Vectores y constructos de liberación de antígenos de virus de la gripe.

Un constructo de vector fluorocarbonado-antígeno de estructura CmFN--CyHx-(Sp)-R o sus derivados, donde m ≥ 3 a 30, n

Vectores y constructos de liberación de antígenos de virus de la gripe Antecedentes de la invención La gripe es el término genérico para las enfermedades o infecciones causadas por el virus de la gripe. Los virus de la gripe son miembros de la familia Orthomyxoviridae de virus y comprenden dos géneros: virus de la gripe A y B, y virus de la gripe C. Los virus de la gripe A, B y C se distinguen sobre la base de su nucleoproteína interna y proteínas de la matriz que son específicas para cada tipo viral. Los virus de la gripe A son naturalmente capaces de infectar una amplia gama de especies animales, incluyendo seres humanos, cerdos, aves, focas y caballos. Los virus de la gripe B, sin embargo, infectan solo a seres humanos, mientras que el virus de la gripe C infecta a seres humanos y cerdos. Los virus de la gripe A se clasifican en subtipos que son determinados por la antigenicidad de las glicoproteínas de la superficie, la hemaglutinina (H) y la neuraminidasa (N) .

Históricamente, las infecciones humanas por gripe A han sido causadas por tres subtipos de hemaglutinina (H1, H2 y H3) y dos subtipos de neuraminidasa (N1 y N2) ; más recientemente, también se ha informado de infecciones humanas por los subtipos H5, H7 y H9 previamente restringidos a aves. Se han identificado hasta la fecha para la gripe A un total de 16 subtipos distintos de hemaglutinina y 9 subtipos de neuraminidasa; todos estos son prevalentes en aves. Los cerdos y los caballos, como los seres humanos, están limitados a un rango mucho más estrecho de subtipos.

Los viriones de la gripe A y B tienen estructura pleiomórfica, teniendo los ejemplos esféricos 80 -120 nm de diámetro, mientras que las formas filamentosas pueden tener hasta 300 nm de longitud. Existen aproximadamente 500 glicoproteínas de la espiga de la superficie por partícula (generalmente a una razón de cuatro a cinco proteínas hemaglutinina por una neuraminidasa) que están integradas en una membrana de bicapa lipídica derivada del anfitrión. Dentro de la membrana está la proteína M2 del canal iónico transmembrana, mientras que la proteína estructural M1 subyace en la bicapa. Dentro del núcleo del virus, el ARN de sentido negativo de hebra sencilla se asocia con las otras seis proteínas virales expresadas a partir de su genoma: la nucleoproteína (NP) , tres transcriptasas (PB2, PB1, y PA) y dos proteínas no estructurales (NS1 y NS2) . El genoma del virus de la gripe comprende ocho segmentos; una característica que permite la redistribución "recombinación genética". La hemaglutinina permite al virus unirse a los receptores de las células anfitrionas y facilita la entrada del virus a la célula donde se replicará. La proteína neuraminidasa escinde enzimáticamente residuos de ácido siálico terminales, y se cree que ayuda en el transporte del virus a través de la capa de mucina de las vías respiratorias, así como facilita el florecimiento de la progenie del virus lejos de la célula anfitriona. Los virus de la gripe C, que presentan mucho menos de un riesgo para la salud a los seres humanos poseen una sola proteína de superficie que combina la hemaglutinina, la actividad de fusión y la actividad destructora de receptores.

Como resultado de la tendencia al error de la enzima ARN polimerasa, tanto las proteínas hemaglutinina y neuraminidasa de virus de la gripe son susceptibles de mutaciones puntuales que no necesitan necesariamente afectar a la capacidad del virus para replicarse. Tal mutación (o mutaciones coincidentes) en uno de los sitios reconocidos por la respuesta de anticuerpos del anfitrión pueden dar como resultado el anticuerpo del anfitrión, inducido por la vacunación o una infección previa, siendo incapaz de unirse efectivamente a la "nueva" cepa del virus permitiendo así que persista una infección. Puesto que las cepas de la gripe humana están evolucionando continuamente a través de estas mutaciones puntuales, el virus es capaz de escapar del repertorio de anticuerpos limitado de la respuesta inmune humana y causar epidemias. Por tanto, los ataques regulares "estacionales" de infecciones de gripe son causadas por las cepas circulantes en la población sometidas a la deriva antigénica.

Durante las epidemias estacionales la gripe puede propagarse por todo el mundo rápidamente e inflige una carga económica significativa en términos de hospital y otros costes de atención médica y pérdida de productividad. El virus se transmite por gotitas en el aire de humano a humano y se dirige a las células epiteliales en la tráquea y los bronquios de las vías respiratorias superiores. Los virus de la gripe también pueden ser adquiridos de superficies contaminadas y pasados a la boca. La enfermedad se propaga muy rápidamente, especialmente en circunstancias de hacinamiento a través de la tos y los estornudos. La estabilidad del virus se ve favorecida por una humedad relativa baja y bajas temperaturas y, como consecuencia, las epidemias estacionales en las zonas templadas tienden a aparecer en invierno. La mayor morbilidad y mortalidad se observan con las cepas de gripe A, con la gripe B asociada por lo general con tasas de ataque más bajas y una enfermedad más leve. Ocasionalmente, sin embargo, la gripe B puede causar epidemias de la misma gravedad que los virus de tipo A. La gripe B es principalmente un patógeno de la infancia y no suele mostrar el mismo grado de variación antigénica que el tipo A.

La infección por gripe no complicada típica se caracteriza por un rápida comienzo de la enfermedad (dolor de cabeza, tos, escalofríos) seguido de fiebre, dolor de garganta, mialgias significativas, malestar y pérdida de apetito. Otros síntomas pueden incluir rinorrea, opresión retroesternal y síntomas oculares. La señal más prominente de la infección es la fiebre que se sitúa por lo general en el rango de temperatura de 38-40º C. Mientras que la mayoría de

las personas se recupera de la infección de la gripe en el plazo de una o dos semanas sin necesidad de tratamiento médico, para ciertos miembros de la población la enfermedad puede representar un grave riesgo. Tales individuos incluyen los muy jóvenes, los ancianos y las personas que sufren de afecciones médicas tales como enfermedades pulmonares, diabetes, cáncer, riñón o problemas cardíacos. En esta población "en riesgo", la infección puede conducir a complicaciones graves de enfermedades subyacentes, neumonía bacteriana, (causada por patógenos respiratorios tales como Streptococcus pneumoniae, Haemophilus gripee y Staphylococcus aureus) y muerte. Las características clínicas de la infección por gripe son similares en los niños, a pesar de que la fiebre puede ser más alta y se pueden producir convulsiones febriles. Además, los niños tienen una mayor incidencia de vómitos y dolor abdominal, así como las complicaciones de otitis media, crup y miositis.

La Organización Mundial de la Salud estima que en las epidemias anuales de gripe 5-15% de la población se ve afectada por infecciones de las vías respiratorias superiores. La hospitalización y las muertes se producen principalmente en los grupos de alto riesgo (ancianos y enfermos crónicos) . Aunque es difícil de evaluar, se cree que estas epidemias anuales dan como resultado entre tres y cinco millones de casos de enfermedad grave y aproximadamente 250.000 y 500.000 muertes cada año en todo el mundo. Más del 90% de las muertes actualmente asociadas con la gripe en los países industrializados se producen entre las personas mayores de 65 años de edad. En los Estados Unidos, los CDC estiman que de promedio más de 200, 000 personas son hospitalizadas cada año después de las complicaciones que resultan de la infección de gripe estacional, registrándose un exceso de alrededor de 36.000 muertes.

La respuesta inmunitaria del anfitrión que controla la recuperación de la infección de la gripe se confiere a través de una combinación de anticuerpos séricos dirigidos a las proteínas de la superficie, anticuerpos de IgA secretora de la mucosa y respuestas inmunitarias mediadas por células. Aproximadamente una a dos semanas después de una infección primaria, los anticuerpos inhibidores de la hemaglutinación neutralizantes (HAI) , así como los anticuerpos contra la neuraminidasa son detectables en el suero, alcanzando un máximo a las aproximadamente tres a cuatro semanas. Después de la re-infección, la respuesta de anticuerpos es más rápida. Los anticuerpos de la gripe pueden persistir durante meses o años, aunque en algunos grupos de alto riesgo los niveles de anticuerpos pueden comenzar a disminuir en unos pocos meses después de la vacunación. Los anticuerpos de IgA secretora alcanzan un máximo aproximadamente 14 días después de la infección y se pueden detectar en la saliva, las secreciones nasales, el... [Seguir leyendo]

1. Un constructo de vector fluorocarbonado-antígeno de estructura CmFN--CyHx- (Sp) -R o sus derivados, donde m = 3 a 30, n <= 2m + 1, y = 0 a 15, x <= 2y, (m + y) = 3-30, Sp es un radical espaciador químico opcional y R es el péptido del virus de la gripe HMAIIKKYTSGRQEKNPSLRMKWMMAMKYPITADK (SEQ ID NO: 1) o un homólogo del mismo que tiene una identidad de al menos el 90% con el SEC ID NO: 1.

2. Una composición farmacéutica que comprende el constructo de vector fluorocarbonado-antígeno de la reivindicación 1 junto con uno o más vehículos, excipientes, diluyentes o coadyuvantes farmacéuticamente 10 aceptables.

3. La composición farmacéutica de la reivindicación 2, formulada para administración parenteral, oral, ocular, rectal, nasal, transdérmica, tópica o vaginal.

4. La composición farmacéutica de la reivindicación 2, que adopta la forma de un líquido, emulsión, sólido, aerosol o gas.

5. La composición farmacéutica de la reivindicación 2, que comprende un coadyuvante en donde dicho coadyuvante se selecciona entre:

1. (1) refinamientos obtenidos natural o sintéticamente de los componentes naturales de bacterias, tales como coadyuvante de Freund y sus derivados, derivados de muramildipéptido (MDP) , CpG, monofosforil lípido A;

2. (2) agentes coadyuvantes o potenciadores tales como saponinas, sales de aluminio y citoquinas;

3. (3) coadyuvantes de aceite en agua, coadyuvantes de agua en aceite, complejos inmunoestimuladores (ISCOM) , liposomas, nano y micro-partículas formuladas; y

4. toxinas y toxoides bacterianos.

6. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, que comprende adicionalmente más constructos de vector fluorocarbonado-antígeno de estructura CmFN--CyHx- (Sp) -R o sus derivados, donde m = 3 a 30, n <= 2m + 1, y = 0 a 15, x <= 2y, (m + y) = 3-30, Sp es un radical espaciador químico opcional y R es un péptido de virus de la gripe.

7. Una composición farmacéutica que comprende al menos dos constructos de vector-antígeno de estructura CmFN-CyHx- (Sp) -R osus derivados, donde m = 3 a 30, n <= 2m + 1, y = 0 a 15, x <=2y, (m + y) .

3. 30, Sp es radical espaciador químico opcional y R es un péptido del virus de la gripe, comprendiendo el primer constructo la secuencia de péptido de la gripe:

HMAIIKKYTSGRQEKNPSLRMKWMMAMKYPITADK y comprendiendo el segundo constructo la secuencia de péptido de la gripe: YITRNQPEWFRNVLSIAPIMFSNKMARLGKGYMFE.

8. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7, que comprende ocho constructos de vector-antígeno que comprenden las siguientes secuencias de péptidos de la gripe: Constructo 1 HMAIIKKYTSGRQEKNPSLRMKWMMAMKYPITADK Constructo 2 VAYMLERELVRKTRFLPVAGGTSSVYIEVLHLTQG Constructo 3 YITRNQPEWFRNVLSIAPIMFSNKMARLGKGYMFE

Constructo 4 APIMFSNKMARLGKGYMFESKRMKLRTQIPAEMLA Constructo 5 SPGMMMGMFNMLSTVLGVSILNLGQKKYTKTTY Constructo 6 KKKSYINKTGTFEFTSFFYRYGFVANFSMELPSFG Constructo 7 DQVRESRNPGNAEIEDLIFLARSALILRGSVAHKS Constructo 8 DLEALMEWLKTRPILSPLTKGILGFVFTLTVPSER

9. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 8, para su uso en un método para tratar o inmunizar contra la gripe.

10. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 8, para su uso en un método para estimular una respuesta inmunitaria en un ser humano o animal.

11. La composición farmacéutica de la reivindicación 9 o 10, para su uso de acuerdo con la reivindicación 9 o 10

combinada con terapia contra la gripe. 60

12. La composición farmacéutica de la reivindicación 11 para su uso según la reivindicación 11, en donde la terapia contra la gripe es un inhibidor de la neuraminidasa.

13. La composición farmacéutica de la reivindicación 9 o 10, para su uso de acuerdo con la reivindicación 9 o 10 combinada con una vacuna contra la gripe que contiene hemaglutinina mediante administración simultánea o separada.

14. Un método de preparación de un producto farmacéutico profiláctico o terapéutico que comprende combinar el constructo de fluorocarbono de la reivindicación 1 con uno o más portadores, excipientes, diluyentes o coadyuvantes farmacéuticamente aceptables.

15. Uso de la composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 8 en la preparación de un 10 medicamento para el tratamiento o la prevención de la gripe o de sus síntomas.