Cuantificación de muestras de títulos altos por PCR digital.

Un método de cuantificación de una secuencia de ácido nucleico diana en una muestra,

que comprende:

a) separar dicha muestra en una pluralidad de particiones, en la que dicha muestra comprende: una mezcla de moléculas de ácido nucleico, reactivos de amplificación, reactivos de detección, y una secuencia de estándar interno que tiene las mismas secuencias de unión a cebador como la secuencia diana;

en el que la secuencia de estándar interno se añade a la muestra de tal manera que una parte de dicha pluralidad de particiones contiene cero moléculas de estándar interno,

en el que dicha pluralidad de particiones comprende, en promedio, 2 o más moléculas diana de ácido nucleico por partición, y en el que dicha pluralidad de particiones es un conjunto de gotitas que tiene un volumen medio de menos de aproximadamente un microlitro (μL);

b) tratar dicha pluralidad de particiones bajo condiciones de amplificación de manera que dichas secuencias diana se amplifican para producir amplicones diana detectables, y dichas secuencias de estándar interno se amplifican para producir amplicones estándar detectables internos, siendo dichos amplicones detectables y dichos amplicones detectables de estándar interno diferencialmente detectables;

c) determinar el cambio en la amplificación de dicha secuencia diana en respuesta a la competencia de cebador de dicha secuencia de estándar interno; y

d) calcular el número inicial de secuencias diana para la muestra.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2011/067366.

Solicitante: Abbott Molecular Inc.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 1300 E. Touhy Avenue Des Plaines, IL 60018 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: CLEMENS, JOHN M., SHAIN, ERIC, B..

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/68 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2621347_T3.pdf

 

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