Diferenciación de células madre embriónicas humanas.

Un método para diferenciar células madre pluripotentes humanas en células que expresan marcadores característicos del linaje endocrino pancreático,

que comprende los pasos de:

a. Cultivo de células madre pluripotentes humanas en un sustrato de cultivo tisular recubierto con una matriz extracelular, en donde la matriz extracelular se selecciona del grupo que consiste en una preparación de membrana basal solubilizada extraída de células de sarcoma de ratón, preparación de membrana basal solubilizada reducida por factor de crecimiento extraída de células de sarcoma de ratón, laminina, fibronectina y suero humano;

b. Diferenciación de las células madre pluripotentes humanas en células que expresan marcadores característicos del linaje endodérmico definitivo, tratando las células madre pluripotentes humanas con 1 pg/ml a 100 μg/ml de activina A y 1 ng/ml a 1000 ng/ml de Wnt 3a en un primer medio de cultivo durante 1 a 3 días, seguido de cultivo de células madre pluripotentes humanas con 1 pg/ml de activina A y, opcionalmente, 1 ng/ml a 1000 ng/ml de Wnt-3a en un segundo medio de cultivo durante 1 día a 4 días;

c. Diferenciación de las células que expresan marcadores característicos del linaje endodérmico definitivo en células que expresan marcadores característicos del linaje endodérmico pancreático, tratando las células que expresan marcadores característicos del linaje endodérmico definitivo con 1 nM a 1 mM de ácido retinoico y 50 pg/ml a 50 pg/ml de al menos un factor de crecimiento de fibroblastos seleccionado del grupo que consiste en FGF-2, FGF-4 y FGF-10 durante 1 a 3 días; y

d. Diferenciación de las células que expresan marcadores característicos del linaje endodérmico pancreático en células que expresan marcadores característicos del linaje endocrino pancreático, tratando las células que expresan marcadores característicos del linaje endodérmico pancreático con 0,1 μM a 100 μM de L-685,458 durante 3 a 5 días; en donde el paso b comprende opcionalmente además el tratamiento de las células con 1 nM a 1000 nM de un inhibidor de GSK-3B, y en el que el inhibidor de GSK-3B es un inhibidor de GSK-3B XI o un inhibidor de GSK-3B IX.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2007/067645.

Solicitante: LIFESCAN, INC..

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 1000 GIBRALTAR DRIVE MILPITAS, CA 95035 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: Rezania,Alireza, XU,JEAN.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12N5/071 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células o tejidos de vertebrados, p.ej. células o tejidos humanos.

PDF original: ES-2725601_T3.pdf

 

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