABLO,GARBIÑE.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- B01L3/00 TECNICAS INDUSTRIALES DIVERSAS; TRANSPORTES. › B01 PROCEDIMIENTOS O APARATOS FISICOS O QUIMICOS EN GENERAL. › B01L APARATOS DE LABORATORIO PARA LA QUIMICA O LA FISICA, DE USO GENERAL (aparatos de uso médico o farmacéutico A61; aparatos para aplicaciones industriales o aparatos de laboratorio cuya estructura y funciones son comparables a las de aparatos industriales similares, ver las clases relativas a los aparatos industriales, en particular las subclases B01 y C12; aparatos de separación o de destilación B01D; dispositivos de mezcla o de agitación B01F; atomizadores B05B; tamices, cribas B07B; tapones, capuchones B65D; manipulación de líquidos en general B67; bombas de vacío F04; sifones F04F 10/00; grifos, válvulas F16K; tubos, empalmes para tubos F16L; aparatos especialmente adaptados al estudio y análisis de materiales G01, particularmente G01N; aparatos eléctricos u ópticos, ver las subclases apropiadas en las secciones G y H). › Recipientes o utensilios para laboratorios, p. ej. cristalería de laboratorio (botellas B65D; equipos para enzimología o microbiología C12M 1/00 ); Cuentagotas (recipientes para volumetría G01F).
- C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
PDF original: ES-2727592_T3.pdf
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