Cuantificación de muestras de títulos altos por PCR digital.
Un método de cuantificación de una secuencia de ácido nucleico diana en una muestra,
que comprende:
a) separar dicha muestra en una pluralidad de particiones, en la que dicha muestra comprende: una mezcla de moléculas de ácido nucleico, reactivos de amplificación, reactivos de detección, y una secuencia de estándar interno que tiene las mismas secuencias de unión a cebador como la secuencia diana;
en el que la secuencia de estándar interno se añade a la muestra de tal manera que una parte de dicha pluralidad de particiones contiene cero moléculas de estándar interno,
en el que dicha pluralidad de particiones comprende, en promedio, 2 o más moléculas diana de ácido nucleico por partición, y en el que dicha pluralidad de particiones es un conjunto de gotitas que tiene un volumen medio de menos de aproximadamente un microlitro (μL);
b) tratar dicha pluralidad de particiones bajo condiciones de amplificación de manera que dichas secuencias diana se amplifican para producir amplicones diana detectables, y dichas secuencias de estándar interno se amplifican para producir amplicones estándar detectables internos, siendo dichos amplicones detectables y dichos amplicones detectables de estándar interno diferencialmente detectables;
c) determinar el cambio en la amplificación de dicha secuencia diana en respuesta a la competencia de cebador de dicha secuencia de estándar interno; y
d) calcular el número inicial de secuencias diana para la muestra.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2011/067366.
Solicitante: Abbott Molecular Inc.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 1300 E. Touhy Avenue Des Plaines, IL 60018 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: CLEMENS, JOHN M., SHAIN, ERIC, B..
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
PDF original: ES-2621347_T3.pdf
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