Pipeta, aparato y conjunto para medición de luz y método.

Una pipeta (12) que comprende una parte de cuerpo (14) para aspirar una muestra fluida (36) al interior de una punta (16) de la pipeta cuando esta se fija a la misma,

al menos una fuente de luz (26), dispuesta dentro de la parte de cuerpo (14), de tal manera que la al menos una fuente de luz (26) proporciona un camino óptico de luz que pasa a través de la muestra (36) en una dirección esencialmente a lo largo del eje longitudinal de la punta (16) de la pipeta.

Pipeta, aparato y conjunto para medición de luz y método Campo técnico

La presente invención se refiere a una pipeta para uso en análisis espectrofotométricos, asi como a un aparato y a un conjunto para la medición de la luz absorbida por una muestra líquida o emitida por esta. La presente invención también se refiere a un método para utilizar la pipeta, el aparato y el conjunto.

Técnica anterior

En los últimos años se ha desarrollado una gran cantidad de tecnología para el manejo de volúmenes de muestras líquidas. Las pipetas son herramientas de manejo de líquidos que se utilizan comúnmente en biología molecular así como en ensayos médicos. Las pipetas convencionales incluyen, generalmente, un cuerpo cilindrico alargado que tiene, en un extremo, una punta de pipeta montada coaxialmente, un pistón cilindrico en el interior de una cavidad del cuerpo de la pipeta, así como un mecanismo de accionamiento destinado a accionar el pistón. El mecanismo de accionamiento puede hacer que el pistón lleve a cabo una carrera ascendente, de tal manera que se aspire líquido al interior de la punta de la pipeta, o una carrera descendente, de modo que se dispense líquido desde la punta de la pipeta.

En una amplia variedad de campos, se analizan muestras midiendo su absorbencia de la luz. Muestras biológicas tales como los ácidos nucleicos y las proteínas son analizadas de esta manera, por ejemplo, en el campo biotecnológico. En un espectrómetro, se dirige hacia una muestra luz que tiene una intensidad conocida en una variedad de longitudes de onda, la luz es detectada una vez que ha pasado a través de la muestra y es analizada en cuanto a la absorbencia, o grados de intensidad reducidos, de ciertas longitudes de onda de la luz. Esta información, conjuntamente con el espesor de la muestra, es utilizada para identificar y medir la concentración de sustancias en la muestra.

Pueden analizarse muestras que producen fluorescencia o luminiscencia midiendo su salida de luz. La medición de la intensidad o viveza de la fluorescencia o la luminiscencia emitida desde una muestra proporciona información acerca de las propiedades físicas o químicas de la muestra.

Es posible que las muestras biológicas estén disponibles tan solo en cantidades mínimas para su análisis y determinación cuantitativa. Para el análisis en un aparato de medición de luz, tal como un espectrómetro o un fluorómetro, la muestra que se ha de analizar está habitualmente contenida en una vasija, a la que se hace referencia como celda o cubeta, cuyos lados permiten el paso de las longitudes de onda que se requieren para caracterizar la muestra contenida en su interior. En un aparato del tipo descrito, un haz óptico de luz generalmente entra en la cubeta a través de un extremo transparente de la cubeta, y sale de la cubeta por el extremo opuesto de la misma. Las características del haz que emerge de la cubeta son entonces analizadas para determinar la composición del flujo a través del cual ha pasado el haz de luz y que está contenido en la cubeta. Puesto que el haz de luz tiene que pasar a través de la cubeta, el material transparente de la misma puede provocar imprecisiones en la determinación de la composición del fluido.

Por otra parte, debido al diminuto tamaño de las muestras analizadas en el aparato que se ha descrito, surgen problemas tales como una pérdida de muestra como consecuencia de la transferencia de la pipeta a la cubeta, el hecho de que el volumen de la muestra sea demasiado pequeño para el tamaño de la cubeta, la evaporación de la muestra durante el análisis, la recuperación de la muestra tras el análisis y la contaminación de la muestra después de su recuperación.

Es más, cuando una muestra que se ha de analizar tiene una alta densidad, puede ser necesario tomar medidas adicionales para reducir la densidad de la muestra antes de la medición de la luz, a fin de que pueda pasar suficiente luz desde la fuente de luz a través de la muestra para su detección por parte del fotodetector. Un ejemplo de medida conocida para reducir la densidad de la muestra es la dilución de la muestra antes de la medición de la luz. Por otra parte, cuando una muestra tiene una baja densidad, la intensidad de la luz que pasa a través de la muestra, procedente de la fuente de luz, puede ser demasiado alta para ser medida por el fotodetector.

En el documento EP-A-15425 se describe un aparato con una pipeta de medición de la absorbencia.

Existe, por tanto, la necesidad de aumentar la precisión de los análisis espectrofotométricos que se realizan en fluidos, especialmente líquidos, tales como líquidos puros, soluciones, dispersiones, soluciones coloidales o similares, particularmente en volúmenes minúsculos de líquido.

Compendio de la invención

La presente invención proporciona una pipeta, un aparato y un conjunto novedosos destinados a utilizarse en el análisis espectrofotométrico de una muestra fluida, así como un método para uso en los mismos, en los que se superen los problemas antes mencionados asociados con el análisis y la cuantificación de cantidades minúsculas de

la muestra fluida.

De acuerdo con un primer aspecto, la presente Invención proporciona una pipeta que comprende una parte de cuerpo para aspirar una muestra fluida al interior de una punta de la pipeta, cuando está fijada a la misma, de tal manera que la parte de cuerpo comprende al menos una fuente de luz que proporciona un camino óptico para la luz que pasa a través de la muestra en una dirección esencialmente a lo largo del eje longitudinal de la punta de la pipeta. Preferiblemente, la parte de cuerpo está configurada, de manera adicional, para descargar fluido a través de la abertura de admisión o no fijada de la punta de la pipeta.

La pipeta de acuerdo con el primer aspecto de la presente Invención puede incluir la punta de la pipeta, fijada a la parte de cuerpo. La fuente de luz se ha proporcionado, preferiblemente, dentro del cuerpo de la pipeta. Cuando la fuente de luz se proporciona en posición distante con respecto al cuerpo de la pipeta, preferiblemente, la luz procedente de la fuente de luz es guiada por medio de, por ejemplo, un cable o fibra óptica, hasta el extremo abierto de la punta de la pipeta, que está fijada al cuerpo de la pipeta, de tal manera que la luz pasa a través del interior de la punta de la pipeta.

La punta de la pipeta puede ser retenida de forma desmontable en la parte de cuerpo. De esta manera, la punta de la pipeta puede ser susceptible de retirarse de la parte de cuerpo para su desechado y sustitución. Alternativamente, la punta de la pipeta puede ser integral con la parte de cuerpo y puede adoptar la forma de una sonda de pipeta que tiene una punta integral que es lavada para su reutlllzaclón entre las recogidas de muestras con el fin de eliminar cualquier contaminación.

De acuerdo con un segundo aspecto, la presente Invención proporciona un método para medir la salida de luz desde una muestra fluida que produce luminiscencia, el cual comprende proporcionar una punta de pipeta o tubo capilar que tiene unos primer y segundo extremos abiertos, de tal manera que la muestra que se ha de analizar está contenida en su interior, y detectar la salida de luz desde al menos uno de los extremos abiertos de la punta de pipeta o tubo capilar.

Cuando la muestra de fluido es una que, cuando se Irradia con luz, absorbe la luz o experimenta fluorescencia, el método comprende además, preferiblemente, proporcionar una fuente de luz, permitir que la luz procedente de la fuente de luz entre en uno de los extremos abiertos de la punta de la pipeta o tubo capilar, a fin de que pase a través de la muestra contenida en su interior y salga de la punta de la pipeta o tubo capilar por su otro extremo abierto para su detección y análisis. La punta de la pipeta o tubo capilar es alargada y el camino de la luz pasa, preferiblemente, a través de la muestra contenida en la punta de la pipeta o tubo capilar, en una dirección esencialmente a lo largo del eje longitudinal de la punta de la pipeta o tubo capilar.

El método de acuerdo con la presente invención comprende adicionalmente, de preferencia, determinar la emisión o absorbencia de luz de la muestra de acuerdo con la intensidad de la luz detectada.

En el método de acuerdo con la presente invención, la punta de la pipeta es, preferiblemente, retenida en un cuerpo de pipeta durante el análisis de la muestra y el método, opcionalmente, comprende, de manera adicional, recargar el cuerpo de la pipeta durante el análisis de la muestra. En un método preferido, la fuente de luz se proporciona dentro del cuerpo de la pipeta.

El método de acuerdo con la presente invención, que comprende adicionalmente,... [Seguir leyendo]

1.- Una pipeta (12) que comprende una parte de cuerpo (14) para aspirar una muestra fluida (36) al interior de una punta (16) de la pipeta cuando esta se fija a la misma, al menos una fuente de luz (26), dispuesta dentro de la parte de cuerpo (14), de tal manera que la al menos una fuente de luz (26) proporciona un camino óptico de luz que pasa a través de la muestra (36) en una dirección esencialmente a lo largo del eje longitudinal de la punta (16) de la pipeta.

2.- Una pipeta (12) de acuerdo con la reivindicación 1, que incluye una punta (16) de pipeta, fijada a la porción de cuerpo (14).

3.- Una pipeta (12) de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que la fuente de luz (26) está dispuesta en el eje longitudinal de la parte de cuerpo (14).

4.- Una pipeta (12) de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que se ha dispuesto un paso (28, 64) dentro del cuerpo (14) de la pipeta a fin de dirigir luz procedente de la fuente de luz (26) hasta la punta (16) de la pipeta, opclonalmente de forma que el paso (28, 64) está revestido con un material reflectante de la luz.

5.- Una pipeta (12) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende adlclonalmente primeros medios de control para controlar la intensidad de la luz que entra en la punta (16) de la pipeta, y/o segundos medios de control para controlar la longitud de onda de la luz que entra en la punta (16) de la pipeta.

6.- Una pipeta (12) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende una pluralidad de fuentes de luz (26), de tal manera que cada fuente de luz (26) está dispuesta para irradiar luz de una intensidad y/o longitud de onda predeterminadas, opcionalmente de tal modo que la intensidad de la luz procedente de cada fuente de luz es controlable de forma independiente.

7.- Una pipeta (12) de acuerdo con la reivindicación 5, en la cual los primeros medios de control controlan la intensidad de la luz (i) variando la potencia eléctrica suministrada a la fuente de luz (26); o (ii) ajustando la distancia de la fuente de luz (26) con respecto a la muestra (36).

8.- Una pipeta (12) de acuerdo con la reivindicación 5, que comprende adicionalmente (i) una pantalla que tiene un diafragma variable dispuesto entre la muestra (36) y la fuente de luz (26), de tal manera que los primeros medios de control controlan la intensidad de la luz haciendo variar el tamaño del diafragma; o (ii) un obturador, dispuesto entre la muestra (36) y la fuente de luz (26), de modo que los primeros medios de control controlan la intensidad de la luz abriendo el obturador durante un periodo de tiempo predeterminado.

9.- Un aparato (11) para la medición de la luz procedente de una muestra fluida (36), de tal manera que el aparato (11) comprende una pipeta de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, y un fotodetector (48) para detectar luz de la muestra (36) suministrada como salida desde un extremo abierto (46) de la punta (16) de la pipeta.

1.- Un aparato (11) de acuerdo con la reivindicación 9, que comprende adicionalmente (i) medios de guía (66) de la salida de luz, destinados a guiar la luz suministrada como salida desde el extremo abierto (46) de la punta (16) de la pipeta, hasta el fotodetector (48); y/o (¡I) medios para recargar el cuerpo (14) de la pipeta durante la detección de la luz.

11.- Un aparato (11) de acuerdo con la reivindicación 9 o la reivindicación 1, que comprende adlclonalmente un soporte para sujetar la pipeta (12) en su posición durante la medición de la luz, opclonalmente de tal manera que el soporte se ha configurado para sujetar una pluralidad de pipetas (12) para la detección simultánea de la luz suministrada como salida desde múltiples muestras (36).

12.- Un aparato (11) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, que comprende adlclonalmente un alojamiento (1) hermético al fluido, de tal manera que el espacio interior (38) del alojamiento (1) está en comunicación con el espacio Interno de la punta (16) de la pipeta durante su uso.

13.- Un aparato (11) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12, en el cual el eje longitudinal de la pipeta (12) se extiende en un plano esencialmente horizontal o esencialmente vertical durante su uso.

14.- Un aparato (11) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 13, que comprende adlclonalmente medios para medir la longitud de una columna de muestra situada dentro de la punta (16) de la pipeta, opclonalmente de tal manera que los medios comprenden una cámara digital (54).

15.- Un conjunto para medición de luz, que comprende una pipeta (12) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, así como medios de guía (66) de salida de luz, destinados a guiar la luz suministrada como salida desde un extremo abierto (46) de la punta (16) de la pipeta hasta un fotodetector (48).