Dispositivo para detección de antígenos y usos del mismo.

Un dispositivo para detectar una molécula diana, que comprende:

una carcasa que comprende un primer y segundo miembros de carcasa, en donde la carcasa comprende:

una almohadilla de conjugado y una membrana de ensayo, en donde al menos una parte de la almohadilla de conjugado y la membrana de ensayo son sustancialmente paralelas entre sí;

un miembro absorbente, en donde el miembro absorbente es sustancialmente paralelo a la membrana de ensayo y está en contacto fluido con la misma;

una abertura de entrada en contacto fluido con la almohadilla de conjugado;

un miembro de fuerza, en donde el miembro de fuerza está configurado para aplicar presión de manera sustancialmente perpendicular a la membrana de ensayo;

un miembro bloqueante deslizable que entra en contacto con el miembro de fuerza, y

un miembro de conexión en contacto con el miembro bloqueante

Dispositivo para detección de antígenos y usos del mismo Campo de la invención La presente invención se refiere a un dispositivo y ensayo para detectar uno o más antígenos y métodos de uso de los mismos.

Antecedentes de la invención La detección de antígenos es importante para muchos campos de la investigación científica, uso diagnóstico y usos terapéuticos. Existen diversas maneras en las que se pueden detectar antígenos. Se describen diversos métodos en la patente de EE.UU. 5, 160, 701, patente de EE.UU. 5, 141, 850, publicación PCT WO 91/12336, patente de EE.UU. 5, 451, 504, patente de EE.UU. 5, 559, 041, solicitud de patente europea nº 0505636A1, publicación PCT nº WO 88/08534, solicitud de patente europea nº 0284 232A1, publicación de solicitud de patente de EE.UU. nº 20070020768 y patente de EE.UU. nº RE39664. La publicación de solicitud de patente de EE.UU. nº 2005277202 describe un dispositivo colector para cromatografía de flujo lateral. La publicación PCT nº WO 2007/097917 describe un dispositivo que combina ensayos de flujo vertical y lateral. La publicación PCT nº WO 2004/097419 describe un sistema de biosensor de tira de membrana para análisis en el lugar de atención. Los métodos y dispositivos disponibles anteriores a la presente invención pueden requerir todavía mejoras en la sensibilidad o la velocidad a la que se pueden obtener resultados. Estos factores pueden ser importantes cuando el tiempo es esencial a la hora de intentar determinar la presencia o ausencia de un antígeno.

Uno de estos campos es el campo de la detección de contaminantes patógenos de transmisión alimentaria. Aproximadamente setenta y seis millones de personas en los EE.UU. se ven aquejadas de una enfermedad de transmisión alimentaria. De estos setenta y seis millones, aproximadamente, 325.000 enfermarán gravemente, requiriendo hospitalización, y aproximadamente 5, 000 fallecerán. La mayoría de las enfermedades de transmisión alimentaria son causadas por Salmonella, E. coli y Campylobacter, y suponen un coste de aproximadamente 35 mil millones de dólares.

Las medidas actuales para garantizar un suministro seguro de alimentos implican una combinación de autoridades locales, estatales y federales, así como un complejo sistema de inspectores y redes de vigilancia. Los fabricantes de alimentos se atienen a determinadas normativas del Departamento de Agricultura de EE. UU. (United States Department of Agriculture, USDA) , la Administración de Alimentos y Fármacos (United States Food and Drug Administration) y el Servicio Nacional de Pesca Marina (National Marine Fisheries Service) que son exigibles por ley. El USDA ha creado un sistema de inspectores sanitarios que están encargados de realizar inspecciones diarias de carne, productos frescos y otros productos de consumo producidos o elaborados en instalaciones de producción y de elaboración. Estas inspecciones que se han implantado conllevan un detallado análisis estadístico que tiene por objeto garantizar al máximo la seguridad y la esterilidad del alimento antes de que llegue al consumidor. Por otra parte, la mayoría de la industria cárnica ha adoptado técnicas de irradiación para asegurar adicionalmente la esterilidad de los productos. A un nivel inferior, los departamentos de salud locales y municipales trabajan para asegurar que los distribuidores locales, restaurantes y minoristas sigan pautas estrictas que garanticen un suministro seguro de alimentos. Sin embargo, a pesar de esta compleja red, las infecciones de transmisión alimentaria siguen siendo comunes.

Cuando existen fundadas sospechas de un brote, se inicia una investigación. Se realiza una búsqueda de más casos entre las personas que puedan haber estado expuestas. Se determinan los síntomas y el momento de inicio y la ubicación de posibles casos, y se desarrolla una "definición del caso" que describe estos casos típicos. Se describe sistemáticamente el brote por tiempo, lugar y persona. Se dibuja un gráfico de la cantidad de personas que han enfermado día por día, para mostrar gráficamente cuándo ha ocurrido. El cálculo de la distribución de casos por edad y sexo indica quiénes han sido afectados.

A menudo no se conoce el microorganismo causante, por lo que se deben recoger muestras de heces o sangre de personas enfermas y enviarlas al laboratorio de salud pública para realizar un diagnóstico. Cada toma y muestreo pueden costar más de 500 dólares por prueba, y los análisis tardan a menudo 2-4 días (CDC "Food-borne Infections") .

Antes de la presente invención, para identificar el alimento u otro origen del brote los investigadores entrevistan en primer lugar a algunas de las personas que presenten los casos más típicos, realizando preguntas acerca de a qué pueden haber estado expuestas en los días inmediatamente anteriores a la aparición de la enfermedad. Así se pueden excluir algunas exposiciones potenciales, mientras que otras que se mencionen repetidamente emergen como posibles orígenes. Combinadas con otras informaciones, tales como los orígenes probables del microorganismo específico involucrado, las hipótesis se prueban después en una investigación epidemiológica formal. Los investigadores realizan entrevistas sistemáticas acerca de una lista de posibles exposiciones a personas enfermas y a un grupo comparable de personas que no están enfermas. Mediante la comparación de la frecuencia con que las personas enfermas y sanas informan de una exposición, los investigadores pueden medir la asociación

de la exposición con la enfermedad. Utilizando estadísticas probabilísticas, se calcula directamente la probabilidad de la no asociación.

A medida que aparecen nuevos problemas de transmisión alimentaria surge la necesidad de nuevos dispositivos y métodos para detectar patógenos de transmisión alimentaria. La presente invención proporciona un dispositivo para la detección de antígenos, tales como antígenos de bacterias de transmisión alimentaria, y satisface la necesidad de disponer de un dispositivo y ensayo con sensibilidad y/o velocidad de detección incrementadas. La presente invención satisface otras necesidades, tal como se discutirá en la presente memoria.

Compendio de la invención La presente invención se define en su sentido más amplio por las reivindicaciones adjuntas.

En un primer aspecto, la presente invención se refiere a un dispositivo para detectar una molécula diana, que comprende: una carcasa que comprende un primer y segundo miembros de carcasa, en donde la carcasa comprende: una almohadilla de conjugado y una membrana de ensayo, en donde al menos una parte de la almohadilla de conjugado y la membrana de ensayo son sustancialmente paralelas entre sí, un miembro absorbente, en donde el miembro absorbente es sustancialmente paralelo a la membrana de ensayo y está en contacto fluido con la misma; una abertura de entrada en contacto fluido con la almohadilla de conjugado; un miembro de fuerza, en donde el miembro de fuerza está configurado para aplicar presión sustancialmente de manera perpendicular a la membrana de ensayo; un miembro bloqueante deslizable que entra en contacto con el miembro de fuerza, y un miembro de conexión en contacto con el miembro bloqueante.

En un segundo aspecto, la presente invención se refiere a un sistema que comprende dicho dispositivo y un recipiente de tampón o un colector de muestra.

En un tercer aspecto, la presente invención se refiere a un kit que comprende dicho dispositivo y uno o más de un testigo positivo, un testigo negativo, un folleto de instrucciones, un recipiente de tampón o un colector de muestra.

En un cuarto aspecto, la presente invención se refiere a un método para detectar un antígeno, que comprende: poner en contacto una muestra con la almohadilla de conjugado de dicho dispositivo; en donde la muestra fluye verticalmente de la almohadilla de conjugado a la membrana de ensayo; e identificar una reacción positiva o negativa para la molécula diana.

En algunas realizaciones, la presente invención proporciona dispositivos para detectar un antígeno. En algunas realizaciones, los dispositivos comprenden una carcasa que comprende un primer miembro de carcasa y un segundo miembro de carcasa, en donde dicha carcasa comprende: una abertura de entrada en el segundo miembro de carcasa; un miembro de fuerza conectado al primer miembro de carcasa; un miembro bloqueante deslizable que entra en contacto con el primer miembro de carcasa y entra en contacto con el miembro de fuerza; un sistema de membrana para detección de antígeno que comprende, en el siguiente orden: una almohadilla de conjugado; una membrana permeable; una membrana de ensayo; y un miembro absorbente; y un miembro de conexión flexible conectado... [Seguir leyendo]

1. Un dispositivo para detectar una molécula diana, que comprende: una carcasa que comprende un primer y segundo miembros de carcasa, en donde la carcasa comprende: una almohadilla de conjugado y una membrana de ensayo, en donde al menos una parte de la almohadilla de conjugado y la membrana de ensayo son sustancialmente paralelas entre sí;

un miembro absorbente, en donde el miembro absorbente es sustancialmente paralelo a la membrana de ensayo y está en contacto fluido con la misma; una abertura de entrada en contacto fluido con la almohadilla de conjugado; un miembro de fuerza, en donde el miembro de fuerza está configurado para aplicar presión de manera sustancialmente perpendicular a la membrana de ensayo; un miembro bloqueante deslizable que entra en contacto con el miembro de fuerza, y un miembro de conexión en contacto con el miembro bloqueante.

2. El dispositivo según la reivindicación 1, en donde los primer y segundo miembros de carcasa son una sola unidad.

3. El dispositivo según las reivindicaciones 1 ó 2, en donde el miembro de conexión es flexible.

4. El dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el miembro de conexión entra en contacto con la almohadilla de conjugado.

5. El dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde la almohadilla de conjugado y membrana de ensayo son comprimidas por el miembro de fuerza.

6. El dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde la carcasa comprende además un botón deslizante conectado al miembro bloqueante.

7. El dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde la almohadilla de conjugado comprende un primer reactivo de captura.

8. El dispositivo según la reivindicación 7, en donde la molécula diana detectada por el primer reactivo de captura es un polinucleótido, un péptido, una proteína, una proteína patógena, un polinucleótido patógeno, un sacárido o un hidrato de carbono.

9. El dispositivo según la reivindicación 7, en donde el primer reactivo de captura es un anticuerpo.

10. El dispositivo según la reivindicación 7, en donde el primer reactivo de captura comprende además oro coloidal, una molécula fluorescente, una marca radiactiva o un sustrato quimioluminiscente.

11. El dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde la almohadilla de conjugado comprende una pluralidad de reactivos de captura, en donde la pluralidad de reactivos de captura se unen a diferentes moléculas diana.

12. El dispositivo según la reivindicación 11, en donde las diferentes moléculas diana se seleccionan cada una, de manera independiente, de una molécula diana de E. coli, una molécula diana de Campylobacter y una molécula diana de Salmonella.

13. El dispositivo según la reivindicación 1, en donde el miembro de fuerza está configurado para aplicar presión de manera perpendicular a la membrana de ensayo.

14. Un sistema que comprende un dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones 1-13, y un recipiente de tampón o un colector de muestra.

15. Un kit que comprende un dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones 1-13, y uno o más de un testigo positivo; un testigo negativo, un manual de instrucciones, un recipiente de tampón o un colector de muestra.

16. Un método para detectar una molécula diana que comprende que comprende:

poner en contacto una muestra con la almohadilla de conjugado del dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en donde la muestra fluye verticalmente de la almohadilla de conjugado a la membrana de ensayo; e identificar una reacción positiva o negativa para la molécula diana.