Método para la criopreservación de espermatozoides humanos libres de plasma seminal usando un proceso rápido y simple de vitrificación-desvitrificación aséptica.
Método para la criopreservación de espermatozoides humanos libres de plasma seminal usando un proceso rápido y simple de vitrificación-desvitrificación aséptica,
comprendiendo dicho método:
(a) proporcionar espermatozoides libres de líquido seminal;
(b) resuspender y mezclar los espermatozoides obtenidos en la etapa (a) en una proporción volumétrica de 1:1 con un medio de vitrificación que comprende:
i) medio de tamponamiento para espermatozoides,
ii) un crioprotector no permeable con una concentración final de 0,15 a 0,30 M, y
iii) un suero suplementado con dextrano
(c) mezclar y ajustar la concentración final de los espermatozoides a un intervalo de 0,2 x 106 a 1,8 x 106 espermatozoides por 100 μl de dicho medio de vitrificación;
(d) colocar 100 μl de la mezcla de espermatozoides y medio de vitrificación inmediatamente después de la etapa (c) en una pajuela de 0,25 ml, dejando 1 cm libre de líquido en ambos extremos, colocando esta primera pajuela dentro de una segunda pajuela de 0,5 ml para sellar en ambos extremos, colocando la primera y la segunda pajuela de manera horizontal en un receptáculo termoconductor;
(e) sumergir la pajuela de 0,5 ml resultante de la etapa d) con el contenido espermático en posición horizontal en N2 líquido;
(f) mantener la muestra de esperma dentro de las pajuelas a una temperatura entre -75 ºC y -85 ºC;
(g) desvitrificar la muestra mediante introducción de la pajuela que contiene la muestra de esperma en un medio de desvitrificación que comprende;
i) medio de tamponamiento para espermatozoides,
ii) fluido tubal humano suplementado con albúmina de suero bovino al 1 % de p/v, y
iii) un suero suplementado con dextrano;
en donde la desvitrificación se lleva a cabo primero colocando las muestras a desvitrificar en un recipiente con N2 líquido y después introduciendo tres pajuelas de 0,25 ml con muestra en un tubo con 5 ml de medio de desvitrificación incubado a una temperatura que oscila de 36,5 a 37,5 ºC en un bloque de calefacción.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/IB2011/050651.
Solicitante: UNIVERSIDAD DE LA FRONTERA.
Nacionalidad solicitante: Chile.
Dirección: 1145 Avenida Francisco Salazar Temuco 4811230 CHILE.
Inventor/es: SANCHEZ GUTIERREZ,RAÚL, RISOPATRON GONZALEZ,JENNIE, SCHULZ RUBILAR,MABEL, ISACHENKO,EVGENIA, ISACHENKO,VLADIMIR.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- A01N1/02 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A01 AGRICULTURA; SILVICULTURA; CRIA; CAZA; CAPTURA; PESCA. › A01N CONSERVACION DE CUERPOS HUMANOS O ANIMALES O DE VEGETALES O DE PARTES DE ELLOS (conservación de alimentos o productos alimenticios A23 ); BIOCIDAS, p. ej. EN TANTO QUE SEAN DESINFECTANTES, PESTICIDAS O HERBICIDAS (preparaciones de uso médico, dental o para el aseo que eliminan o previenen el crecimiento o la proliferación de organismos no deseados A61K ); PRODUCTOS QUE ATRAEN O REPELEN A LOS ANIMALES; REGULADORES DEL CRECIMIENTO DE LOS VEGETALES. › A01N 1/00 Conservación de cuerpos humanos o animales, o partes de ellos. › Conservación de partes vivas.
PDF original: ES-2633123_T3.pdf
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