Soluciones que tienen cantidades enzimáticamente permisivas de agentes de visualización y usos de las mismas.

Una solución que comprende una enzima proteolítica que es capaz de formar fibrina cuando reacciona con fibrinógeno,

y una concentración enzimáticamente permisiva de un agente de visualización, en donde la enzima proteolítica es trombina, caracterizada porque o:

(a) el mencionado agente de visualización es azul de metileno presente en la mencionada solución de trombina en un rango de concentración de desde 0,01 a 0,05%, y la mencionada solución de trombina teñida con azul de metileno está protegida de la luz; o

(b) el mencionado agente de visualización es índigo carmín presente en la mencionada solución de trombina en un rango de concentración de desde 0,01% a 0,02%.

Soluciones que tienen cantidades enzimáticamente permisivas de agentes de visualización y usos de las mismas La invención se refiere a soluciones que comprenden una composición de enzima proteolítica que es capaz de formar fibrina cuando reacciona con fibrinógeno, para su uso en un kit de adhesivo de fibrina y una formulación de adhesivo de fibrina que comprende una concentración enzimáticamente permisiva de un agente de visualización.

Antecedentes de la invención El adhesivo de fibrina es, por lo general, un producto de la sangre obtenido a partir de fuentes comerciales o determinados centros regionales de transfusión de sangre. Los componentes que se utilizan comúnmente en la preparación de adhesivos de fibrina son fibrinógeno, trombina, factor VIII, Factor XIII, fibronectina, vitronectina y factor de von Willebrand (vWF) .

El adhesivo de fibrina se forma por una reacción enzimática que implica, entre otras cosas, al fibrinógeno, a la trombina y al Factor XIII. La trombina convierte el fibrinógeno en fibrina por acción enzimática a una velocidad determinada por la concentración de trombina. El Factor XIII, se encuentra presente por lo general en el componente de fibrinógeno del adhesivo y es una enzima del sistema de coagulación de la sangre que reticula y estabiliza el coágulo de fibrina. Este proceso elude la mayoría de las etapas de la coagulación normal e imita su última fase. Determinados fabricantes añaden agentes antiproteolíticos a la formulación de adhesivo de fibrina (como se describe en el documento WO-A-93/05822) o eliminan específicamente el plasminógeno con el fin de detener o retrasar la fibrinólisis (como se describe en los documentos US-B-5.792.835 y US-B-7.125.569) .

Se han notificado numerosos usos del adhesivo de fibrina en diversos campos de la medicina, incluyendo el uso como sellador, agente hemostático, antiadherente y en una variedad de cirugías laparoscópicas. Sin embargo, los adhesivos de fibrina dan como resultado una película transparente que puede distinguirse en la cirugía abierta cuando la iluminación es óptima, pero que podría pasar inadvertida en determinadas cirugías laparoscópicas. Por lo tanto, resultaría ventajoso utilizar un adhesivo de fibrina teñido que permita al usuario evaluar el espesor del material aplicado y mejorar su visibilidad durante la cirugía.

En el documento US-B-7.009.034 se desvela una composición adecuada para recubrir un tejido de un paciente, que comprende polímeros, "reticuladores" de molécula pequeña que permanecen en el polímero reticulado y un agente de visualización. Los polímeros desvelados pueden ser sintéticos o naturales. Los polímeros naturales mencionados en el documento US-B-7.009.034 son colágeno, fibrinógeno, albúmina y fibrina, polisacáridos, o glicosaminoglicanos. En la descripción del documento US-B-7.009.034 no se dice nada acerca del Factor XIII y/o la trombina. Los Ejemplos demuestran que la adición de un agente de visualización a la composición del documento US-B-7.009.034 en una alta concentración del 1, 25% no provocaba ningún cambio inaceptable en los tiempos de gelificación. De acuerdo con la descripción, puede utilizarse en la mezcla final una concentración superior al 1, 25%, hasta el límite de solubilidad del agente de visualización.

Las siguientes solicitudes de patente no desvelan o sugieren ningún efecto no deseado de la adición de colorante sobre la actividad de la trombina.

En el documento US-A-2003/0077272 se desvelan geles proteínicos que tienen agentes de visualización. Los geles desvelados comprenden fibrinógeno, trombina y “reticuladores” de molécula pequeña, que permanecen en el polímero reticulado. En algunos ejemplos se mencionan posibles preparaciones de una composición de fibrinógeno y Factor XIII, que utiliza hidrogeles y la formación de adhesivo de fibrina por la trombina. En estos ejemplos se desvela la adición de un colorante fluorescente a la solución de fibrinógeno a una concentración del 0, 0002 al 0, 02% y no se dice nada sobre la concentración final de fibrina en el adhesivo después de la mezcla del fibrinógeno con la solución de trombina.

En el documento US-A-2005/0049178 se desvela un agente para la oclusión de los vasos sanguíneos que comprende un colorante fisiológico seguro. El colorante permite teñir los vasos sanguíneos embolizados. Un agente preferente es una solución de fibrinógeno líquido que puede utilizarse en cooperación con una preparación de trombina líquida y Factor XIII. En la solicitud de patente no se desvela ninguna concentración concreta de colorante.

En el documento JP-A-2002104996 se desvela una composición hemostática que contiene un principio activo, tal como trombina, y una materia colorante que puede evitar un mal uso durante el tratamiento médico, es decir, la confusión entre las aplicaciones tópicas y las inyecciones. El colorante se encuentra presente en la composición en un amplio intervalo del 0, 0001 al 1%.

En el documento WO-A-91/04073 se desvela una terapia fotodinámica que utiliza un material que absorbe energía tal como un colorante y un agente de soldadura tal como fibrinógeno o adhesivo de fibrina para conseguir la soldadura de un tejido. De acuerdo con la invención, el colorante se considera un principio químicamente activo y la soldadura sólo se produce cuando se transmite una cantidad suficiente de energía al material que absorbe energía utilizando una fuente de energía tal como un láser.

El documento US-A-5.292.362 se refiere a una composición que incluye por lo menos un péptido natural o sintético y por lo menos un material de soporte que puede activarse mediante energía para formar una unión o recubrimiento. El fibrinógeno y la trombina se mencionan entre muchos péptidos que pueden emplearse como primer componente de la composición. El segundo componente contribuye con el primer componente produciendo un mayor grado de interrelación entre las moléculas del primer componente. De acuerdo con la descripción, la composición puede incluir también cromóforos endógenos o exógenos. Los colorantes se encuentran presentes en la composición en un amplio intervalo comprendido entre aproximadamente el 0, 01% en peso y el 50% en peso en base al peso total de la composición.

La presente invención proporciona una solución que comprende una enzima proteolítica que es capaz de formar fibrina cuando reacciona con fibrinógeno, y una concentración enzimáticamente permisiva de un agente de visualización, en donde la enzima proteolítica es trombina, caracterizada en que o:

(a) el mencionado agente de visualización es azul de metileno presente en la mencionada solución de trombina en un rango de concentración de desde 0, 01 a 0, 05%, y la mencionada solución de trombina teñida con azul de metileno está protegida de la luz; o

(b) el mencionado agente de visualización es índigo carmín presente en la mencionada solución de trombina en un rango de concentración de desde 0, 01% a 0, 02%.

Los adhesivos de fibrina se usan cada vez más en cirugía para reducir el sangrado, y las adhesiones, para sellar o rellenar superficies y/o mejorar la curación de las heridas. Las formulaciones de adhesivo de fibrina hasta la fecha son incoloras; por lo tanto aplicar la preparación al sitio de supuración sigue siendo difícil de controlar. La adición de un agente de visualización mejora las cualidades de focalización de la aplicación del adhesivo de fibrina, por ejemplo, simplifica localizar el área de aplicación, permite al usuario evaluar el grosor del material aplicado y mejora la visibilidad del material aplicado.

Sin embargo, se ha descubierto que la adición de concentraciones crecientes de agentes de visualización a la formulación de adhesivo de fibrina afecta a la actividad de la trombina.

También, se ha descubierto que diferentes agentes de visualización afectaron de forma diferente a la actividad de coagulación de la trombina o a la formación de coágulos.

La presente invención resuelve este problema ya que el agente de visualización se añade a una concentración que es permisiva para la actividad de la trombina. De acuerdo con la invención el agente de visualización se añade a la solución de trombina a una concentración que es lo suficientemente baja para ser enzimáticamente permisiva pero que es suficiente para teñir de forma clara el sitio de aplicación de una manera tal que el área puede ser localizada, el grosor del material aplicado puede ser evaluado y/o el material aplicado puede distinguirse.

Las soluciones de la presente invención pueden usarse en un kit de adhesivo de fibrina para la aplicación a una superficie de una parte del cuerpo... [Seguir leyendo]

1. Una solución que comprende una enzima proteolítica que es capaz de formar fibrina cuando reacciona con fibrinógeno, y una concentración enzimáticamente permisiva de un agente de visualización, en donde la enzima proteolítica es trombina, caracterizada porque o:

(a) el mencionado agente de visualización es azul de metileno presente en la mencionada solución de trombina en un rango de concentración de desde 0, 01 a 0, 05%, y la mencionada solución de trombina teñida con azul de metileno está protegida de la luz; o

(b) el mencionado agente de visualización es índigo carmín presente en la mencionada solución de trombina en un rango de concentración de desde 0, 01% a 0, 02%.