Cepa Pasteur de BCG auxótrofa y recombinante y su uso para combatir infecciones humanas causadas por parásitos.
Una cepa vacunal Pasteur de BCG auxótrofa y recombinante complementada por el aminoácido leucina que expresa una proteína Sm14 de Schistossoma mansoni,
es decir, rBCG Pasteur [Delta]LeuD/p[Delta]K410-hsp60*- Sm14, obteniéndose dicha cepa vacunal de acuerdo con las siguientes etapas:
(a) amplificación por PCR de un fragmento que contiene un casete de expresión de Sm14 que contiene un promotor hsp60* modificado, usando
- un vector pAU5-Sm14 como molde, teniendo dicho vector una secuencia de hsp60 modificado que contiene una deleción de cuatro pares de bases inmediatamente aguas arriba de la región promotora en combinación con la pérdida del primer par de bases de la secuencia del promotor hsp60 y en consecuencia es denominado hsp60*, y
- los cebadores PSm14F, es decir, TAT ATA TAT ATA TAG GCG CCA CCA CAA CGA CGC GC - SEQ ID NO: 3 y PSm14R, es decir, CGC GGG CGC CTT AGG ATG ATC GTT TAT A - SEQ ID NO: 4;
(b) digestión con una enzima Narl de un amplicón de 816 pb, es decir, hsp60*-Sm14, obtenido por amplificación por PCR de la etapa (a), proporcionando un amplicón hsp60*-Sm14;
(c) clonación del amplicón hsp60*-Sm14 obtenido en la etapa (b) en un vector pUP410 digerido con la enzima Narl, dando lugar a una construcción pUP410-hsp60*-Sm14;
(d) evaluación de la capacidad de la construcción pUP410-hsp60*-Sm14 para expresar la proteína Sm14 en Mycobacterium vaccae;
(e) eliminación del gen de resistencia a la kanamicina de la construcción pUP410-hsp60*-Sm14 por digestión con una endonucleasa de restricción HindIII; y
(f) re-circularización de la construcción pUP410-hsp60*-Sm14 digerida sin el gen de resistencia a la kanamicina utilizando ligasa T4 para producir la construcción pUP410-hsp60*-Sm14 digerida, que se utiliza para transformar una cepa Pasteur de BCG auxótrofa, es decir, BCG [Delta]LeuD, para producir una cepa Pasteur de BCG auxótrofa recombinante complementada con el aminoácido leucina que expresa una proteína Sm14 de Schistossoma mansoni, es decir, BCG Pasteur [Delta]LeuD/p[Delta]K410-hsp60*-Sm14
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/BR2010/000065.
Solicitante: Fundação Oswaldo Cruz.
Inventor/es: TENDLER, MIRIAM, VILAR,MÔNICA MAGNO, ARMÔA,GERALDO RODRIGUES GARCIA, MCINTOSH,DOUGLAS, SIMPSON,ANDREW J. G.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- A61P31/06 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61P ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS O DE PREPARACIONES MEDICINALES. › A61P 31/00 Antiinfecciosos, es decir antibióticos, antisépticos, quimioterápicos. › para la tuberculosis.
- A61P33/10 A61P […] › A61P 33/00 Agentes antiparasitarios. › Antihelmínticos.
- A61P35/00 A61P […] › Agentes antineoplásicos.
- C12N15/76 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › para Actinomyces; para Streptomyces.
PDF original: ES-2595372_T3.pdf
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