PROCEDIMIENTO DE CULTIVO DE PLANTAS.

La presente invención se refiere a un procedimiento para la producción de plantones y/o una reserva de plantas micro-parentales, pero especialmente a plantas que pertenecen al grupo de ornamentales herbáceas, que comprende una fase de cultivo in vitro durante la cual los explantes obtenidos a partir de la reserva parental de las especies de plantas objeto de propagación, o los derivados de estos explantes, se someten a uno o más ciclos de micro-propagación que se llevan a cabo en condiciones apropiadas y sobre medios de cultivo apropiados, con el fin de producir micro-plántulas que, cuando son sometidas a una fase de cultivo in vivo, se espera que se desarrollen para dar lugar a plantas o para dar lugar a una reserva micro-parental. Se sabe que la micro-propagación in vitro de una planta en presencia de luz da lugar a una mayor tasa de propagación vegetativa provocando la ruptura del máximo número de brotes auxiliares posible en una plántula mantenida en un medio de cultivo específico con el fin de desarrollar escapos. Los procedimientos de producción de plantas que se basan en una fase de cultivo in vitro en presencia de luz y una fase posterior in vivo resultan conocidos por los trabajadores expertos desde hace años. Se reconoce en la técnica que estos procedimientos presentan un número de ventajas que básicamente son el resultado de experimentar una fase in vitro lo que se refleja no sólo en términos de calidades de las plantas producidas por área, sino también en términos de salud de la planta, calidad y aspecto final de la misma. No obstante, su uso en horticultura está siendo actualmente restringido ya que cada tipo de desarrollo de planta requiere condiciones específicas de cultivo, cuyo desarrollo supone un gran consumo de tiempo y esfuerzo y por tanto de dinero. Las tasas de propagación que se pueden conseguir con dichos procedimientos todavía no resulta suficientes para compensar estas desventajas. Además, se han encontrado que determinadas especies de plantas tales como, en particular, pelargonio, para las cuales se ha intentado esta vía de producción, no se prestan fácilmente a estos procedimientos conocidos de micropropagación. D1 (Cassells et al., Scientia Horticulturae, Vol 21(1), pp.53-66, 1983) divulga un procedimiento para la micropropagación de Perlargonium cultivars. Las puntas de los brotes que consisten en el acabado apical y el primer par de primordios de hojas se someten a escisión sin esterilización. Se cultivan los brotes escindidos sobre un medio de Hamdorf modificado y se colocan en oscuridad. Los brotes que ya existen en las puntas de brotes escindidos se desarrollan para dar lugar a plantas. D2 (WO 92/18617) divulga un procedimiento para la propagación de variedades de Pelargonium x domesticum mediante propagación de cultivo tisular de secciones del pecíolo tomadas de una planta madre. Una etapa esencial de este procedimiento incluye llevar a cabo la formación del callo mediante el cultivo inicial del pecíolo en oscuridad. Ninguno de los procedimientos divulgados en D1 ni en D2 conduce a un desarrollo apreciable de las plantas. Uno de los objetivos de la presente invención es, por tanto, proponer un procedimiento para la producción de plantones y/o reservas de plantas micro-parentales que se adapte perfectamente al cultivo de dichas plantas, pero especialmente de plantas que pertenecen al grupo de ornamentales herbáceas tales como, en particular; pelargonio, petunia incluyendo petunia colgante, poinsettia, ciclamen, crisantemo, alegría, verbena o torenia, con el fin de conseguir mayores tasas de propagación. Además, otro objetivo de la invención es proporcionar un procedimiento de aplicación que posibilitaría la consecución de tasas de desarrollo mucho mayores que las que se obtienen hasta el momento con los procedimientos en los que la fase de desarrollo se lleva a cabo en presencia de luz. Además, un objetivo de la presente invención es también proponer un procedimiento para la producción de plantones y/o reservas de plantas micro-parentales, pero especialmente de plantas que pertenecen al grupo de las ornamentales herbáceas, integrando dicho procedimiento una técnica particular de micro-propagación in vitro con el objetivo de que sea posible obtener plantones más vigorosos o reservas de plantas con una tasa de ramificación excepcionalmente elevada y un desarrollo más rápido. Otro objeto de la invención es proponer un procedimiento de propagación vegetativa que resulte apropiado para garantizar el estado de salud y el mantenimiento de los criterios genéticos, pero especialmente la conformidad genética de las plantas durante generaciones, dando lugar a poblaciones de plantas con propiedades sincronizadas y uniformes desde el punto de vista del fenotipo. La fase de cultivo in vitro de acuerdo con la presente invención resulta también apropiada para la mecanización, debido a que se puede conseguir la miniaturización de la producción de esquejes aplicando el procedimiento de acuerdo con la presente invención. Se pueden proporcionar plantas en bandejas de alta densidad, lo que se puede usar de manera apropiada en sistemas de transplante automatizados que incorporan robots de transplante. Finalmente, el procedimiento del cual es objeto la presente invención va destinado a mejorar los retornos 2 E05749705 04-01-2012   económicos de la producción de plantas reduciendo el tiempo consumido y la superficie requerida para la propagación, llevando a cabo una micro-propagación in vitro en condiciones específicas. En el presente documento se divulga un procedimiento para la producción de plantones y/o reservas de plantas micro-parentales, pero especialmente plantas que pertenecen a las ornamentales herbáceas, comprendiendo dicho procedimiento una fase de cultivo in vitro durante la cual los explantes obtenidos a partir de la reserva parental de especies objeto de propagación, o los derivados de estos explantes, son sometidos a una fase de micropropagación, que se lleva a cabo en condiciones apropiadas y sobre el medio de cultivo apropiado, con el fin de producir micro-plántulas que, cuando se someten a una fase de cultivo in vivo, se pretende que se desarrollen para dar lugar a plantas o a una reserva micro-parental, que se caracteriza por que, para llevar a cabo dicha micropropagación: (a) los explantes se obtienen a partir de reservas parentales de especies objeto de propagación, o de derivados de estos explantes, (b) los explantes, en condiciones axénicas, se colocan sobre un medio de inicio de escapos que se encuentra adaptado a cada especies de planta objeto de propagación, y, en oscuridad y durante un período de tiempo apropiado, se someten a desarrollo de manera que se induce la formación de filamentos de color blanco que comprenden los brotes auxiliares, (c) de manera opcional, posteriormente se divide cada uno de los filamentos de color blanco en una pluralidad de segmentos o piezas, cada una de las cuales comprende un brote auxiliar, (d) y se coloca cada uno de los filamentos y/o sus piezas o sus segmentos, en presencia de luz, en condiciones axénicas y durante un período de tiempo apropiado, en el interior de o sobre un medio de enraizamiento, que permite que cada brote auxiliar produzca una micro-plántula que presenta raíces. En una primera realización de la invención, el procedimiento para producir los plantones y/o la reserva de plantas micro-parental que implica la etapa de micro-propagación, se caracteriza por que (a) los tallos de los explantes y las ramas se obtienen a partir de la reserva parental de especies objeto de propagación, (b) se colocan los explantes, en condiciones axénicas, en un medio de inicio de escapos que se encuentra adaptado a cada especie de planta objeto de propagación, y, en oscuridad y durante un período de tiempo apropiado, se someten a desarrollo de manera que se induzca la formación de filamentos de color blanco que comprenden uno o más brotes auxiliares, (c) posteriormente se divide cada uno de los filamentos de color blanco en una pluralidad de segmentos o trozos, comprendiendo cada uno de ellos al menos un brote auxiliar, (d) se transfieren los filamentos de color blanco y/o sus trozos o sus segmentos obtenidos en la etapa b), en condiciones axénicas, a un medio de desarrollo y se someten a desarrollo en oscuridad durante un período de tiempo suficiente para permitir la multiplicación del tejido de los esquejes de plantas y para producir una gran cantidad de filamentos ahilados de color blanco que comprenden entre 2 y 10 nudos auxiliares, que se desarrollan para dar lugar a escapos, produciéndose el ahilado de los escapos auxiliares para dar lugar filamentos de color blanco si se someten a desarrollo en oscuridad. (e) se repite esta etapa (d) tantas veces como sea necesario con el fin de producir generaciones consecutivas diferentes de filamentos de color blanco... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para la producción de plantones y/o una reserva de plantas micro-parental que pertenecen al grupo de ornamentales herbáceas, comprendiendo dicho procedimiento una fase de cultivo in vitro durante la cual los explantes obtenidos a partir de la reserva parental de especies objeto de propagación, se someten a micro- propagación que se lleva a cabo en condiciones apropiadas y en un medio de cultivo apropiado, con el fin de producir micro-plántulas que, cuando se someten a una fase de cultivo in vivo, se pretende que se desarrollen para dar lugar a plantas o para dar lugar a la reserva micro-parental, que se caracteriza porque, para llevar a cabo dicha micro-propagación: a) los tallos de explantes de ramas se obtienen a partir de la reserva parental de especies objeto de propagación, b) los explantes se colocan, en condiciones axénicas, en oscuridad durante un período de tiempo apropiado, en un medio de inicio de escapo que está constituido de manera tal que se adapta a cada especie de planta objeto de propagación, dando lugar a la inducción de una primera generación de formación de filamentos de color blanco, comprendiendo dicha primera generación de filamentos uno o más brotes auxiliares, c) cada filamento de color blanco se encuentra dividido en una pluralidad de trozos, comprendiendo cada uno de ellos al menos un brote auxiliar, y dichos filamentos y/o trozos obtenidos a partir de una primera generación de filamentos de color blanco son colocados de nuevo en condiciones axénicas y en oscuridad en un medio de proliferación durante un período de tiempo apropiado para permitir que los tejidos de los esquejes de plantas se multipliquen con el fin de producir un gran cantidad de filamentos de color blanco ahilados, que comprenden entre 2 y 10 nudos auxiliares, con el fin de inducir la formación de una nueva generación de filamentos de color blanco, y se repite el procedimiento tanto como sea necesario para producir generaciones consecutivas diferentes de filamentos de color blanco hasta que se haya obtenido la cantidad deseada de filamentos de color blanco; d) y dichos filamentos y/o trozos se colocan en condiciones axénicas, en presencia de luz, y durante un período de tiempo apropiado, o en el interior de un medio de enraizamiento, que permite que cada brote auxiliar produzca una micro-plántula que presenta raíces. 2. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, que se caracteriza porque se usan meristemos tomados de la reserva parental como explantes que se cultivan en condiciones axénicas en presencia de luz durante un primer período de tiempo en un medio de desarrollo común a cada variedad de planta objeto de propagación, con el fin de producir la formación de pequeñas plántulas que presentan unos primeros primordios foliares y posteriormente, durante un segundo período de tiempo, en un medio de enraizamiento común para cada variedad de planta, con el fin de obtener plántulas enraizadas que se encuentran libres de bacterias y viruses con la intención de colocarlas en el medio de proliferación en oscuridad para producir dichos filamentos de color blanco. 3. El procedimiento de la reivindicación 1, que se caracteriza porque se usan micro-esquejes tomados de la reserva parental certificada libre de bacterias y de virus como explantes. 4. El procedimiento de acuerdo con al reivindicación 1 ó 2, que se caracteriza porque, los filamentos y/o sus trozos obtenidos a partir de una primera generación de filamentos de color blanco se vuelven a colocar en condiciones axénicas en un medio de proliferación nuevo y se cultivan en oscuridad durante un período de tiempo apropiado con el fin de inducir la formación de una nueva generación de filamentos de color blanco, y se repite el procedimiento tanto como sea necesario con el fin de producir una generación consecutiva diferente de filamentos de color blanco hasta que se haya obtenido la cantidad deseada de filamentos de color blanco. 5. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que se caracteriza porque se emplea un sistema de cultivo de dos capas con el fin de favorecer la multiplicación del escapo que se caracteriza porque se proporciona el medio de inicio de escapo y/o el medio de proliferación en forma de un sistema de dos capas que comprende una capa inferior solidificada que comprende básicamente macro y micro-elementos, vitaminas y una fuente de carbono, pero no un regulador de desarrollo, estando superpuesta la capa inferior con una capa superior de fluido que comprende un regulador de desarrollo, que contribuye a la multiplicación del escapo favoreciendo la ruptura y el desarrollo de brotes auxiliares para dar lugar a escapos ahilados y además para dar lugar a filamentos de color blanco y/o el desarrollo de escapos en crecimiento para dar lugar a escapos que comprenden entre 2 y 10 nudos auxiliares. 6. El procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones anteriores, que se caracteriza porque el número de brotes auxiliares de un filamento de color blanco que se desarrolla a partir de un nudo inicial está al menos entre 2 y 10 brotes auxiliares/por nudo inicial. 7. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que se caracteriza porque se usa el medio de cultivo de tipo MS como medio de inicio y/o proliferación, enriquecido con un regulador de desarrollo que se proporciona en una concentración que contribuye a la multiplicación de escapos favoreciendo la ruptura y el desarrollo de brotes auxiliares para dar lugar a escapos ahilados y posteriormente para dar lugar a filamentos de color blanco y/o el desarrollo de escapos en crecimiento para dar lugar escapos que comprenden entre 2 y 10 nudos auxiliares. 17 E05749705 04-01-2012   8. El procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que se caracteriza porque el medio de inicio y/o proliferación de escapo comprende un regulador de desarrollo que pertenece a la familia de reguladores de desarrollo de citoquinina o una combinación de reguladores de desarrollo que pertenecen a la familia de reguladores de desarrollo de citoquinina y a la familia de reguladores de desarrollo de auxina. 9. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 8, que se caracteriza porque los reguladores de desarrollo que pertenecen a la familia de reguladores de desarrollo de citoquinina o a la familia de reguladores de desarrollo de auxina se proporcionan en una concentración de entre 0,01 mg/l y 5,0 mg/l. 10. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que se caracteriza porque los filamentos de color blanco se almacenan, a temperatura ambiente, y en oscuridad, en un medio de proliferación que se cambia periódicamente, antes de ser sometido a la fase de enraizamiento, durante la cual cada brote produce una micro-plántula enraizada con la intención de proporcionar un plantón o una reserva de planta microparental. 11. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 10, que se caracteriza porque los filamentos de color blanco se almacenan a una temperatura de entre 2 o C y 10 o C, durante hasta 10 meses antes de ser sometidos a la fase de enraizamiento. 12. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que se caracteriza porque las plantas seleccionadas entre el grupo que consiste en pelargonio, petunia incluyendo petunia colgante, poinsettia, ciclamen, crisantemo, alegría, verbena y torenia, se usan en el procedimiento de acuerdo con las reivindicaciones anteriores. 18 E05749705 04-01-2012