Péptidos con permeabilidad celular inhibidores de la ruta de transducción de señales de la JNK.

Utilización de cualquiera de los péptidos que incluyen cualquiera de las secuencias de aminoácidos seleccionadas de entre las SEQ ID NOs:

3, 4, 6 y 22, o seleccionándose cualquiera de las secuencias de aminoácidos de entre las SEQ ID NOs: 14-16 y 24-26, o de péptidos que son homólogos en al menos un 95% a estos péptidos, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno neuronal asociado a un evento excitotóxico debido a un daño o ataque cerebral traumático o a muerte neuronal derivada de un ataque epilético.

Péptidos con permeabilidad celular inhibidores de la ruta de transducción de señales de la JNK

CAMPO DE LA INVENCIÓN

En general, esta invención se refiere a inhibidores de la proteína-quinasa y, de forma más específica, a inhibidores de la proteína-quinasa c-Jun amino terminal quinasa.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La quinasa c-Jun amino terminal (JNK) es un miembro del grupo activado por estrés de las proteínas quinasas mitogeno-activadas (MAP) . Estas quinasas están implicadas en el control del crecimiento y de la diferenciación celular, y, en general, en la respuesta de las células a los estímulos ambientales. La ruta de transducción de señales de la JNK es activada en respuesta al estrés ambiental y mediante varios tipos de receptores de la superficie celular. Estos receptores pueden incluir los receptores de citoquinas, receptores de serpentinas y receptor de la tirosina-quinasa. En las células de mamíferos, la JNK está involucrada en procesos biológicos tales como la transformación oncogénica y en la mediación de respuestas adaptivas al estrés ambiental. La JNK se ha asociado también a la modulación de las respuestas inmunes, incluidas la maduración y diferenciación de las células inmunes, así como a la muerte celular programada en células identificadas como para ser destruidas por el sistema inmune.

La WO 98/44106 describe la identificación y caracterización del islote cerebral I (IB 1) humano y de rata, un activador a transcripcional implicado en el control génico de GLUT2 e insulina mediante la interacción con elementos homólogos cis-regulatorios de los promotores de GLUT2 e insulina. El ADNc de IB1 de rata codifica una proteína de 714 aminoácidos y el ADNc humano de IB1 una proteína de 711 aminoácidos. Se describe el uso de polipéptidos, ácidos nucleicos, agonistas y antagonistas de IB1 en el tratamiento o el diagnóstico de la diabetes, de enfermedades neurológicas como demencia y/o enfermedad de Parkinson, la inhibición/promoción de la apoptosis y el cáncer.

La WO 98/49188 describe la proteína 1 interactuando con JNK (JIP-1) , un inhibidor de la proteína JNK1 y métodos para tratar un estado patológico o para prevenir la aparición de un estado patológico en un paciente mediante la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de polipéptidos, péptidos, péptidos miméticos o ácidos nucleicos de JIP-1.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se base en parte en el descubrimiento de péptidos que son inhibidores eficaces de las proteínas JNK. Los péptidos mencionados aquí como inhibidores peptídicos de JNK disminuyen los efectos proliferativos en las células quot;aguas abajoquot; de la quinasa c-Jun amino terminal (JNK) .

En consecuencia, la invención incluye péptidos inhibidores de JNK (“péptidos JNKI”) , así como péptidos quiméricos que incluyen un inhibidor peptídico de JNK ligado a un péptido de tráfico que se puede utilizar para dirigir un péptido en el que está presente hacia un lugar celular deseado. La secuencia de tráfico se puede utilizar para dirigir el transporte del péptido a través de la membrana plasmática. Alternativa o adicionalmente, el péptido de tráfico se puede utilizar para dirigir el péptido hacia un lugar intracelular, tal como el núcleo.

Los péptidos inhibidores de JNK pueden estar presentes como polímeros de D-aminoácidos.

La invención además proporciona péptidos para su uso en un método para prevenir o tratar la muerte neuronal o lesiones cerebrales en un sujeto. El método incluye administrar al sujeto péptidos bioactivos con permeabilidad celular que previenen el daño a las neuronas o la apoptosis neuronal. Un péptido bioactivo con permeabilidad celular es, por ejemplo, un péptido inhibidor de JNK (quot;JNKIquot;) . Preferentemente, el péptido bioactivo con permeabilidad celular tiene las SEQ ID NO: 3, 4, 6 o 22.

La muerte neuronal o las lesiones cerebrales están provocadas por una isquemia cerebral. Así, en un aspecto, el péptido se administra antes de que el sujeto sufra un evento isquémico. En otro aspecto, el péptido se administra después de que el sujeto sufre un evento isquémico. El evento isquémico es, por ejemplo, agudo o crónico.

La muerte neuronal o las lesiones cerebrales están causadas por otros mecanismos excitotóxicos. Así, en un aspecto, el péptido se administra antes de que el sujeto experimente un mecanismo excitotóxico. En otro aspecto, el péptido se administra después de que el sujeto experimenta un mecanismo excitotóxico. El mecanismo excitotóxico puede ser, por ejemplo, un daño cerebral isquémico/hipóxico, daños cerebrales traumáticos, muerte neuronal derivada de ataques epilépticos y diversos trastornos neurodegenerativos, como la Enfermedad de Alzheimer.

En algunos aspectos, la administración de los péptidos puede realizarse mediante cualquier vía de administración seleccionada de entre administración intraauricular, intraperitoneal, nasal, intravenosa, oral y en parche.

Entre las ventajas proporcionadas por la invención, una de ellas consiste en que los péptidos inhibidores de JNK son pequeños y se pueden producir fácilmente en cantidades masivas y con gran pureza. Los péptidos inhibidores son también resistentes a la degradación intracelular y son escasamente inmunogénicos. En consecuencia, los péptidos se adaptan bien a aplicaciones in vitro e in vivo en las cuales se desea la inhibición de la expresión de JNK.

Salvo definido de otro modo, todos los términos técnicos y científicos utilizados aquí tienen el mismo significado que el entendido comúnmente por un especialista en la técnica a la que pertenece esta invención. Aunque en la práctica o pruebas de la presente invención se pueden utilizar métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos aquí, se describen a continuación los métodos y materiales adecuados. Además, los materiales, métodos y ejemplos son sólo ilustrativos y no pretenden ser limitativos.

Otras características y ventajas de la invención se evidenciarán a partir de la siguiente descripción detallada y reivindicaciones.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

Fig. 1A-C: diagramas que muestran alineaciones de regiones de dominios conservados de JBD en los factores de transcripción indicados.

Fig. 2: diagrama que muestra alineaciones de péptidos de fusión TAT-IB genéricos.

Fig. 3: histograma que describe la inhibición de la muerte de células-β por un dominio JBD de mínimo de 23 aminoácidos de longitud de IB1 en comparación con el dominio de JBD completo de 280 aminoácidos.

Fig. 4: es una ilustración que demuestra los efectos de los péptidos TAT, TAT-IB1 y TAT-IB2 sobre la fosforilación de las JNKs recombinantes. El panel A muestra la inhibición de la fosforilación de c-Jun, ATF2 y Elk1 por las JNKs recombinantes in vitro. El panel B muestra experimentos dosis-respuesta similares al Panel A.

Fig. 5: histograma que describe la inhibición de la fosforilación de L-TAT-IB por JNKs recombinantes. El panel A muestra la inhibición de L-TAT-IB de la fosforilación de c-Jun, ATF2 y Elk1 por las JNKs recombinantes in vitro en presencia de MKK4. El panel B muestra experimentos dosis-respuesta similares con MKK7.

Fig. 6: es una ilustración que demuestra la inhibición de la fosforilación de c-Jun por JNKs activadas.

Fig. 7: histograma que describe la inhibición a corto plazo de la muerte de células-β pancreáticas inducidas por IL-1β por los péptidos L-TAT-IB.

Fig. 8: histograma que describe la inhibición a corto plazo de la muerte de células-β pancreáticas inducidas por IL-1β por los péptidos D-TAT-IB.

Fig. 9: histograma que describe la inhibición a largo plazo o la muerte de células-β pancreáticas inducidas por IL-1β por los péptidos L-TAT-IB1 y D-TAT-IB1.

Fig. 10: histograma que describe la inhibición de la muerte de las células WiDr de cáncer de colón humano inducida por irradiación por los péptidos L-TAT-IB1 y D-TAT-IB1.

Fig. 11: es una ilustración de la modulación de la actividad de la quinasa JNK por los péptidos L-TAT, TAT-IB1 y D-TAT-IB1.

Fig. 12: gráficos que describen los efectos protectores de los péptidos TAT-IB1 en ratones. El panel A muestra el efecto de la irradiación sobre el peso. El panel B muestra el efecto de la irradiación sobre un estado de edema y eritema.

Fig. 13: describe el efecto protector de D-JNK1 sobre la pérdida de audición inducida por ruido. El panel A muestra una descripción esquemática del experimento, el panel B muestra un gráfico de la pérdida de audición, los paneles C y D describen... [Seguir leyendo]

1. Utilización de cualquiera de los péptidos que incluyen cualquiera de las secuencias de aminoácidos seleccionadas de entre las SEQ ID NOs: 3, 4, 6 y 22, o seleccionándose cualquiera de las secuencias de aminoácidos de entre las SEQ ID NOs: 14-16 .

2. 26, o de péptidos que son homólogos en al menos un 95% a estos péptidos, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno neuronal asociado a un evento excitotóxico debido a un daño o ataque cerebral traumático o a muerte neuronal derivada de un ataque epilético 2. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque el péptido se administra por cualquier vía de administración seleccionada de entre el grupo consistente en la administración intraauricular, intraperitoneal, nasal, intravenosa, oral y parche.

3. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones a o 2, caracterizada porque el péptido se selecciona de la secuencia de aminoácidos según la SEQ ID NO: 22 o 24 y péptidos que tienen al menos un 95% de identidad de secuencia con estos péptidos.

HFXHQFLDV3HSW¯GLFDV+XPDQDVGH5DWµQ\GH5DWD HFXHQFLDV*HQ«ULFDV+XPDQDVGH5DWµQ\GH5DWD

Efectos del Constructo GFP-JBD23 sobre la Apoptosis de Células-β Pancreáticas

CÉLULAS APOPTÓTICAS (%)

Efectos de los Péptidos TAT-IB sobre la Fosforilación Mediada por JNK

Efectos de los Péptidos TAT-IB sobre la Fosforilación Mediada por JNK

Inhibición de la Fosforilación de L-TAT-IB por JNKs Recombinantes

Inhibición In Vivo de la Fosforilación de c-Jun por los Péptidos TAT-IB

Supresión de la Fosforilación del Factor de Transcripción JNK por los Péptidos L-TAT-IB1

Radioprotección contra la Radiación Ionizante por los Péptidos TAT-IB1

Peso Edema + Eritema LDH (unidades relativas)

Volumen de la lesión (mm3) LESIÓN (% del hemisferio)