Método y composición para un test rápido de viabilidad celular.

Método para controlar rápidamente una respuesta de estrés de una célula suspendida en un medio a un estresor y determinar la magnitud de la respuesta de estrés,

comprendiendo dicho método:

a) bajo condiciones adecuadas para controlar la tensión y/o la corriente, aplicar un campo eléctrico a una muestra de ensayo que comprende la célula suspendida en el medio o a una muestra de ensayo que comprende la célula sobre una perla de microcultivo suspendida;

b) controlar la tensión y/o la corriente;

c) permitir que un estresor afecte a la muestra de ensayo, eligiéndose el estresor entre un estresor aplicado antes de la aplicación del campo eléctrico, un estresor aplicado esencialmente de forma simultánea con dicha aplicación del campo eléctrico y un estresor aplicado después de la misma;

d) controlar una respuesta de impedancia inicial de la muestra de ensayo, consistiendo la respuesta de impedancia inicial de la muestra de ensayo en un cambio de impedancia de la muestra de ensayo durante el período de transición desde una primera medición de la impedancia de la muestra de ensayo aproximadamente en el momento de la aplicación del campo eléctrico hasta e inclusive una impedancia de la muestra de ensayo medida posteriormente, que es indicativa de la respuesta de estrés o ausencia de crecimiento, controlando así la respuesta de estrés de dicha célula al estresor; y

e) determinar el nivel de la respuesta de impedancia inicial de la muestra de ensayo, siendo el nivel de la respuesta de impedancia inicial de la muestra de ensayo una indicación de la magnitud de la respuesta de estrés de la célula, determinándose la magnitud de la respuesta de estrés de la célula al estresor;

comprendiendo dicho método adicionalmente: comparar matemáticamente el nivel de la respuesta de impedancia inicial de la muestra de ensayo determinado en el paso (e) con:

(i) un primer valor estándar que representa la respuesta de impedancia de una primera muestra de referencia que incluye el medio con o sin el estresor, estando la primera muestra de referencia desprovista de células; y/o

(ii) un segundo valor estándar que representa la respuesta de impedancia inicial de una segunda muestra de referencia que incluye una célula y el medio, siendo la célula de la muestra de referencia del mismo tipo y estando presente en la misma concentración que la célula en la muestra de ensayo, y estando la muestra de referencia desprovista del estresor; y determinar un valor para un Primer Perfil de Respuesta de Impedancia de la muestra de ensayo, estando basado el valor del Primer Perfil de Respuesta de Impedancia en la comparación matemática del nivel de la respuesta de impedancia inicial de la muestra de ensayo determinado en el paso (e) con el primer valor estándar y/o el segundo valor estándar, determinándose la respuesta de impedancia inicial mediante un control dentro de un período de aproximadamente 45 minutos desde la primera medida de impedancia.

Método y composición para un test rápido de viabilidad celular ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La contaminación e infección microbiana es uno de los mayores retos para la supervivencia y el bienestar de humanos y animales y, como tal, sigue consumiendo una enorme cantidad de recursos sociales. Un componente esencial del esfuerzo para combatir patógenos es evaluar la presencia y viabilidad de células procariotas y eucariotas. La mayor parte de los métodos comerciales capaces de evaluar la viabilidad celular se basan normalmente en el crecimiento celular para su determinación. Sin embargo, una limitación continua de estos métodos convencionales radica en la dependencia del tiempo necesario para multiplicar por dos la población celular y en la disponibilidad práctica de las condiciones de cultivo apropiadas. En especial en caso de células de crecimiento lento, los métodos basados en el crecimiento biológico para detectar cambios observables pueden requerir un tiempo considerable. Por consiguiente, los métodos existentes pueden ser ineficaces para aplicaciones en las que los retrasos se traducen en costes económicos y, en casos extremos, en vidas humanas. Incluso cuando los métodos de detección existentes son suficientes, una detección más rápida podría aumentar la eficiencia y reducir los costes.

El aumento de la resistencia de patógenos a los antibióticos ha conducido a un problema de salud pública mundial que se manifiesta en infecciones intratables en la población humana en general y en granjas. Aunque el problema es complejo, se sabe que el uso creciente de antibióticos ha creado presiones evolutivas selectivas con las que muchas especies de bacterias y protozoos infecciosos han desarrollado mecanismos de resistencia, haciendo que los antibióticos usuales recetados para tratar enfermedades ya no sean efectivos, lo que ha conducido a la propagación de cepas bacterianas resistentes a los antibióticos.

La mayoría de los métodos existentes para determinar la susceptibilidad de un patógeno a los antibióticos se basa también en la detección del crecimiento y depende exclusivamente del aumento de la biomasa debido a la división celular continua del patógeno en cultivo. Los métodos estándar de disposición en placas pueden requerir muchos días, o incluso semanas en caso de patógenos de crecimiento lento, para producir resultados de susceptibilidad a los fármacos. Los métodos de detección óptica, aunque requieren menos tiempo, siguen precisando de un tiempo significativo para que las células se desarrollen hasta un nivel detectable. Los retrasos en la obtención de resultados de las pruebas de susceptibilidad han conducido a la práctica clínica de prescribir empíricamente terapias para el tratamiento de infecciones con peligro para la vida. La incapacidad para identificar oportunamente células resistentes a compuestos antimicrobianos conduce prescribir terapias inapropiadas y, en consecuencia, a resultados desfavorables para el paciente. La aparición continua de cepas resistentes a los fármacos representa una amenaza a nuestra capacidad para tratar infecciones con peligro para la vida debido al uso creciente de fármacos ineficaces.

Existe una necesidad permanente de reducir el uso indiscriminado y no esencial de antibióticos con el fin de mejorar significativamente el pronóstico de los pacientes y también para reducir la propagación de bacterias resistentes a los antibióticos. Esta invención proporciona un método para identificar rápidamente patógenos resistentes a los antibióticos, reduciendo así la cantidad de antibióticos recetados innecesariamente.

La capacidad para detectar rápidamente y de forma fiable la presencia de células nocivas es importante para el uso seguro de numerosos productos médicos e industriales y para la puesta en práctica segura y eficiente de procedimientos médicos y procesos industriales. La rápida determinación de la calidad del agua durante situaciones de emergencia, como inundaciones y terremotos, el diagnóstico inmediato de pacientes con traumatismos, la selección de materias primas/equipos de proceso en la industria alimentaria, el control de calidad durante las fases de fabricación farmacéutica y el control de biologías y procesos de fermentación son sólo algunos ejemplos de las aplicaciones de esta invención.

Otro problema permanente está relacionado con el hecho de que la vida útil en almacenamiento de una unidad de plaquetas, un producto sanguíneo transfundido para controlar una hemorragia, es de solo cinco días. Para conservar su función fisiológica, las plaquetas deben almacenarse a temperatura ambiente. Estas condiciones son favorables para el crecimiento de muchas especies de bacterias contaminantes en las unidades almacenadas. Si no se detecta, este crecimiento podría conducir a infecciones post-transfusión y reacciones sépticas. Los métodos actualmente utilizados para la esterilidad de estos productos requieren un tiempo de 48 horas en el caso de las células de crecimiento rápido y considerablemente mayor para las células de crecimiento lento, hasta que las éstas se desarrollen a niveles detectables. Por consiguiente, la durabilidad efectiva de una unidad de plaquetas se reduce a únicamente tres días. Un método más rápido para identificar el crecimiento de bacterias contaminantes de crecimiento rápido y de crecimiento lento en plaquetas aumentaría la vida útil de las plaquetas y pondría menos presión en un recurso ya precioso.

La meningitis bacteriana es una infección que provoca inflamación de las meninges. Para reconocer enfermedades bacterianas en las que una demora en el comienzo del tratamiento puede representar un peligro para la vida, es esencial un diagnóstico rápido y eficaz. Un fallo en el diagnóstico y tratamiento temprano de la meningitis bacteriana

puede resultar en una morbilidad con complicaciones graves a largo plazo, incluyendo lesiones cerebrales, pérdida de audición, discapacidad intelectual y muerte. Cuando un paciente presenta síntomas de infección, el médico puede recetar un antibiótico para una infección bacteriana potencial antes de comenzar cualquier prueba. Existe un problema permanente relacionado con el hecho de que los métodos actualmente disponibles no permiten un cultivo eficaz de bacterias en líquido cefalorraquídeo obtenido de pacientes "previamente tratados", dificultando así la confirmación del diagnóstico bacteriano usando métodos de detección de crecimiento. La rapidez y fiabilidad en la detección del patógeno y la determinación de la susceptibilidad del patógeno a un medicamento son de suma importancia.

Un método desarrollado y utilizado para detectar con mayor rapidez la presencia de células viables consiste en la detección de la impedancla de muestras biológicas, que mide desviaciones metabólicas para controlar la proliferación celular y el crecimiento subsiguiente de la población. Históricamente, la detección de la Impedancla se ha utilizado como un análogo electrónico de las placas de Petri para controlar la proliferación celular y el crecimiento subsiguiente de la población. Los sistemas comerciales que utilizan este método normalmente miden la conductancia, la capacitancia, el vector de impedancia completo, es decir, los dos componentes resistivos y reactivos, y utilizan geometrías con umbrales de detección que requieren el desarrollo de un millón de Unidades Formadoras de Colonias por mililitro (16 CFU/ml) o más en el caso de las bacterias. Sin embargo, la obtención de un título tan alto requiere un tiempo considerable, en especial si las bacterias pertenecen a una especie de crecimiento lento.

En Caide Xiao, John H.T. Luong: "Assessment of cytotoxicity by emerging impedance spectroscopy", Toxicology and Applied Pharmacology 26 (25) 12-112, se desarrolla una técnica en línea y en continuo basada en la detección de la impedancia eléctrica de sustratos celulares para medir la concentración y la función de respuesta temporal de células V79 fibroblásticas expuestas a tóxicos.

En McCoy; Wang M H; E: "Use of electric cell-substrate impedance sensing as a tool for quantifying cytopathic effect in influenza A virus infected MDCK cells in real-time", JOURNAL OF VIROLOGICAL METHODS, 25121 Elsevier BV, NL - ISSN 166-934, se ilustra el uso de la detección de impedancia eléctrica de sustratos celulares (ECIS) para controlar el progreso del CPE debido a infección por el virus de la gripe A.

El documento US 22/86277 A1 describe un método para determinar la eficacia de un compuesto en el tratamiento de un sujeto infectado por un microbio, o un método para determinar la concentración mínima inhibidora de un agente antimicrobiano contra un microbio, incluyendo dicho método la medición de un parámetro eléctrico... [Seguir leyendo]

Método para controlar rápidamente una respuesta de estrés de una célula suspendida en un medio a un estresory determinar la magnitud de la respuesta de estrés, comprendiendo dicho método:

a) bajo condiciones adecuadas para controlar la tensión y/o la corriente, aplicar un campo eléctrico a una muestra de ensayo que comprende la célula suspendida en el medio o a una muestra de ensayo que comprende la célula sobre una perla de mlcrocultivo suspendida;

b) controlar la tensión y/o la corriente;

c) permitir que un estresor afecte a la muestra de ensayo, eligiéndose el estresor entre un estresor aplicado antes de la aplicación del campo eléctrico, un estresor aplicado esencialmente de forma simultánea con dicha aplicación del campo eléctrico y un estresor aplicado después de la misma;

d) controlar una respuesta de ¡mpedancla Inicial de la muestra de ensayo, consistiendo la respuesta de impedancia inicial de la muestra de ensayo en un cambio de ¡mpedancia de la muestra de ensayo durante el período de transición desde una primera medición de la impedancia de la muestra de ensayo aproximadamente en el momento de la aplicación del campo eléctrico hasta e inclusive una impedancia de la muestra de ensayo medida posteriormente, que es indicativa de la respuesta de estrés o ausencia de crecimiento, controlando así la respuesta de estrés de dicha célula al estresor; y

e) determinar el nivel de la respuesta de impedancia inicial de la muestra de ensayo, siendo el nivel de la respuesta de impedancia inicial de la muestra de ensayo una indicación de la magnitud de la respuesta de estrés de la célula, determinándose la magnitud de la respuesta de estrés de la célula al estresor;

comprendiendo dicho método adicionalmente: comparar matemáticamente el nivel de la respuesta de impedancia inicial de la muestra de ensayo determinado en el paso (e) con:

(i) un primer valor estándar que representa la respuesta de impedancia de una primera muestra de referencia que incluye el medio con o sin el estresor, estando la primera muestra de referencia desprovista de células; y/o

(ii) un segundo valor estándar que representa la respuesta de impedancia inicial de una segunda muestra de referencia que incluye una célula y el medio, siendo la célula de la muestra de referencia del mismo tipo y estando presente en la misma concentración que la célula en la muestra de ensayo, y estando la muestra de referencia desprovista del estresor; y determinar un valor para un Primer Perfil de Respuesta de Impedancia de la muestra de ensayo, estando basado el valor del Primer Perfil de Respuesta de Impedancia en la comparación matemática del nivel de la respuesta de impedancia inicial de la muestra de ensayo determinado en el paso (e) con el primer valor estándar y/o el segundo valor estándar,

determinándose la respuesta de impedancia inicial mediante un control dentro de un período de aproximadamente 45 minutos desde la primera medida de impedancia.

Método para detectar rápidamente la presencia o ausencia de una célula mediante el control de una respuesta de estrés de la célula si ésta está presente, o la ausencia de la respuesta de estrés si dicha célula no está presente o está muerta, comprendiendo dicho método:

a) bajo condiciones adecuadas para controlar la tensión y/o la corriente, aplicar un campo eléctrico a una muestra de ensayo que comprende la célula suspendida en un medio o a una muestra de ensayo que comprende la célula sobre una perla de microcultivo suspendida;

b) controlar la tensión y/o la corriente;

c) permitir que un estresor afecte a la muestra de ensayo, eligiéndose el estresor entre un estresor aplicado antes de la aplicación del campo eléctrico, un estresor aplicado esencialmente de forma simultánea con dicha aplicación del campo eléctrico y un estresor aplicado después de la misma;

d) en un momento específico o a lo largo de una serie de momentos, medir una respuesta de impedancia inicial de la muestra de ensayo, consistiendo la respuesta de impedancia inicial de la muestra de ensayo en un cambio de impedancia de la muestra de ensayo durante el período de transición desde una primera medición de la impedancia de la muestra de ensayo aproximadamente en el momento de la aplicación del campo eléctrico hasta e inclusive una impedancia de la muestra de ensayo medida posteriormente, que es indicativa de la respuesta de estrés o ausencia de crecimiento; y

e) evaluar el nivel de la respuesta de impedancla Inicial de la muestra de ensayo en cada momento, siendo el nivel de la respuesta de impedancia inicial de la muestra de ensayo en cada momento una indicación del nivel de la respuesta de estrés de dicha célula, con lo que se controla la respuesta de estrés de dicha célula al estresor si dicha célula está presente en la muestra de ensayo, o la ausencia de la respuesta de estrés si dicha célula no está presente en la muestra de ensayo o si está muerta; y de este modo detectar rápidamente la presencia o ausencia de dicha célula en la muestra de ensayo;

comprendiendo dicho método adicionalmente confirmar la presencia o ausencia de dicha célula en la muestra de ensayo mediante:

(i) medir una respuesta de impedancia de una primera muestra de referencia que incluye el medio con o sin el estresor, estando la primera muestra de referencia desprovista de células; y/o

(ii) medir una respuesta de impedancia inicial de una segunda muestra de referencia que incluye dicha célula y el medio, estando dicha célula en la misma concentración que la célula en la muestra de ensayo, y estando la segunda muestra de referencia desprovista del estresor; y consistiendo la respuesta de impedancia inicial de la segunda muestra de referencia en un cambio de impedancia de la segunda muestra de referencia durante el período de transición desde una primera medida de la impedancia de la segunda muestra de referencia aproximadamente en el momento de la aplicación del campo eléctrico hasta e inclusive una impedancia de la muestra de ensayo medida posteriormente, que es indicativa de la respuesta de estrés o ausencia de crecimiento;

(iii) determinar un valor para un Perfil de Respuesta de Impedancia mediante la comparación de la respuesta de impedancia inicial de la muestra de ensayo obtenida en el paso (d) con la respuesta de impedancia de la primera muestra de referencia y/o la respuesta de impedancia inicial de la segunda muestra de referencia; y

(iv) evaluar la comparación del paso (iii), confirmando así la presencia o ausencia de dicha célula en la muestra de ensayo,

determinándose la respuesta de impedancia inicial mediante un control dentro de un período de aproximadamente 45 minutos desde la primera medida de impedancia.

Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, caracterizado porque el estresor aplicado a la célula comprende poner en contacto la célula con un agente bioactivo conocido; opcionalmente seleccionándose el agente bioactivo conocido de entre un agente farmacéuticamente activo, un agente anticanceroso; una toxina biológica; un virus; y otra sustancia capaz de producir estrés, y combinaciones de éstos.

Método para determinar un resultado predictivo de la susceptibilidad de una célula suspendida en un medio a una concentración seleccionada de un agente bioactivo y un nivel de estrés de la célula con la concentración seleccionada del agente bioactivo, siendo el nivel de susceptibilidad de la célula previamente conocido o desconocido, comprendiendo dicho método:

a) i) en momentos específicos o a lo largo de una serie de momentos, medir una respuesta de impedancia

inicial de una muestra de ensayo que incluye la célula suspendida en un medio o de una muestra de ensayo que incluye la célula sobre una perla de microcultivo suspendida, y la concentración seleccionada del agente bioactivo; y medir una respuesta de impedancia de una muestra de referencia que incluye el medio y la concentración seleccionada del agente bioactivo, estando dicha muestra de referencia desprovista de células, y midiéndose la respuesta de impedancia inicial dentro de un período de aproximadamente 45 minutos de los minutos iniciales de la medida;

ii) determinar un Primer Perfil Tratado de Respuesta de Impedancia en cada uno de los momentos, consistiendo el Primer Perfil Tratado de Respuesta de Impedancia en una comparación matemática de la respuesta de impedancia inicial de la muestra de ensayo determinada en el paso a)(i) y la respuesta de impedancia de la muestra de referencia determinada en el paso a)(¡) en cada momento;

iii) opcionalmente, repetir los pasos a)(i) y a)(ii) para múltiples concentraciones seleccionadas del agente bioactivo con el fin de obtener el Primer Perfil Tratado de Respuesta de Impedancia correspondiente para cada concentración diferente seleccionada del agente bioactivo conocido;

b) i) en momentos específicos o a lo largo de una serie de momentos, medir la respuesta de impedancia inicial de una segunda muestra de ensayo que incluye la célula suspendida en el medio o que incluye la célula sobre una perla de microcultivo suspendida, estando la segunda muestra de ensayo desprovista del agente bioactivo; y medir la respuesta de impedancia de una muestra de referencia que incluye la célula suspendida en el medio o que incluye la célula sobre una perla de microcultivo suspendida, estando dicha muestra de referencia desprovista de células;

¡i) calcular un Primer Perfil No Tratado de Respuesta de Impedancla, consistiendo el Primer Perfil No Tratado de Respuesta de Impedancia en una comparación matemática de la respuesta de impedancia inicial de la segunda muestra de ensayo determinada en el paso b) i) y la respuesta de impedancia de la muestra de referencia determinada en el paso b) i) en cada momento; y

c) para cada concentración seleccionada del agente bioactivo, determinar un valor de Respuesta de Impedancia Normalizada, NIR, consistiendo la NIR en un valor numérico determinado mediante un algoritmo que relaciona el valor del Primer Perfil Tratado de Respuesta de Impedancia obtenido en el paso a) ii), y/o en el paso a) iii), con el valor del Primer Perfil No Tratado de Respuesta de Impedancia obtenido en el paso b) ii), de tal modo que el valor del Primer Perfil No Tratado de Respuesta de Impedancia se incorpora en la NIR, y consistiendo el valor NIR determinado en una medida cuantitativa del nivel de estrés de la célula a la concentración seleccionada del agente bioactivo.

Método según la reivindicación 4, caracterizado porque la comparación matemática del paso a) ii) de la respuesta de impedancia inicial de la muestra de ensayo determinada en el paso a)(¡) y la respuesta de impedancia de la muestra de referencia determinada en el paso a)(¡) en cada momento se elige entre:

una relación de la respuesta de impedancia de la muestra de ensayo determinada en el paso a) i) y la respuesta de impedancia de la muestra de referencia determinada en el paso a) i) en cada momento, y

una diferencia entre la respuesta de impedancia de la muestra de ensayo determinada en el paso a) i) y la respuesta de impedancia de la muestra de referencia determinada en el paso a) i) en cada momento.

Método según la reivindicación 4, caracterizado porque el algoritmo utilizado para determinar la NIR se elige entre una relación matemática o una diferencia absoluta entre el valor del Primer Perfil Tratado de Respuesta de Impedancia y el valor del Primer Perfil No Tratado de Respuesta de Impedancia.

Método según la reivindicación 4, donde ya se sabe previamente que la célula es susceptible al agente bioactivo, incluyendo el método adicionalmente:

repetir los pasos a), b) y c) con una segunda célula que presenta una susceptibilidad desconocida a un agente bioactivo, siendo la segunda célula del mismo tipo que la célula de la que ya se sabe previamente que es susceptible al agente bioactivo, determinando asi el valor de Respuesta de Impedancia Normalizada, NIRunk, para la célula que presenta una susceptibilidad desconocida al agente bioactivo; comparar el valor NIRunk en la concentración seleccionada para la célula que presenta la susceptibilidad desconocida al agente bioactivo con el valor NIR en la concentración seleccionada para la célula de la cepa de la que ya se sabe previamente que es susceptible al agente bioactivo; y, si el valor NIRunk en la concentración seleccionada es mayor que el valor NIR en la concentración seleccionada para la célula de la que ya se sabe previamente que es susceptible al agente bioactivo, predecir que la célula que presenta la susceptibilidad desconocida al agente bioactivo es menos susceptible al agente bioactivo en la concentración seleccionada que la célula de la que ya se sabe previamente que es susceptible al agente bioactivo.

Método según la reivindicación 4, donde la célula es de una cepa de la que ya se sabe que es susceptible al agente bioactivo o que se determina que es susceptible a éste, que comprende adicionalmente:

para los momentos específicos o para la serie de momentos, representar en un gráfico, en función del tiempo, el Primer Perfil Tratado de Respuesta de Impedancia para cada concentración seleccionada diferente del agente bioactivo, y el Primer Perfil No Tratado de Respuesta de Impedancia de la segunda muestra de ensayo que comprende la célula y el medio, estando la segunda muestra de ensayo desprovista del agente bioactivo, obteniendo así una familia de curvas para las concentraciones seleccionadas y para la célula no tratada;

calcular una pendiente media de cada curva en un momento seleccionado;

obtener un valor de pendiente normalizado para cada Primer Perfil Tratado de Respuesta de Impedancia dividiendo el valor de la pendiente media de cada curva en el momento seleccionado entre el valor de la pendiente de la curva del Primer Perfil No Tratado de Respuesta de Impedancia; o modificando de otro modo el valor de la pendiente media de cada curva en el momento seleccionado con el valor de la pendiente de la curva del Primer Perfil No Tratado de Respuesta de Impedancia;

representar en un gráfico la pendiente normalizada de cada Primer Perfil Tratado de Respuesta de Impedancia en función de la concentración correspondiente del agente bioactivo, obteniendo así una Curva

de Tasa de Cambio Normalizada que puede ser utilizada para predecir una concentración efectiva del agente bioactivo para la célula;

determinar el valor de pendiente normalizado para una cepa celular desconocida, y, si el valor de pendiente normalizado de la cepa celular desconocida está por encima de la Curva de Tasa de Cambio Normalizada 5 de la cepa celular de la que se sabe que es susceptible al agente bioactivo, determinar que la cepa celular

desconocida es resistente al agente bioactivo, tal como se determina mediante otros métodos.

9. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la célula se elige entre una célula procariota o una célula eucariota.

1. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque

(a) la célula es una célula eucariota seleccionada entre protistas, hongos, una célula humana no

transformada, una célula animal no transformada, una célula humana transformada, una célula animal transformada, con la condición de que, si la célula eucariota es dependiente de la adhesión, el medio de la muestra de ensayo comprende adicionalmente perlas de mlcrocultivo suspendidas que incluyen un revestimiento de una matriz extracelular capaz de adherirse a la célula eucariota; o

(b) la célula es una célula procariota o eucariota, el medio de la muestra de ensayo y el medio de la muestra

de referencia comprenden adicionalmente perlas suspendidas que incluyen un revestimiento de receptores específicos capaces de adherirse a las células procariotas o eucariotas; pudlendo comprender los receptores opcionalmente componentes biológicamente activos seleccionados entre: componentes generados a partir de respuestas inmunológicas, componentes generados a partir de ácidos nucleicos y

componentes generados a partir de otros compuestos químicos o bioquímicos que pueden ser utilizados

para Identificar células específicas.