Un anticuerpo anti-glipicano 3 unido a una sustancia citotóxica para el uso en el tratamiento del cáncer

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a un anticuerpo anti-glipicano 3 unido a una sustancia citotóxica. ANTENCEDENTES DE LA INVENCIÓN

Se ha informado que la familia del glipicano se presenta como una nueva familia de proteoglicanos de heparán sulfato que están presentes en las superficies celulares. Hasta la fecha, se han presentado los 5 tipos de glipicanos (glipicano 1, glipicano 2, glipicano 3, glipicano 4 y glipicano 5) como miembros de la familia de los glipicanos. Estos miembros de la familia tienen proteínas nucleares de tamaño uniforme (aproximadamente 60 kDa), comparten secuencias de cisteína específicas y bien conservadas y se unen a las membranas celulares a través de anclajes de glicosil fosfatidil inositol (GPI).

Se ha identificado un gen "Dally" (con "división anormalmente retrasada") por medio de la selección de genes de una variante de Drosophila melanogaster que tiene un patrón de división celular anormal en el desarrollo del sistema nervioso central. Se sabe que el ADNc de "Dally" representa una fase de lectura abierta (ORF) que codifica un producto que tiene una secuencia que muestra homología (una homología del 24 al 26%) con un proteoglicano transmembrana (GRIP) de un vertebrado que contiene todas las características de un glipicano. Se ha sugerido que el gen dally interviene en la regulación del mecanismo del receptor de dpp (decapentaplegia). Esto sugiere que el glipicano de un mamífero puede regular la transducción de señales entre TGF y BMP. Se ha sugerido específicamente que el glipicano puede funcionar como un receptor común para algunos de los factores de crecimiento de unión a heparina (por ejemplo, EGF, PDGF, BMP2 y FGF).

Se ha aislado glipicano 3 como un transcrito en condiciones de regulación del desarrollo en intestino de rata (Filmus, J., Church, J. G., y Buick,

R.n. (1988) Mol. Cell Biol.8, 4243-4249), y después se ha identificado como OCT-5, un proteoglicano de heparán sulfato unido a GPI de la familia de los glipicanos, que tiene una proteína nuclear con un peso molecular de 69 kDa (Filmus, J., Shi, W., Wong, Z. M y Wong, M.J. (1995) Biochem. J. 311, 561565). También en humanos se ha aislado un gen que codifica glipicano 3 como MXR-7 a partir de una línea celular de cáncer gástrico humano (Hermann Lage el al., Gene 188 (1997) 151-156). Se ha notificado que el glipicano 3 forma un complejo proteína-proteína con un factor de crecimiento 2 semejante a insulina para regular la acción del factor de crecimiento (Pilia, G. el al, (1996) Nat. Genet. 12, 241-247). Este informe sugiere que el glipicano 3 no siempre interacciona con el factor de crecimiento que tiene la cadena de heparán sulfato.

Existe un informe que sugiere que el glipicano 3 puede utilizarse como un marcador de cáncer hepático (Hey-Chi Hsu el al., CANCER RESEARCH 57, 5179-5184 (1997). Sin embargo, no hay ningún descubrimiento que indique una relación clara entre el glipicano 3 y la proliferación de células de carcinoma.

Además, se ha sugerido que el glipicano puede funcionar como un receptor para endostatina que puede actuar como un inhibidor de la vascularización (Molecular Cell (2001), 7, 811-822). Sin embargo, todavía no se ha esclarecido la relación entre esta función y la proliferación celular.

Como se ha descrito arriba, se ha sugerido la implicación del glipicano 3 en la proliferación celular. Sin embargo, no se conoce el mecanismo de proliferación celular y similar, y nunca se ha intentado la aplicación del glipicano 3 para la regulación de la proliferación celular. SUMARIO DE LA INVENCIÓN

Un objeto de la presente invención es proporcionar un inhibidor del crecimiento celular que contenga un anticuerpo anti-glipicano 3 como ingrediente activo.

Como resultado de estudios profundos, los presentes inventores han completado la presente invención por medio del descubrimiento de que el anticuerpo anti-glipicano 3 ejerce actividad inhibidora de la proliferación celular por ADCC (citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo) y actividad CDC (citotoxicidad dependiente de complemento). Además, también se ha pronosticado que los anticuerpos anti-glipicano 3 ejercen actividad inhibidora de la proliferación celular por inhibición de la acción de un factor de crecimiento. Además, los anticuerpos anti-glipicano 3 también pueden ejercer actividad inhibidora de la proliferación celular por medio de la unión a sustancias citotóxicas tales como un isótopo radiactivo, un agente

quimioterapéutico o una toxina derivada de bacterias. La presente invención es como sigue:

(1) Un anticuerpo anti-glipicano 3 unido a una sustancia citotóxica para el uso en el tratamiento del cáncer.

(2) Un anticuerpo (1), donde el cáncer es un carcinoma.

(3) Un anticuerpo de (1), donde el cáncer se selecciona de cáncer hepático, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de próstata, leucemia, linfoma y cáncer pancreático

(4) Un anticuerpo de (3), donde el cáncer es cáncer hepático.

(5) Un anticuerpo de (1) a (4), donde la sustancia citotóxica se selecciona de un isótopo radiactivo, un agente quimioterapéutico y una toxina derivada de bacterias.

(6) Un anticuerpo de (5), donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo humanizado o un anticuerpo quimérico.

(7) Un anticuerpo de (5), donde el anticuerpo es un fragmento de un anticuerpo.

(8) Un anticuerpo de (7), donde el fragmento se selecciona de Fab, F(ab')2 , Fv y un Fv monocatenario.

(9) Un anticuerpo de uno cualquiera de (1) a (4), donde el anticuerpo es un anticuerpo biespecífico, en el que un sitio de unión al antígeno reconoce a un glipicano 3.

(10) Un anticuerpo de (9), donde otro sitio de unión al antígeno reconoce una sustancia citotóxica.

(11) Un anticuerpo de (10), donde la sustancia citotóxica se selecciona de un isótopo radiactivo, un agente quimioterapéutico y una toxina derivada de bacterias.

(12) Un anticuerpo de uno cualquiera de (1) a (11), que tiene actividad citotóxica contra células de cáncer hepático.

(13) Un anticuerpo de (12), que tiene actividad citotóxica contra una línea celular de cáncer hepático HuH-7.

(14) Una preparación farmacéutica que comprende un anticuerpo antiglipicano 3 como se define en cualquiera de (1) a (13) y un vehículo y aditivo farmacéuticamente aceptables.

La presente invención se describirá con detalle más adelante.

La presente invención es un inhibidor del crecimiento celular que contiene un anticuerpo anti-glipicano unido a una sustancia citotóxica como un ingrediente activo. En particular, la presente invención es un inhibidor del crecimiento celular que contiene el anticuerpo anti-glipicano unido a una sustancia citotóxica como un ingrediente activo que puede usarse para la terapia contra el cáncer.

Los ejemplos del anticuerpo anti-glipicano 3 para su uso en la presente invención incluyen un anticuerpo conocido tal como un anticuerpo humanizado, un anticuerpo humano (documento WO 96/33735), un anticuerpo quimérico (Publicación de la Patente JP (Kokai) Nº 4-228089 A (1992)) o un anticuerpo de ratón, así como anticuerpos de la presente invención. Además, un anticuerpo puede ser un anticuerpo policlonal y preferentemente es un anticuerpo monoclonal.

El anticuerpo anti-glipicano 3 que se usa en la presente invención puede tener cualquier origen, puede ser de cualquier tipo (monoclonal o policlonal) y puede estar en cualquier forma, siempre que sea capaz de inhibir la proliferación celular.

1. Anticuerpo anti-glipicano 3

El anticuerpo anti-glipicano 3 que se usa en la presente invención puede obtenerse por medios conocidos como un anticuerpo monoclonal o policlonal. Un anticuerpo anti-glipicano 3 particularmente preferido usado en la presente invención es un anticuerpo monoclonal procedente de un mamífero. Los ejemplos del anticuerpo monoclonal procedente de un mamífero incluyen un anticuerpo producido por un hibridoma y un anticuerpo producido por un hospedador transformado usando un vector de expresión que contiene el gen del anticuerpo por técnicas de ingeniería genética. Este anticuerpo se une a glipicano 3 para inhibir la proliferación celular.

Un ejemplo de dicho anticuerpo es un anticuerpo monoclonal producido por el clon de hibridoma de la presente invención.

2. Hibridoma productor de anticuerpos

Un hibridoma productor de anticuerpos monoclonales puede prepararse básicamente usando técnicas...

1. Un anticuerpo anti-glipicano 3 unido a una sustancia citotóxica para el uso en el tratamiento del cáncer.

2. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, donde el cáncer es un carcinoma.

3. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, donde el cáncer se selecciona de cáncer hepático, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de próstata, leucemia, linfoma y cáncer pancreático.

4. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 3, donde el cáncer es cáncer hepático.

5. Un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde la sustancia citotóxica se selecciona de un isótopo radiactivo, un agente quimioterapéutico y una toxina derivada de bacterias.

6. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 5, donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo humanizado o un anticuerpo quimérico.

7. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 5, donde el anticuerpo es un fragmento de un anticuerpo.

8. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 7, donde el fragmento se selecciona de Fab, F(ab')2 , Fv y un Fv monocatenario.

9. Un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde el anticuerpo es un anticuerpo biespecífico, en el que un sitio de unión al antígeno reconoce al glipicano 3.

10. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 9, donde otro sitio de unión al antígeno reconoce una sustancia citotóxica.

11. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 10, donde la sustancia citotóxica se selecciona de un isótopo radiactivo, un agente quimioterapéutico y una toxina derivada de bacterias.

5 12. Un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, que tiene actividad citotóxica contra células de cáncer hepático.

13. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 12, que tiene actividad citotóxica contra una línea celular de cáncer hepático HuH-7.

14. Una preparación farmacéutica que comprende un anticuerpo antiglipicano 3 como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 y un vehículo y aditivo farmacéuticamente aceptables.