PMO-7 para su uso en el tratamiento de la hiperplasia de la neoíntima.

Una composición farmacéutica que comprende el morfógeno PMO-7 para su uso en el tratamiento,

la prevención o la reducción de la hiperplasia de la neoíntima en un sujeto.

PMO-7 para su uso en el tratamiento de la hiperplasia de la neoïntima Campo de la invenciïn La presente invenciïn se refiere a la prevenciïn, el tratamiento o la reducciïn de la hiperplasia de la neoïntima.

Antecedentes de la invenciïn La nefropatïa crïnica (NC) es una enfermedad mortal y las complicaciones cardiovasculares (incluido el fallo de los accesos arteriovenosos (AV) debido a lesiones de hiperplasia de la neoïntima (HN) venosa) son la causa principal de morbilidad y mortalidad. (Go, A.S. et al., New Engl. J. Med. 351:1296-1305, 2004; Bert, T. y Henrich, W., Clin. J. Am. Soc. Nephrol. 1:8-18, 2006) 1, 2. Se desconocen las causas del exceso de mortalidad cardiovascular asociada con la NC, ya que el papel de los factores de riesgo habituales asociados con la mortalidad cardiovascular no supone un aumento del riesgo de NC (Bed, ibïdem) .

Si bien las fïstulas AV construidas con vasos naturales son el mejor acceso vascular disponible debido a la menor incidencia de estenosis, trombosis e infecciïn en comparaciïn con los injertos vasculares o los catïteres venosos centrales, incluso despuïs de la maduraciïn, la tasa de fallo del 66 % a los 2 aïos sigue siendo inaceptable (Shenoy S, et al., J Vase Surg. 2003;38 (2) :229-235.) 54 y los ingresos hospitalarios relacionados con el acceso a la hemodiïlisis siguen costando bastante mïs de 1.000 millones de dïlares al aïo en Estados Unidos (Lee H, et al., Am J Kidney Dis. 2002;40 (3) :611-622) .55

De forma predominante, la causa del fallo de los accesos AV es secundaria a la formaciïn de lesiones hiperplïsicas de la neoïntima oclusivas en la anastomosis y/o en las venas eferentes seguida de trombosis in situ (Mattana J, et al., Kidney Int. 1997;52 (6) :1478-1485; Ezzahiri R, et al., Nephrol Dial Transplant. 1999;14 (9) :2110-2115; Cinat ME, et al., Ann Vase Surg. 1999;13 (2) :191-198; Tordoir JH, et al., EurJ Vase Endovasc Surg. 1995;9 (3) :305-309) .56-59 A diferencia de la reestenosis observada con las arterias ateroesclerïticas preoclusivas despuïs de la angioplastia y la colocaciïn de endoprïtesis vasculares, la hiperplasia de la neoïntima (HN) se observa en la anastomosis que afecta a una arteria o un injerto sintïtico (p. ej., ePTFE, Dacron) y a una vena de las extremidades. Aunque estos vasos sanguïneos no suelen tener placas ateroesclerïticas, presentan predisposiciïn a la calcificaciïn, HN preexistente y lesiones por punciones con aguja. Por lo tanto, la migraciïn dirigida de cïlulas musculares lisas (CML) hacia la superficie luminal venosa es esencial para la formaciïn de lesiones de HN perianastomïticas (Roy-Chaudhur y P, et al., J Am Soc Nephrol. 2006; 17 (4) : 1112-1127; Nikkari ST, et al., Ann Med. 1994;26 (2) :95-100) .60, 61

Se ha relacionado la NC con el desarrollo de ateroesclerosis junto con una serie de otros factores alterados tales como fuerzas hemodinïmicas, mediadores inflamatorios, activaciïn plaquetaria, cascada de coagulaciïn y factores metabïlicos. Ademïs, existen pruebas epidemiolïgicas sïlidas de que el fïsforo sïrico es un factor de riesgo independiente para los episodios cardiovasculares agudos y la mortalidad en la NC (Kestenbaum, B. et al., J. Am. Soc. Nephrol. 16:520-528, 2005; Slinin, Y. et al., J. Am. Soc. Nephrol. 16:1788-1793, 2005) .3, 4 Se ha relacionado el fïsforo sïrico con otro factor de riesgo cardiovascular, la calcificaciïn vascular (CV) (Kestenbaum et al. 2005; London, G.M. et al., Nephrol. Dial. Transplant. 18:1731-1740, 2003; Raggi, P. et al., J. Am. Coll. Cardiol. 39:695-701, 2002) 3, 5, 6, una causa importante de la rigidez vascular en la NC. La rigidez vascular por diversas causas incluida la NC, la ateroesclerosis, las enfermedades metabïlicas y la diabetes, es uno de los principales factores de riesgo cardiovascular, que da lugar a un aumento de la velocidad de las ondas de pulso, un aumento del esfuerzo cardïaco, hipertrofia del ventricular izquierdo y una disminuciïn del flujo sanguïneo arterial coronario. (Raggi 2002; Zile, M.R. et al., New Engl. J. Med. 350:1953-1959, 2004; Ohtake, T. et al., J. Am. Soc. Nephrol. 16:1141-1148, 2005) .6-8 Ademïs, se ha apuntado al fïsforo como causa de la CV por estudios in vitro que han demostrado que induce cambios fenotïpicos en las cïlulas musculares lisas vasculares al aumentar la transcripciïn gïnica de proteïnas que participan en la funciïn de los osteoblastos (la formaciïn del hueso) (Tyson, K.L. et al., Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 23:489-494, 2003) 9 y estimular la mineralizaciïn de la matriz (Steitz, S.A. et al., Circ. Res. 89:1147-1154, 2001; Jono, S. et al., Cir. Res. 87:e10-e17, 2000; Reynolds, J.L. et al., J. Am. Soc. Nephrol. 15:2857-2867, 2004) 10-12. En el entorno calcificante urïmico, se suprime la expresiïn de las proteïnas contrïctiles de las cïlulas musculares lisas vasculares, tales como la actina α de mïsculo liso, SM22 y la miosina de cadena pesada (Trion, A. y van der Laarse, A., Am. Heart J. 147:808-814, 2004) , 13 mientras que los marcadores de linaje osteoblïstico tales como la osteocalcina, la osteopontina y las proteïnas morfogïnicas ïseas 2 y 4, aumentan (Tyson 2003; Moe, S.M. et al., Kidney Int'l 61:638-647, 2002; Bostrom, K. et al., J Clin. Invest. 91:1800-1809, 1993; Dhore, C.R. et al., Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 21:1998-2003, 2001) .9, 14-16 Ademïs, el factor de transcripciïn especïfico de osteoblastos RUNX2, que dirige la formaciïn de los huesos esquelïticos (Ducy, P. et al., Cell 89:747-754, 1997) , 17 se expresa en la vasculatura de sujetos con nefropatïa terminal (NT) (Tyson 2003; Moe, S.M. et al., Kidney Infl 63:1003-1011, 2003) .9, 18

Recientemente se ha identificado un modelo animal de CV estimulada por NC en el ratïn ateroesclerïtico deficiente en receptores de lipoproteïnas de baja densidad con una alimentaciïn rica en grasas alimenticias (Davies, M.R. et al., J. Am. Soc. Nephrol. 14:1559-1567, 2003) .19 En este modelo, la NC se asocia con hiperfosfatemia. Se ha demostrado que la hiperfosfatemia es una causa directa de CV en la NC (Davies, M.R. et al., J. Am. Soc. Neph. 16:917-928, 2005) .20 Esta fue la primera demostraciïn in vivo de que la hiperfosfatemia es la causante de una complicaciïn cardiovascular de la enfermedad. Ademïs, se ha demostrado que el esqueleto en la NC contribuye de forma significativa con fïsforo a la hiperfosfatemia, (Davies 2005; Lund, R, J, et al., J. Am. Soc. Nephrol. 15:359-369, 2004) 20, 21 junto con la absorciïn intestinal del fïsforo ingerido y una eliminaciïn renal disminuida. Esto establece una relaciïn directa entre la remodelaciïn del esqueleto y la CV en la NC a travïs del fïsforo sïrico. El mecanismo de la acciïn del fïsforo en la vasculatura no se ha demostrado aïn, a pesar de los recientes avances que apuntan a acciones directas del ion (Jono 2000; Li, X. et al., Circ. Res. 98:905-912, 2006) .11, 22

Sumario de la invenciïn La presente invenciïn se refiere a una composiciïn farmacïutica que comprende el morfïgeno PMO-7 para su uso en el tratamiento, la prevenciïn o la reducciïn de la hiperplasia de la neoïntima en un sujeto. Ademïs, la presente invenciïn se refiere al uso del morfïgeno PMO-7 para la preparaciïn de una composiciïn farmacïutica para tratar, evitar o reducir la hiperplasia de la neoïntima en un sujeto. En algunos modos de realizaciïn, la hiperplasia de la neoïntima se asocia con la anastomosis. En otros modos de realizaciïn, la hiperplasia de la neoïntima estï inducida por una nefropatïa crïnica.

En cualquiera de los aspectos y modos de realizaciïn descritos en el presente documento, un anïlogo de la PMO-7 representa cualquier PMO similar que tenga estructuras altamente homïlogas, es decir, un esqueleto de seis o siete cisteïnas que, a travïs de puentes disulfuro, forma una estructura diferente en la parte C-terminal del polipïptido, en el que la secuencia de aminoïcidos de tal esqueleto de seis o siete cisteïnas comparte el 70, el 80, el 90 o el 95 % de similitud o identidad al mismo tiempo que conserva las cisteïnas y en el que las actividades biolïgicas pueden sustituir total o parcialmente a la PMO-7.

Breve descripciïn de las figuras La figura 1 muestra los efectos de la PMO-7 sobre la calcificaciïn vascular en la NC.

La figura 2 muestra los efectos del CaCO3 y el LaCO3, ambos al 3 % mezclados con la dieta, sobre la calcificaciïn vascular en la NC.

La figura 3 muestra secciones de la aorta proximal que presentan placas ateroesclerïticas calcificadas grandes en ratones LDLR-/-con alimentaciïn rica en grasas.

La figura 4 muestra que la mineralizaciïn de la matriz se ve estimulada en cultivos de cïlulas musculares lisas vasculares humanas (hCMLV) aisladas a partir donantes ateroesclerïticos.

La figura 5 muestra la estimulaciïn... [Seguir leyendo]

1. Una composiciïn farmacïutica que comprende el morfïgeno PMO-7 para su uso en el tratamiento, la prevenciïn o la reducciïn de la hiperplasia de la neoïntima en un sujeto.

2. Uso del morfïgeno PMO-7 para la preparaciïn de una composiciïn farmacïutica para tratar, evitar o reducir la 5 hiperplasia de la neoïntima en un sujeto.

3. La composiciïn farmacïutica para el uso de la reivindicaciïn 1 o el uso de la reivindicaciïn 2, en la que la hiperplasia de la neoïntima estï asociada con anastomosis.

4. La composiciïn farmacïutica para el uso o el uso de la reivindicaciïn 3, en la que la hiperplasia de la neoïntima estï inducida por una nefropatïa crïnica.

5. La composiciïn farmacïutica para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 3 o 4, o el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en la que el PMO-7 es PMO-7 humano que comprende la secuencia de aminoïcidos de la SEC ID N.ï: 2.

*p < 0, 001 frente B

% de similitud de secuencia con el dominio de siete cisteïnas de la PO-1 humana

Secuencia % de similitud % no conservativo

hPO-1 mPO-1 hPO-2 mPO-2 PMO-5 PMO-6 Vgr-1 (PT) PO-3 60A PMO-4 PMO-2 dpp UNIVINA dpp (PT) Vg-1 CDMP-1 CDMP-3 GDF-3 CDMP-2 DORSALINA GDF-1 (PT) GDF-10 PMO-3b PMO-10 PMO-3 SCREW ADMP TGF-β2 GDF-1 PMO-9 NODAL Inhibina βA PMO-15 100 100 97 97 97 66 94 91 80 90 89 87 87 86 88 85 83 83 82 79 78 78 78 78 78 77 77 73 73 73 71 71 71 0 0 3 3 3 4 6 9 10 10 11 13 13 14 14 16 17 17 18 21 22 22 22 23 23 23 24 27 28 28 29 29 29

TGF-β3 Inhibina βB Inhibina βC TGF-β5 TGF-β1 GDF-12 GDF-11 TGF-β4 GDF-9 GDF-8 PMO-11 GDNF 69 69 69 67 67 67 68 66 68 64 60 49 31 31 31 33 33 33 34 34 34 36 40 51

Fig. 10

SEC ID N.ï: 1 Secuencia de aminoïcidos de la PO-1 humana Figure 13

SEC ID N.ï: 2 Secuencia de aminoïcidos del esqueleto de 6 cisteïnas conservadas de la PO-1 humana SEC ID N.ï: 3 Secuencia de aminoïcidos de la PO-1 humana de longitud completa morfogïnicamente activa SEC ID N.ï: 4 Secuencia de aminoïcidos de la PO-1 de ratïn madura SEC ID N.ï: 5 Secuencia de aminoïcidos de la PO-2 humana madura SEC ID N.ï: 6 Secuencia de aminoïcidos de la PO-2 de ratïn madura SEC ID N.ï: 7 Secuencia de aminoïcidos de la DPP de Drosophila SEC ID N.ï: 8 Secuencia de aminoïcidos de la VG1 de Xenopus SEC ID N.ï: 9 Secuencia de aminoïcidos de la Vgr-1 de ratïn SEC ID N.ï: 10 Secuencia de aminoïcidos de la CPMO2A humana CPMO2A (fx)

SEC ID N.ï: 11 Secuencia de aminoïcidos de la CPMO2B humana CPMOB (fx)

SEC ID N.ï: 12 Secuencia de aminoïcidos de la PMO3 humana SEC ID N.ï: 13 Secuencia de aminoïcidos de la GDF-1 humana SEC ID N.ï: 14 Secuencia de aminoïcidos de la 60A de Drosophila SEC ID N.ï: 15 Secuencia de aminoïcidos de la PMO5 humana SEC ID N.ï: 16 Secuencia de aminoïcidos de la PMO6 humana SEC ID N.ï: 17 Secuencia de ADNc de la PO-1 humana de longitud completa SEC ID N.ï: 18 Secuencia de ADNc de la PO-1 de ratïn de longitud completa SEC ID N.ï: 19 Secuencia de aminoïcidos de la PO-1 de ratïn de longitud completa SEC ID N.ï: 20 Secuencia de ADNc de la PO-2 humana de longitud completa SEC ID N.ï: 21 Secuencia de aminoïcidos de la PO-2 humana de longitud completa SEC ID N.ï: 22 Secuencia de ADNc de la PO-2 de ratïn de longitud completa SEC ID N.ï: 23 Secuencia de aminoïcidos de la PO-2 de ratïn de longitud completa SEC ID N.ï: 24 Secuencia genïrica N.ï 1