Composición para tratar la isquemia de las extremidades que comprende células madre procedentes de tejido adiposo.

Una composición terapéutica celular, que contiene 1 x 105 - 1 x 108 células/ml de células madre mesenquimalesprocedentes de tejido adiposo,

disolución salina fisiológica, sacarosa al 2%, albúmina al 5% y AEDT 1 mM.

Composición para tratar la isquemia de las extremidades que comprende células madre procedentes de tejido adiposo.

Campo técnico

La presente invención se refiere a composiciones terapéuticas celulares y más en particular a composiciones terapéuticas celulares para uso para tratar isquemias, en la que las composiciones contienen células madre mesenquimales procedentes de tejido adiposo y excipientes.

Técnica anterior

Las isquemias de las extremidades incluyen pie diabético, que muestra trastorno circulatorio periférico causado por

oclusión de las arterias o venas debido a trombosis intravascular, embolia, inflamación intravascular, hipertensión, hiperlipidemia y complicaciones diabéticas, síntomas que tienen lugar en las extremidades debido a lesión de los vasos sanguíneos causada por factores externos, tales como quemaduras o sabañones, enfermedad de Buerger que aparece como inflamación vascular y trombosis en hombres de mediana edad que son grandes fumadores, ejemplos típicos de los cuales son arteriosclerosis obliterante, tromboangeitis obliterante y similares.

Los métodos actuales para tratar dichas enfermedades incluyen tratar preferentemente las enfermedades que causan trombosis o embolia, por ejemplo, arritmia, mixoma auricular y eritrocitosis y síntomas de alivio temporal usando agentes trombolíticos o administrando un vasodilatador y un agente mejorador de la circulación, etc. para aumentar el diámetro luminal, por ejemplo, dextrano, anticoagulantes, fenilbutazona, persantin, hormonas de la corteza adrenal, agentes inmunosupresores o prostaglandina E1.

Los métodos de tratamiento quirúrgico incluyen un método para eliminar los dolores en las áreas isquémicas por simpatectomía, bloqueo epidural y bloqueo simpático, un método para aliviar el excesivo tono simpático para inducir el efecto de mejorar la vasodilatación y la circulación sanguínea, endarterectomía, cirugía de injerto de derivación usando vasos sanguíneos artificiales tales como Gortex y lesionectomía.

Sin embargo, los métodos de tratamiento con fármacos descritos anteriormente o tratamiento quirúrgico presentan problemas por que alivian temporalmente los síntomas de la isquemia o muestran un alto riesgo de reaparición. Por esta razón, hay una necesidad de desarrollar un método capaz de tratar de manera fundamental las isquemias.

Células madre se refiere a células que no sólo presentan capacidad de autoreplicación sino también la capacidad de diferenciarse en al menos dos células y se pueden dividir en células madre totipotentes, células madre pluripotentes y células madre multipotentes.

Recientemente, se encontró que el tejido adiposo era una nueva fuente de células madre multipotentes (Cousin et al, BBRC, 301:1.016, 2.003; Miranville et al., Circulation, 110: 349, 2.004; Gronthos et al, J. Cell Physiol., 189: 54, 2.001; Seo et al, BBRC, 328: 258, 2.005) . Es decir, se indicó que un grupo de células no diferenciadas se incluye en el tejido adiposo humano obtenido por liposucción y presenta la capacidad de diferenciarse en células grasas, células osteogénicas, mioblastos y condroblastos (Zuk et al, Tissue Eng., 7: 211, 2.001; Rodriguez et al, BBRC, 315:

255, 2.004) . Este tejido adiposo presenta una ventaja por que se puede extraer en grandes cantidades, se puede hacer proliferar en grandes cantidades por cultivo de tejido y se puede inyectar repetidamente puesto que es tejido autólogo de manera que no hay riesgo de reacción de inmunorechazo. Por lo tanto, recibe atención como una nueva fuente de células madre, que supera las deficiencias existentes de células madre procedentes de médula ósea o sangre del cordón umbilical, tales como dificultades en la recogida de las mismas, alto coste y que se tiene que encontrar una correspondencia adecuada por la verificación de la compatibilidad de los tejidos.

También, recientes estudios usando experimentos en modelos animales indican que las células procedentes de tejido adiposo presentan las capacidades para regenerar músculos y estimular la diferenciación de los vasos sanguíneos nerviosos. Así, estas células procedentes de tejido adiposo encuentran atención como una nueva fuente de células madre.

Las células madre procedentes de tejido adiposo conocidas hasta ahora incluyen células madre adultas de procedencia adiposa, humanas, que pueden diferenciarse en células epiteliales (Brzoska et al, BBRC, 330: 142, 2.005) , células madre adultas de procedencia adiposa, humanas, que pueden diferenciarse en células osteogénicas y grasas (Cao et al., BBRC, 332: 370, 2.005) , células madre adultas de procedencia adiposa, humanas, que pueden diferenciarse en células nerviosas (Safford et al., BBRC, 294: 371, 2.002) , células madre de procedencia adiposa de 50 ratas que pueden diferenciarse en células grasas (Ogawa et al., BBRC, 319: 511, 2.004) , células madre de procedencia adiposa de ratas que pueden diferenciarse en células osteogénicas y condrogénicas (Ogawa et al, BBRC, 313: 871, 2.004) , células madre de procedencia adiposa, humanas, que pueden diferenciarse en células de cartílago (Biomaterials, 25: 3.211, 2.004) , células madre de procedencia adiposa de rata que pueden diferenciarse en células nerviosas (Fujimura et al, BBRC, 333: 116, 2.005) y células madre de procedencia adiposa que pueden 55 diferenciarse en células óseas, células de cartílago, células nerviosas o células musculares (patente de EE.UU. 6.777.231) .

El documento de patente internacional WO 2006/134951 desvela una célula madre de procedencia grasa aislada de un aspirado de grasa y una caracterización de dicha célula madre. Además se desvela un método de cultivo para una célula madre no diferenciada o una célula madre pluripotente cultivada, especialmente un cultivo a largo plazo para una célula madre de procedencia grasa. Se desvela además el tratamiento de isquemia por administración de células madre de procedencia adiposa.

El documento de patente internacional WO 2006/136244 desvela métodos y composiciones que utilizan células estromales de procedencia adiposa para tratar fístulas. Además se desvelan portadores adecuados para células madre estromales procedentes de tejido adiposo incluyendo azúcares y polioles.

El documento de patente internacional WO 03/059272 desvela un método para multiplicar la producción de factores que inducen angiogénesis y vasculogénesis segregados por exposición de células madre a, y co-cultivo de, las células madre con un compuesto para aumentar la producción de factores que inducen angiogénesis y vasculogénesis. Además se desvela una terapéutica para uso en la inducción de angiogénesis y vasculogénesis, incluyendo la terapéutica factores que inducen angiogénesis y vasculogénesis aislados de células madre junto con un tratamiento de células farmacéuticamente aceptable.

En intentos por tratar isquemias, la Publicación de Patente Coreana Nº 2003-0034177 desvela un método para tratar isquemias usando células madre hematopoyéticas cuya diferenciación ha sido inducida por G-CSF y la Publicación de Patente Coreana Nº 2005-0111593 desvela un método para tratar isquemias usando células madre mesenquimales con un gen de angiopoietina introducido en las mismas. Sin embargo, los métodos previos presentan problemas por que las células madre se usan de manera auxiliar o por que el almacenaje de agentes terapéuticos celulares que comprenden células madre no es estable.

De acuerdo con esto, los presentes autores han hecho muchos esfuerzos para desarrollar un método para tratar isquemias usando células madre más estables y, como resultado, han encontrado que, cuando las células madre adiposas proceden de tejido adiposo, al que se ha añadido un excipiente tal como sacarosa, se introducen en un modelo de ratón de isquemia, se producen de manera eficaz nuevos vasos sanguíneos, completando de ese modo la presente invención.

Sumario de la invención Es un objeto de la presente invención proporcionar composiciones terapéuticas celulares para uso para tratar isquemias, que contienen células madre mesenquimales procedentes de tejido adiposo como ingredientes activos y muestran alta estabilidad durante almacenaje en frío o congelado.

Para conseguir el objeto anterior, la presente invención proporciona una composición terapéutica celular que contiene 1 x 105 - 1 x 108 células/ml de células madre mesenquimales procedentes de tejido adiposo, disolución salina, sacarosa al 2%, albúmina al 5% y AEDT 1 mM. La invención además proporciona una composición terapéutica celular, que contiene 1 x 105 - 1 x 108 células/ml de células madre mesenquimales procedentes de tejido adiposo, disolución... [Seguir leyendo]

1. Una composición terapéutica celular, que contiene 1 x 105 -1 x 108 células/ml de células madre mesenquimales procedentes de tejido adiposo, disolución salina fisiológica, sacarosa al 2%, albúmina al 5% y AEDT 1 mM.

2. Una composición terapéutica celular, que contiene 1 x 105 -1 x 108 células/ml de células madre mesenquimales procedentes de tejido adiposo, disolución salina fisiológica, sacarosa al 2%, albúmina al 2% y AEDT 10 mM.

3. Una composición terapéutica celular, que contiene 1 x 105 -1 x 108 células/ml de células madre mesenquimales procedentes de tejido adiposo, disolución salina fisiológica, sacarosa al 2%, albúmina al 5% y DMSO al 10%.

4. La composición terapéutica celular según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para uso para tratar 10 isquemias.