Partícula viral adyuvante.

Una composición que comprende un adyuvante capaz de potenciar una respuesta inmunitaria en un animal y unoo más antígenos foráneos,

comprendiendo dicho adyuvante un Virus del Mosaico de la Papaya (PapMV) o unapartícula similar al virus PapMV que comprende proteína de la cubierta de PapMV, siendo capaz dicha proteína de lacubierta de ensamblarse para formar dicha partícula similar a virus, donde dichos uno o más antígenos foráneosestán fusionados o unidos covalentemente al extremo C-terminal de la proteína de la cubierta de dicho PapMV opartícula similar al virus PapMV de tal forma que dichos uno o más antígenos foráneos están dispuestos en lasuperficie externa de dicho virus o partícula similar a virus y

donde dicha composición es adecuada para usarse como una vacuna.

Partícula viral adyuvante

Campo técnico

La presente invención se refiere a una partícula viral que lleva inmunógenos y que tiene actividad de inmunopotenciación o adyuvante. La invención se refiere particularmente a partículas virales recombinantes, en particular para su uso en la mejora de una respuesta inmunitaria en un ser humano o un animal por medio de estas partículas.

Técnica antecedente La vacunación es el método más eficaz para combatir las enfermedades infecciosas. La aparición de nuevas enfermedades víricas (por ejemplo, el virus de la Hepatitis C, el virus de la Inmunodeficiencia Humana) y la resistencia de las bacterias patógenas (Salmonella typhii) a los antibióticos son alarmantes. Por lo tanto, la vacunación se convierte en una alternativa eficaz para ayudar a controlar estas enfermedades.

En los últimos 15 años, la ingeniería genética permitió la identificación precisa de fragmentos proteicos que son responsables de la respuesta inmunitaria protectora. Por lo tanto, surgieron nuevas estrategias de vacunación. La inmunización de animales con péptidos inmunogénicos apropiados permitió la producción de anticuerpos neutralizantes que pueden controlar enfermedades. La expresión de estos péptidos inmunogénicos en sistemas heterólogos proporcionó las bases de las vacunas de subunidades.

A pesar de que se ha demostrado que ciertos oligopéptidos sintetizados químicamente son capaces de estimular la producción de anticuerpos contra la proteína de la cual derivan, por lo general se ha observado que los péptidos por sí mismos son insuficientemente inmunogénicos para servir como vacunas. Es por esto por lo que hay un considerable interés en desarrollar sistemas de presentación de epítopos en los que la secuencia peptídica esté fusionada a una molécula transportadora capaz de formar una estructura macromolecular.

La inmunidad específica puede mejorarse por el uso de inmunopotenciadores, tales como adyuvantes, cuando se administra un antígeno a un hospedador. La respuesta inmunitaria está mediada por una diversidad de células del sistema inmunitario. Hay dos tipos de respuesta inmunitaria: inmunidad humoral mediada por anticuerpos, e inmunidad celular mediada principalmente por linfocitos T citotóxicos. Las células presentadoras de antígenos (“APC”) procesan y presentan el antígeno tanto a las células B como a las células T. Las células B secretan anticuerpos específicos como resultado de la activación y las células T o bien se convierten en células auxiliares de la respuesta humoral o en células citotóxicas y directamente atacan al antígeno. Se ha mostrado que los adyuvantes aumentan estas respuestas inmunitarias.

La presentación inicial de un antígeno induce anticuerpos tanto IgM como IgG, que constituyen la respuesta primaria. No obstante, esta producción de anticuerpos podría decaer con el tiempo. La respuesta secundaria, que principalmente implica la producción de anticuerpos IgG, puede dispararse por la presentación del antígeno secundaria o posterior en el tiempo. Una respuesta secundaria o incluso primaria, sin embargo, no está garantizada meramente por la presentación del antígeno al hospedador.

Una dificultad que surge con frecuencia en la administración de un antígeno es la medida en la que responderá el sistema inmunitario. Ciertos antígenos no son muy inmunogénicos ya que tras la administración provocan una respuesta primaria débil o no provocan ninguna respuesta. En esos casos, el sistema inmunitario podría no responder a una exposición secundaria, y por ejemplo, el hospedador podría sufrir la enfermedad o afección que se pretendía prevenir con la inmunización con el antígeno.

En esas situaciones, es común administrar un modulador de la respuesta fisiológica (“PRM”) . Un PRM generalmente se define como un compuesto inmunopotenciador. Puede proceder de bacterias, tales como Bordella pertussis o Cor y nebacterium parvum. Los PRM también pueden incluir productos químicos tales como polinucleótidos, moléculas fisiológicamente activas tales como hormonas tímicas y adyuvantes.

Los adyuvantes son compuestos que potencian la respuesta de los sistemas inmunitarios cuando se administran con un antígeno, produciendo mayores títulos de anticuerpos y una respuesta prolongada del hospedador. Los adyuvantes usados comúnmente incluyen el Adyuvante Incompleto de Freund, que consiste en una emulsión de agua en aceite, el Adyuvante Completo de Freund, que comprende el anterior con la adición de Mycobacterium tuberculosis, y el alumbre. La dificultad, sin embargo, de usar estos materiales en seres humanos, por ejemplo, es que son tóxicos o pueden hacer que el hospedador desarrolle lesiones en el sitio de inyección.

Kawamura y Berzofsky describieron otro enfoque en J. Immunol., 136:58 (1986) . En este enfoque, se conjugaron anticuerpos anti-Ig, que son reactivos con las inmunoglobulinas presentes en ciertas células B, con ferritina y mioglobina, y se administraron a ratones con Adyuvante Incompleto de Freund. Mejoró la inmunogenicidad de la mezcla, pero no había indicios de la inmunogenicidad de la muestra sin la adición del adyuvante. Además, aunque los adyuvantes tales como el Adyuvante Completo de Freund, el Adyuvante Incompleto de Freund y Montanide pueden mejorar en gran medida la respuesta inmunitaria a un antígeno, sufren algunas desventajas. Cuando se usan con un antígeno en una forma inyectable, normalmente se forman grandes lesiones en el sitio de inyección, una situación que los hace insatisfactorios para este uso en seres humanos, mascotas o en animales de carne. Además, estos adyuvantes no pueden actuar como agentes inmunopotenciadores cuando se administran por vía oral o entérica.

Se sabe en la técnica que pueden modificarse genéticamente de forma relativamente fácil transportadores de inmunógenos o antígenos de diferente naturaleza. Esos sistemas que pueden producirse en plantas y se adaptan fácilmente a esta aplicación son virus de plantas. Se sabe que el virus del mosaico del caupí (CPMV) , el virus del mosaico del tabaco (TMV) y el virus del mosaico de la alfalfa (AIMV) se han modificado para la presentación de epítopos de interés. Se sabe que otro vector viral de plantas, el virus X de la patata (PVX) , un miembro del grupo de los potexvirus, tolera el transporte de una cubierta de proteína completa. También, las Patentes de Estados Unidos 6.232.099 y 6.042.832, las publicaciones de solicitudes de Patente Internacional con el número WO 97/39134, WO 02/04007, WO 01/66778, WO 02/00169, la solicitud EP 1167530, y Porta, C. y col. (Reviews in Medical Virology, 1998, 8:25-41) , todas ellas, describen diferentes variaciones de partículas similares a virus que transportan proteínas foráneas fusionadas con proteínas endógenas. Además, se ha descrito el uso del virus del mosaico de la papaya (PapMV) como un sistema de presentación de epítopos (Ikegami, R., M.Sc. Thesis, National Librar y of Canada, Ottawa, Ontario) .

Considerando el estado de la técnica descrito en el presente documento, aún hay una gran necesidad de compuestos y partículas transportadoras que permitan una inmunización fuerte del ser humano y de animales evitando además el uso de adyuvantes y segundas vacunaciones como se pone en práctica actualmente.

Divulgación de la invención El alcance de la presente invención se define por las reivindicaciones adjuntas. En las realizaciones de la invención desveladas en el presente documento, la referencia a un virus o a una partícula similar a virus (VLP) se entiende como una referencia a PapMV o a VLP PapMV.

Un objetivo de la presente invención es proporcionar un complejo de inmunógeno-transportador que tenga una propiedad de inmunopotenciación, consistente en una partícula similar a virus (VLP) que transporte al menos un inmunógeno fusionado con una proteína o fragmento de la misma de dicha VLP, que pueda usarse en la preparación de una composición para inducir una respuesta inmunitaria frente a la proteína o fragmento de la misma.

Otro objetivo de la presente invención es proporcionar una composición que comprenda una partícula similar a virus (VLP) y una proteína o un extracto derivado de un virus, bacteria o parásito, para su uso como una vacuna.

En el presente documento se desvela un método para inmunopotenciar una respuesta inmunitaria en un ser humano o un animal, que comprende administrar a dicho ser humano o animal un transportador de inmunógenos consistente en una partícula similar a virus (VLP) que transporta al menos un inmunógeno fusionado con una proteína o fragmento de la misma de dicha VLP, o administrar una VLP o un fragmento de la misma de forma concomitante con... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende un adyuvante capaz de potenciar una respuesta inmunitaria en un animal y uno o más antígenos foráneos, comprendiendo dicho adyuvante un Virus del Mosaico de la Papaya (PapMV) o una partícula similar al virus PapMV que comprende proteína de la cubierta de PapMV, siendo capaz dicha proteína de la cubierta de ensamblarse para formar dicha partícula similar a virus, donde dichos uno o más antígenos foráneos están fusionados o unidos covalentemente al extremo C-terminal de la proteína de la cubierta de dicho PapMV o partícula similar al virus PapMV de tal forma que dichos uno o más antígenos foráneos están dispuestos en la superficie externa de dicho virus o partícula similar a virus y donde dicha composición es adecuada para usarse como una vacuna.

2. La composición de la reivindicación 1, en la que dicho adyuvante comprende una partícula similar al virus PapMV y dicho uno o más antígenos foráneos están fusionados o unidos covalentemente al extremo C-terminal de la proteína de la cubierta de dicha partícula similar al virus PapMV.

3. La composición de la reivindicación 1 o 2, en la que dicho uno o más antígenos foráneos están fusionados al extremo C-terminal de la proteína de la cubierta.

4. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 o 3, en la que dicho adyuvante comprende una partícula similar al virus PapMV que comprende proteína de la cubierta modificada genéticamente.

5. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3 o 4, en la que dichos uno o más antígenos foráneos son inmunógenos que tienen más de una especificidad.

6. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4 o 5, en la que dichos uno o más antígenos foráneos proceden de uno o más virus, bacterias o parásitos.

7. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5 o 6, en la que dichos uno o más antígenos foráneos comprenden un epítopo antigénico de hepatitis C o un epítopo antigénico de Salmonella typhii.

8. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7, en la que dicha respuesta inmunitaria es una respuesta inmunitaria sistémica.

9. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7, en la que dicha respuesta inmunitaria es una respuesta inmunitaria humoral, una respuesta inmunitaria celular o una combinación de las mismas.

10. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7, en la que dicha respuesta inmunitaria es una respuesta de memoria de anticuerpos de larga duración.

11. Un polinucleótido que codifica una proteína de fusión, comprendiendo dicha proteína de fusión proteína de la cubierta del Virus del Mosaico de la Papaya (PapMV) y uno o más antígenos foráneos fusionados al extremo Cterminal de dicha proteína de la cubierta, siendo capaz dicha proteína de fusión de ensamblarse para formar una partícula similar a virus.

12. Una proteína de fusión recombinante que comprende proteína de la cubierta del Virus del Mosaico de la Papaya (PapMV) y uno o más antígenos foráneos fusionados al extremo C de dicha proteína de la cubierta, siendo capaz dicha proteína de fusión de ensamblarse para formar una partícula similar a virus.

13. La proteína de fusión recombinante de la reivindicación 12, en la que dicha proteína de fusión es una proteína recombinante producida en E. coli.

14. El polinucleótido de la reivindicación 11, o la proteína de fusión recombinante de la reivindicación 12 o 13, en la que dicha proteína de la cubierta es una proteína de la cubierta modificada genéticamente.

15. El polinucleótido de la reivindicación 11 o 14, o la proteína de fusión recombinante de una cualquiera de las reivindicaciones 12, 13 o 14, donde dichos uno o más antígenos foráneos comprenden un epítopo antigénico del virus de la hepatitis C o un epítopo antigénico de Salmonella typhii.

16. Una partícula similar al Virus del Mosaico de la Papaya (PapMV) que comprende una pluralidad de proteínas de fusión recombinantes, comprendiendo cada una de dichas proteínas de fusión recombinantes proteína de la cubierta de PapMV y uno o más antígenos foráneos fusionados al extremo C-terminal de dicha proteína de la cubierta, donde dichas proteínas de fusión recombinantes son capaces de ensamblarse para formar una partícula similar a virus, y

donde la partícula similar a virus es capaz de actuar como un adyuvante.

17. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10, o la partícula similar al virus PapMV de la reivindicación 16, para usarse como una vacuna en un animal que lo necesita.

18. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10, o la partícula similar al virus PapMV de la reivindicación 16, para usarse para inducir una respuesta inmunitaria en un animal que lo necesita.

19. La composición o la partícula similar al virus PapMV de acuerdo con la reivindicación 18 para el uso de acuerdo con la reivindicación 18, para administración parenteral, entérica u oral a dicho animal.

20. Uso de la composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10, o la VLP PapMV de la reivindicación 16, en la fabricación de un medicamento.

21. El uso de acuerdo con la reivindicación 20, en el que dicho medicamento es una vacuna.

22. El uso de acuerdo con la reivindicación 20 o 21, en el que dicho medicamento es para inducir una respuesta inmunitaria en un animal que lo necesita.

23. La composición o la partícula similar al virus PapMV de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 17, 18 o 19 para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 17, 18 o 19, o el uso de acuerdo con la reivindicación 22, donde el animal es un ser humano.

24. Un Virus del Mosaico de la Papaya (PapMV) o una partícula similar al virus PapMV que comprende proteína de la cubierta de PapMV, siendo dicha proteína de la cubierta capaz de ensamblarse para formar dicha partícula similar a virus, para usarse como un adyuvante de la vacunación para potenciar una respuesta inmunitaria a uno o más antígenos foráneos que no están unidos a dicho PapMV o a dicha VLP PapMV o están fusionados o unidos covalentemente al extremo C-terminal de la proteína de la cubierta de dicho PapMV o dicha VLP PapMV en un animal que lo necesita.

25. El PapMV o partícula similar al virus PapMV de acuerdo con la reivindicación 24 para el uso de acuerdo con la reivindicación 24, donde dicha partícula similar al virus PapMV comprende proteína de la cubierta modificada genéticamente.

26. El PapMV o partícula similar al virus PapMV de acuerdo con la reivindicación 24 o 25 para el uso de acuerdo con la reivindicación 24 o 25, donde dicha respuesta inmunitaria es una respuesta inmunitaria sistémica.

27. El PapMV o partícula similar al virus PapMV de acuerdo con la reivindicación 24 o 25 para el uso de acuerdo con la reivindicación 24 o 25, donde dicha respuesta inmunitaria es una respuesta inmunitaria humoral, una respuesta inmunitaria celular o una combinación de las mismas.

28. El PapMV o partícula similar al virus PapMV de acuerdo con la reivindicación 24 o 25 para el uso de acuerdo con la reivindicación 24 o 25, donde dicha respuesta inmunitaria es una respuesta de memoria de anticuerpos de larga duración.

29. El PapMV o partícula similar al virus PapMV de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 24, 25, 26, 27 o 28 para el uso de acuerdo con la reivindicación 24, 25, 26, 27 o 28, donde dicho PapMV o partícula similar al virus PapMV es para administración parenteral, entérica u oral a un animal.

30. El PapMV o partícula similar al virus PapMV de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 24, 25, 26, 27, 28 o 29 para el uso de acuerdo con la reivindicación 24, 25, 26, 27, 28 o 29, donde dichos uno o más antígeno foráneos son inmunógenos que tienen más de una especificidad.

31. El PapMV o partícula similar al virus PapMV de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 24, 25, 26, 27, 28, 29 o 30 para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 24 a 30, donde dichos uno o más antígeno foráneos proceden de uno o más virus, bacterias o parásitos.

32. El PapMV o partícula similar al virus PapMV de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 o 31 para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 24 a 31, donde dichos uno o más antígeno foráneos comprenden un epítopo antigénico de hepatitis C o un epítopo antigénico de Salmonella typhii.

33. El PapMV o partícula similar al virus PapMV de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 o 32 para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 24 a 32, donde dichos uno o más antígeno foráneos y dicho PapMV o partícula similar al virus PapMV son para coadministración a dicho animal.

34. El PapMV o partícula similar al virus PapMV de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 o 32 para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 24 a 32, donde dicho PapMV o partícula similar al virus PapMV es para administración a dicho animal antes o después de la administración de dichos uno o más antígenos foráneos.

35. El PapMV o partícula similar al virus PapMV de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32 o 33 para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 24 a 33, donde dichos uno o más antígenos foráneos están fusionados o unidos covalentemente al extremo C-terminal de la proteína de la cubierta de dicho PapMV o partícula similar al virus PapMV.

36. El PapMV o partícula similar al virus PapMV de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32 o 33 para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 24 a 33, donde dichos uno o más antígenos foráneos están fusionados al extremo C-terminal de la proteína de la cubierta.

37. El PapMV o partícula similar al virus PapMV de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32 o 34 para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 24 a 32 o 34, donde dichos uno o más antígenos foráneos no están unidos a dicho PapMV o partícula similar al virus PapMV.

38. El PapMV o partícula similar al virus PapMV de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 o 37 para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 24 a 37, donde dicho animal es un ser humano.

39. El PapMV o partícula similar al virus PapMV de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 o 37 para el uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 24 a 37, donde dicho animal es un animal no humano.

40. Un método para producir una partícula similar al Virus del Mosaico de la Papaya (PapMV) in vitro, comprendiendo dicho método:

(a) expresar en una célula hospedadora E. coli una proteína de la cubierta de PapMV clonada fusionada por su extremo C-terminal a uno o más antígenos foráneos y

(b) permitir que la proteína de fusión de la cubierta expresada se ensamble para forma dicha partícula similar a virus, donde la partícula similar a virus es un adyuvante para potenciar una respuesta inmune a dichos uno o más antígenos foráneos en una animal que lo necesita, y donde dichos uno o más antígenos foráneos están dispuestos en la superficie externa de dicha partícula similar a virus.

41. El método de acuerdo con la reivindicación 40, donde dicha proteína de la cubierta es una proteína de la cubierta modificada genéticamente.