Dispositivo y método para la preparación automática reproducible de muestras de células y de tejidos a investigar, dispuestas sobre portaobjetos.

Dispositivo (1) para la preparación automática reproducible de muestras de células y de tejidos a investigarse,

principalmente de un material de paciente, que están dispuestas sobre portaobjetos sobre portaobjetos (15), encuyo caso el dispositivo comprende una pluralidad de estaciones modulares que realizan respectivamente un pasodel trabajo en una secuencia de pasos de trabajo, en cuyo caso el dispositivo (1) comprende al menos un equipopara posicionar correctamente las muestras (22,611,612,615) sobre un portaobjetos (15) y un equipo parasuministrar una película de muestra, provista con cortes de células o de tejido (22,611,612,615), la cual está hechade un primer sustrato transparente (61), a un portaobjetos (15) y un equipo para segmentar las muestras (613), y undispositivo de separación (21) para separar las muestras, y que el dispositivo (1) tiene al menos un equipo (8) paratransportar el portaobjetos (15) equipado a las estaciones individuales (13, 17, 19) para seguir procesándose,caracterizado porque el equipo para segmentar las muestras (613) comprende un punzón un punzón (20), y porqueel dispositivo para separar (21) comprende una leva de disco (30), en cuyo caso, como resultado del movimiento depivote de la leva de disco (30), un gran número de dispositivos de sujeción (26) son movibles sobre trayectos de leva(29) desde una posición esencialmente central en una posición definida distanciados entre sí.

Dispositivo y método para la preparación automática reproducible de muestras de células y de tejidos a investigar, dispuestas sobre portaobjetos.

La invención se refiere a un dispositivo para la preparación automatizada reproducible de muestras de células y de tejidos, principalmente de un material de pacientes, dispuestas sobre portaobjetos, en cuyo caso el dispositivo comprende una pluralidad de estaciones modulares que desempeñan respectivamente un paso de trabajo en la secuencia total de pasos de trabajo, según el concepto general de la reivindicación 1. Además, la invención se refiere a un método para preparar muestras de este tipo, según el concepto general de la reivindicación 15.

En el pasado más reciente, debido al mejoramiento de métodos de análisis de ingeniería genética, se ha generado una demanda elevada de investigaciones en tejidos. Principalmente, en el contexto de la oncología al tratar y diagnosticar el cáncer cada vez con mayor frecuencia se confía más en los análisis de expresión génica. En el caso de un análisis de este tipo se aprovecha el hecho que de 25.000 genes existentes del genoma humano, con frecuencia solo 200 a 300 son determinantes para la función de un tumor. De estos genes característicos, a su vez pueden extraerse 20 a 30, los cuales, sin un deterioro significativo de la evidencia estadística, pueden dar una información confiable respecto del estado del tumor, el efecto de un tratamiento y el curso de la enfermedad. Con un análisis de expresión génica se investigan tumores para determinar si se encienden o apagan genes especiales y cuáles genes se encuentran presentes. Esto sucede por medio de muestras de células o de tejidos que se investigan por medio de anticuerpos especiales los cuales luego proporcionan evidencia específica de los genes en el tejido mediante métodos de tinturado.

Los dispositivos y métodos conocidos hasta ahora como se divulga, por ejemplo, en la EP 1370639 y en la WO 01/22086, emplean campos de tejidos que consisten en arreglos de campo de diversas muestras de tejido y simultáneamente se exponen a un agente con el cual puede aplicarse un anticuerpo específico a las diferentes muestras de tejidos. Después de un tinturado a continuación, todas las diferentes muestras de tejido colocadas sobre el portaobjetos se investigan bajo el microscopio.

Para la preparación de muestras de tejidos primero se troquelan bloques de tejido a partir de tejidos por investigar y luego se colocan en un bloque de parafina. El tamaño de los bloques de tejidos depende aquí del diámetro proyectado del punzón. A partir de varios bloques de parafina de este tipo se forman luego los llamados bloques de parafina de zona tomando con un tubo de muestra delgado respectivamente un cilindro troquelado de la muestra de tejido presente en el bloque de parafina y se introduce en otro bloque de parafina según el tipo de un campo, de tal modo que, por ejemplo, pueden alojarse hasta 240 diferentes muestras de tejido diferentes de diferente procedencia en un bloque de este tipo. Para la investigación a continuación se efectúa luego un corte parcial, transversal al eje del cilindro, y de esta manera se obtiene una capa delgada de las diferentes pruebas de tejido, prácticamente según el tipo de una trama incrustada en parafina, la cual se coloca sobre un portaobjetos y puede investigarse.

Disposiciones de este tipo y los métodos de investigación a continuación tienen principalmente la desventaja de que no son posibles investigaciones individualizadas, es decir referenciadas a un paciente porque una vez combinados en un cilindro de cera se examina, o debe examinarse, una y otra vez. Otra desventaja de este método consiste en que un gran número de muestras solo puede investigarse con un solo reactivo de ensayo.

Sin embargo, tal como se mencionó al inicio, existe una gran necesidad de efectuar un gran número de ensayos en muestras de un mismo tejido por paciente, aunque con reactivos muy diferentes, es decir con anticuerpos o sondas para genes específicos que deben investigarse según el tipo de cáncer, por ejemplo.

De la US 4647543 se conoce un método para exámenes serológicos de anticuerpos en sangre de un paciente, el cual se usa principalmente para diagnosticar enfermedades autoinmunes en las personas objeto de investigación. En este método los anticuerpos presentes en la sangre se hacen reaccionar con tejido indicador preparado mediante tinturado del tejido especialmente para obtener una indicación de la presencia de anticuerpos de un tipo específico en la sangre. En tal caso no se realiza una investigación estructural del tejido ni es posible, con el método de tintura allí empleado, hacer reconocible una buena resolución morfológica de estructuras específicas del tejido.

La WO 2005/073693 A1 describe un dispositivo según el concepto general de la reivindicación 1.

Además, la US 2004/0026938 A1 describe un dispositivo para troquelar microchips (ICs) de una oblea en el campo de la tecnología de semiconductores. El accionamiento del dispositivo de oblea-troquel se realiza, sin embargo, mediante una mecánica costosa.

La tarea fundamental de la invención consiste en proporcionar un dispositivo y un método para preparar tejidos a examinar que permiten preparar de manera industrialmente sencilla varias muestras de un tejido único de manera conjunta y sincronizada. Principalmente, esta preparación debe hacer posible que puedan aplicarse diferentes métodos de preparación de manera simultánea. El dispositivo debe diseñarse en este caso de una manera simple y robusta y para garantizar una operación continua.

Este objetivo se logra mediante los atributos característicos de la reivindicación 1 concerniente al dispositivo y mediante los atributos características de la reivindicación 15 concerniente del método. Los diseños ventajosos del dispositivo y del método resultan de las reivindicaciones dependientes.

El dispositivo de la invención tiene al menos un equipo para el posicionamiento correcto de las muestras sobre un portaobjetos así como un equipo para transportar el portaobjetos equipado hacia las estaciones individuales de procesamiento, en cuyo caso el equipo de transporte está montado de manera ventajosa en la parte central del dispositivo y unas estaciones están dispuestas distribuidas en su periferia para un procesamiento más.

En tal caso el equipo de transporte puede estar formada por una mesa redonda montada de modo que pueda girar, la cual se mueve cíclicamente a intervalos de tiempo iguales, cuando varios portaobjetos, por ejemplo, se transportan simultáneamente por el equipo de transporte o el cual se mueve continuamente de manera controlada por un programa si el equipo de transporte introduce sucesivamente solo un portaobjetos a las estaciones de procesamiento individuales. Mientras que varios portaobjetos son procesados al mismo tiempo en diferentes estaciones de trabajo, el avance en el sentido de las manecillas del reloj debe ajustarse por el tiempo de permanencia más largo en una estación de trabajo, los ciclos de trabajo en las estaciones de trabajo individuales pueden variar cuando se hace pasar solo un portaobjetos.

Según otro atributo ventajoso de la invención, el equipo de transporte se monta en una carcasa de tipo plinto en la cual se aloja el mecanismo de tracción y/o de control para el equipo de transporte. También pueden conectarse aquí las líneas de presión neumáticas e hidráulicas a través de las cuales se suministran los medios de presión a las piezas funcionales de las estaciones de trabajo.

De manera ventajosa, las estaciones de procesamiento modulares están dispuestas distribuidas en una trama de ángulos constantes entre sí por toda la periferia de tal modo que pueden introducirse a ella cíclicamente los portaobjetos por medio del equipo de transporte. En otra modalidad ventajosa del objeto de la invención, el equipo de transporte tiene en su periferia equipos de alojamiento en los que los portaobjetos pueden insertarse durante el transporte para asegurar su posición. Aquí pueden hallar aplicación equipos de trama conocidos per se, los cuales hacen posible una fijación transitoria y un desprendimiento de los portaobjetos.

Las estaciones de procesamiento están dispuestas en el lado superior de la carcasa de tipo plinto, en cuyo caso los portaobjetos del dispositivo se introducen por una estación de entrada. A esta estación de entrada está asignado ventajosamente un cargador de portaobjetos de la cual pueden... [Seguir leyendo]

1. Dispositivo (1) para la preparación automática reproducible de muestras de células y de tejidos a investigarse, principalmente de un material de paciente, que están dispuestas sobre portaobjetos sobre portaobjetos (15) , en cuyo caso el dispositivo comprende una pluralidad de estaciones modulares que realizan respectivamente un paso del trabajo en una secuencia de pasos de trabajo, en cuyo caso el dispositivo (1) comprende al menos un equipo para posicionar correctamente las muestras (22, 611, 612, 615) sobre un portaobjetos (15) y un equipo para suministrar una película de muestra, provista con cortes de células o de tejido (22, 611, 612, 615) , la cual está hecha de un primer sustrato transparente (61) , a un portaobjetos (15) y un equipo para segmentar las muestras (613) , y un dispositivo de separación (21) para separar las muestras, y que el dispositivo (1) tiene al menos un equipo (8) para transportar el portaobjetos (15) equipado a las estaciones individuales (13, 17, 19) para seguir procesándose, caracterizado porque el equipo para segmentar las muestras (613) comprende un punzón un punzón (20) , y porque el dispositivo para separar (21) comprende una leva de disco (30) , en cuyo caso, como resultado del movimiento de pivote de la leva de disco (30) , un gran número de dispositivos de sujeción (26) son movibles sobre trayectos de leva

(29) desde una posición esencialmente central en una posición definida distanciados entre sí.

2. Dispositivo (1) según la reivindicación 1, caracterizado porque el dispositivo (1) tiene un equipo de transporte (8) el cual está montado centralmente en el dispositivo y las estaciones modulares (13, 17, 19) están dispuestas distribuidas en su periferia.

3. Dispositivo (1) según la reivindicación 2, caracterizado porque el equipo de transporte (8) está formado por una mesa redonda montada de manera que pueda girar.

4. Dispositivo (1) según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el equipo de transporte (8) está montado sobre una carcasa de tipo plinto (2) en la cual se aloja (n) el accionamiento y/o el control para el equipo de transporte (8) .

5. Dispositivo (1) según una de las reivindicaciones precedentes 1 a 4, caracterizado porque el dispositivo tiene una estación de estación de entrada (13) a través de la cual puede introducirse un portaobjetos (15) al Equipo de transporte (8) .

6. Dispositivo (1) según la reivindicación 5, caracterizado porque a la estación de entrada (13) se encuentra asociado un cargador de portaobjetos (24) del cual pueden introducirse sucesivamente portaobjetos (15) de una manera controlado por un programa.

7. Dispositivo (1) según una de las reivindicaciones precedentes 1 a 4, caracterizado porque el dispositivo tiene una estación para fijar (17) las muestras (22, 611, 612, 615) en un portaobjetos (15) .

8. Dispositivo (1) según la reivindicación 7, caracterizado porque la estación para fijar (17) las muestras (22, 611, 612, 615) tiene un dispensador (18) de un adhesivo para aplicar cantidades separadas, posicionadas de adhesivo de un tamaño definido sobre un portaobjetos (15) .

9. Dispositivo (1) según la reivindicación 1, caracterizado porque los dispositivos de sujeción están formados por cilindros (25) con ventosas (26) accionadas neumáticamente.

10. Dispositivo (1) según la reivindicación 1, caracterizado porque el equipo separador (21) está montado de modo movible entre el punzón (20) y el portaobjetos (15) .

11. Dispositivo (1) según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el dispositivo tiene una estación para el curado (23) del adhesivo.

12. Dispositivo (1) según una de las reivindicaciones precedentes 1 a 4, caracterizado porque el dispositivo tiene una estación de rotulados y/o etiquetado en la cual el portaobjetos se rotula o etiqueta principalmente con un código de barras.

13. Dispositivo (1) según una de las reivindicaciones precedentes 1 a 4, caracterizado porque el dispositivo tiene una estación de cámara para el reconocimiento visual de las muestras individuales y la selección de muestras adecuadas así como la separación de material de muestras inadecuado.

14. Dispositivo (1) según una de las reivindicaciones precedentes 1 a 4, caracterizado porque el dispositivo tiene una estación de entrega en la cual se descargan los portaobjetos terminados (15) para seguir procesándose en un siguiente dispositivo.

15. Método para la preparación automática reproducible de muestras de células o tejidos a investigarse, principalmente de un material de paciente, dispuestas sobre portaobjetos, usando un dispositivo (1) según una de las reivindicaciones 1 a 14 y un portaobjetos (15) , en cuyo caso el portaobjetos (15) tiene varias zonas de reacción (84, 85) a una primera distancia uniforme, en cuyo caso las unidades de sustrato de tejido (22, 611, 612, 615) se 5 encuentran dispuestas en las zonas de reacción (84, 85) , en cuyo caso el sustrato (61) tiene una consistencia flexible y transparente y tiene conjuntamente con las muestras de células o de tejidos un primer espesor (d1) y en cuyo caso el portaobjetos (15) tiene rebordes hidrófugos (75) de las zonas de reacción (84, 85) con una primera altura (d2) , en cuyo caso el dispositivo comprende una pluralidad de estaciones modulares, las cuales desempeñan respectivamente un paso de trabajo en una secuencia de pasos de trabajo, caracterizado porque se introducen 10 portaobjetos individuales (15) de manera continua por una estación de entrada (13) a un equipo de transporte (8) y se fijan a éste, porque el equipo de transporte introduce cada portaobjetos (15) sucesivamente a una estación de fijación (17) para la aplicación de un agente de fijación, a una estación de carga (19) para la carga automática, posicionalmente correcta, del portaobjetos (15) con muestras segmentadas, a una estación de curado (23) para el medio de fijación, a una estación de rotulado, a una estación de escáner y de lectura, y a una estación de cámara y

una estación de entrega, en la cual se descargan hacia un dispositivo siguiente para seguir procesándose.

16. Método según la reivindicación 15, caracterizado porque las muestras se introducen a la estación de carga en forma de cortes de células o tejidos estiradas sobre una película soporte (75) , principalmente con un grosor de 1, 5 !m, se troquelan a partir de la película y se separan y se depositan en un modelo predeterminado sobre un portaobjetos (15) provisto con un agente de fijación.

17. Método según la reivindicación 16, caracterizado porque el agente de fijación en una estación de tratamiento subsiguiente es curado por tratamiento térmico, principalmente mediante tratamiento con radiación UV.

18. Método según una de las reivindicaciones precedentes 15 a 17, caracterizado porque el portaobjetos (15) emitido se somete a un tratamiento subsiguiente de calor y tinturado.