Nuevo proceso para la producción y purificación de la enzima colagenasa de Vibrio alginolyticus.
Un proceso para la producción y purificación de colagenasa de Vibrio alginolyticus quimiotipo iophagus,
que comprende las siguientes etapas:
Etapa A: La inoculación de Vibrio alginolyticus quimiotipo iophagus en un matraz Erlenmeyer y la fermentación con caldo de cultivo de origen animal no bovino;
Etapa B: Clarificación del caldo fermentado así obtenido por ultrafiltración de flujo tangencial (TFF1) con casetes de corte de peso molecular de 100-500 kD (MWCO), preferiblemente de 300 kD;
Etapa C: Diálisis y concentración del medio clarificado obtenido en la etapa B, por ultrafiltración de flujo tangencial con casetes de MWCO de 5-30 kD, preferentemente MWCO de 10 kD;
Etapa D: Purificación de la solución que contiene colagenasa obtenida en la Etapa C, por resina de intercambio aniónico que porta grupos básicos débiles, a un pH de entre 6,9 y 7,4, preferiblemente a un pH de 7,1;
Etapa E: Diálisis y concentración de las fracciones recolectadas que tienen actividad colagenolítica, procedente de la etapa D, por ultrafiltración de flujo tangencial con casetes de MWCO de 10-50 kD, preferentemente MWCO de 30 kD; Etapa F: Purificación de la solución así obtenida, por la resina de intercambio aniónico que porta grupos básicos fuertes, a un pH de entre 6,9 y 7,4, preferiblemente a un pH de 7,1;
Etapa G: Diafiltración y concentración de las fracciones con actividad colagenolítica ≥ 95% procedente de la etapa F, por ultrafiltración de flujo tangencial con casetes de MWCO de 10-50 kD, preferentemente MWCO de 30 kD;
Etapa H: Filtración de la solución que contiene colagenasa obtenida de este modo, a través de un filtro absoluto de 0,2 μm, y almacenamiento a una temperatura de entre -20° y -80° C.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2013/057998.
Solicitante: FIDIA FARMACEUTICI S.P.A..
Nacionalidad solicitante: Italia.
Dirección: VIA PONTE DELLA FABBRICA 3/A 35031 ABANO TERME (PD) ITALIA.
Inventor/es: VACCARO, SUSANNA, GENNARI,GIOVANNI, CAPUTO,MICHELE, CUPPARI,CHRISTIAN.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- A61K38/48 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 38/00 Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00). › que actúan sobre enlaces peptídicos (3.4).
- C12N9/52 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › que provienen de bacterias.
PDF original: ES-2575878_T3.pdf
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