USO DE UN INHIBIDOR C1 PARA LA PREVENCIÓN DE LESIONES POR ISQUEMIA-REPERFUSIÓN.

Uso de un inhibidor C1 para la prevención de lesiones por isquemia-reperfusión Campo de la invención [0001] La presente invención se refiere al uso profiláctico y terapéutico del inhibidor C1 para prevenir, reducir y tratar una lesión por isquemia-reperfusión, en particular una lesión de isquemia-reperfusión cerebral que puede suceder como resultado de un accidente cerebrovascular. Antecedentes de la invención [0002] La lesión por isquemia-reperfusión es una condición patológica bien conocida. Puede representar una condición patológica prevista o una condición patológica imprevista. El accidente cerebrovascular es uno de los tipos más comunes de lesión por isquemia-reperfusión imprevista. El accidente cerebrovascular es la tercera causa de muerte y la causa principal de incapacidad a largo plazo en países industrializados. El accidente cerebrovascular es un tipo de enfermedad cardiovascular que afecta a las arterias que se dirigen al cerebro y a las del mismo. Un accidente cerebrovascular ocurre cuando tales arterias se bloquean por un coágulo o se rompen y dan como resultado una isquemia de los tejidos cerebrales que son atendidos por la arteria bloqueada. Se causa un daño directo al cerebro por la interrupción del flujo sanguíneo, principalmente debido a la pérdida de oxigenación al tejido viable, en última instancia conduciendo al infarto si no se invierte. No obstante si se invierte la lesión (bien fisiológicamente o terapéuticamente), entonces la reperfusión del tejido isquémico puede paradójicamente causar más daños indirectos. Cuando la isquemia es de larga duración, el daño "directo" que resulta de la hipoxia sola es el mecanismo predominante. Para isquemias de menor duración, el daño indirecto o mediado por reperfusión se vuelve cada vez más importante para el resultado final. [0003] El inhibidor C1 (INH C1), el inhibidor de complemento C1, ha mostrado acción neuroprotectora al reducir la lesión por isquemia-reperfusión en modelos de roedor con isquemia-reperfusión cerebral (De Simoni et al., 2003, J Cereb Blood Flow Metab. 23: 232-9; Akita et al., 2003, Neurosurgery 52: 395-400). La acción neuroprotectora del INH C1 en lesión por isquemia-reperfusión cerebral no requiere C1q (De Simoni et al., 2004, ser J Pathol. 164: 1857- 63). Más recientemente Storini et al. (2005, Neurobiol Dis. 19: 10-7) divulgó que el INH C1 ejercita una acción antiapoptótica y antiinflamatoria en lesión por isquemia-reperfusión a través de la inhibición de la inflamación y el reclutamiento de célula de la vasculatura al sitio isquémico. No obstante, el espacio de tiempo en un accidente cerebrovascular en el que la la administración de INH C1 es terapéuticamente eficaz es más bien limitado. Por lo tanto, es un objetivo de la presente invención proporcionar al INH C1 una ventana de tiempo mayor en cuanto al tiempo de administración. Descripción de la invención [0004] La presente invención se basa en el hallazgo sorprendente de que cuando el inhibidor C1(INH C1) derivado de plasma de origen natural, ha perdido la mayor parte de su capacidad para reducir una lesión por isquemiareperfusión en un modelo de ratón con isquemia cerebral focal transitoria cuando se administra después de la isquemia, una preparación recombinante de INH C1 sigue siendo capaz de ejercer sus efectos neuroprotectores también cuando se inyecta al menos 1 hora después de la isquemia y/o reperfusión. Sorprendentemente, un efecto neuroprotector se puede todavía conseguir cuando el INH C1 se inyecta 18 horas después de la isquemia y/o reperfusión. La diferencia entre el INH C1 derivado de plasma de origen natural y la preparación recombinante de INH C1 es que el primero tiene una vida media de plasma de al menos 24 horas y es completamente glicoproteína sialilada, y el último tiene una vida media de plasma reducida y tiene una glicosilación diferente en comparación con el producto derivado de plasma. [0005] Una diferencia conocida entre el INH C1 derivado de plasma de origen natural y la preparación recombinante de INH C1 es la extensión y tipo de glicosilación. La glicoproteína recombinante contiene un amplio conjunto de diferentes N-glicanos, comprendiendo estructuras oligomanosas, híbridas y de tipo complejo, mientras que los N- glicanos de INH C1 derivado de plasma están principalmente compuestos por estructuras de tipo complejo completamente sialiladas. Como resultado de las diferencias en la glicosilación, la glicoproteína derivada de plasma tiene una vida media de plasma de al menos 24 horas y el INH C1 recombinante tiene una vida media de plasma reducida. [0006] Por lo tanto, en un aspecto la presente invención se refiere a un método para la prevención, reducción o tratamiento de al menos una lesión por isquemia-reperfusión, donde el inhibidor C1 se administra al menos después del periodo de isquemia y/o el inicio de reperfusión y donde el inhibidor C1 tiene un nivel reducido de residuos de ácidos siálicos terminales en comparación con el inhibidor C1 humano derivado de plasma. El método comprende preferiblemente el paso de administrar una cantidad eficaz de un INH C1 con una vida media de plasma menor que la vida media de plasma de un INH C1 derivado de plasma. Alternativamente, el método comprende preferiblemente el paso de administrar una cantidad eficaz de un INH C1 que tenga una glicosilación diferente en comparación con el INH C1 derivado de plasma. Este método se refiere a un uso profiláctico y/o terapéutico de un inhibidor C1 para la prevención, reducción y/o tratamiento de cualquier tipo de lesión por isquemia-reperfusión. [0007] Un inhibidor C1, también referido como inhibidor de C1 esterasa se define aquí, como un inhibidor de complemento C1. El INH C1 pertenece a la superfamilia de inhibidores de proteinasa de serina y es el único 2   inhibidor de C1r y C1s del sistema de complemento y es el inhibidor mayor de factor XIIa y kalikreína del sistema de contacto. Además el INH C1 también inhibe otras serín proteasas de la coagulación y sistemas fibrinolíticos como el factor XI, activador de plasminógeno de tipo tejido y plasmina (Schapira et al. 1985, Complement 2: 111; Davis, 1988, Ana. Rev. Immunol. 6: 595). El INH C1 humano es una proteína de 500 aminoácidos, incluyendo una secuencia señal de 22 aminoácidos (Carter et al. 1988, Euro. J. Biochem. 173, 163). El INH C1 de plasma es una glicoproteína de aproximadamente 76 kDa y está fuertemente glicosilada, hasta el 26% de su masa molecular es carbohidrato (Perkins et al., 1990, J. Mol. Biol. 214, 751). Un INH C1 para su uso en los métodos de la presente invención es preferiblemente una proteína con una secuencia de aminoácidos que tenga al menos un 65, 67, 68, 69, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98 o 99% de identidad con la secuencia de aminoácidos del INH C1 humano maduro como se representa en la SEC ID NO:1. [0008] Con motivo de la presente invención, el grado de identidad entre dos secuencias de aminoácidos se refiere al porcentaje de aminoácidos que son idénticos en las dos secuencias. Primero, las secuencias polipéptidas homólogas se buscan usando el algoritmo de BLAST (Basic Local Alignment Search Tool), que se describe en Altschul, et al., J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990). El software para realizar los análisis BLAST está públicamente disponible a través del National Center for Biotechnology Information (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). Los parámetros W, B y E del algoritmo de BLAST determinan la sensibilidad y velocidad de la alineación. El programa BLAST usa como valores predeterminados una longitud de palabra (W) de 3, el matriz de puntuación BLOSUM62 (ver Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. EEUU 89: 10915 (1989)) alineamientos (B) de 50, esperanza (E) de 10, M=5; N=-4. Después, el grado de identidad (como se ha definido anteriormente) de secuencias homólogas se determina usando el algoritmo de alineación CLUSTALW (Higgins D. Et al (1994). Nucleic Acids Res. 22:4673-4680) usando los siguientes parámetros; Gap size: 5, Gap open: 11, Gap extension: 1, Mismatch: -15, Word size: 3. [0009] El INH C1 preferiblemente tiene actividad de INH C1 como se puede, por ej., evaluar tal como es descrito por Drouet et al. (1988, Clin Chim Acta. 174:121-30). Más preferiblemente, el INH C1 es un INH C1 humano (INH C1h) el cual se entiende que significa que un INH C1 tiene una secuencia de aminoácidos que ocurre naturalmente en el hombre (como p. ej. SEC ID NO:1 o CAA30314), pero no significa que el INH C1 se produzca y obtenga de, por ej., plasma humano. [0010] Según un aspecto de la invención, el INH C1 para su uso en los métodos de la invención tiene preferiblemente una vida media de plasma reducida en comparación con la vida media de plasma de INHC1 derivado, más preferiblemente la vida media de plasma de INH C1 de la invención es inferior a la vida media de... [Seguir leyendo]

1. Uso de un inhibidor C1 que tiene un nivel reducido de residuos de ácidos siálicos terminales en comparación con el inhibidor C1 humano derivado de plasma, donde el nivel reducido de residuos de ácidos siálicos terminales da como resultado una vida media de plasma inferior a 6 horas, en la preparación de una composición farmacéutica para la prevención, reducción o tratamiento de al menos una lesión de isquemia y reperfusión, donde el inhibidor C1 se administra al menos 10 minutos después del periodo de isquemia y/o el inicio de la reperfusión. 2. Uso según la reivindicación 1, donde el inhibidor C1 es administrado entre al menos 10 minutos y 24 horas después del periodo de isquemia y/o el inicio de reperfusión. 3. Uso según la reivindicación 1 o 2, donde el inhibidor C1 comprende un glicano que tiene un residuo terminal seleccionado de galactosa, N-acetilgalactosamina, N-acetilglucosamina, manosa y fucosa. 4. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, donde el inhibidor C1 tiene una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 65% de identidad con la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO:1. 5. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde el inhibidor C1 se obtiene de una célula u organismo genéticamente modificado. 6. Uso según la reivindicación 5, donde dicho organismo es un animal transgénico no humano. 7. Uso según la reivindicación 6, donde el inhibidor C1 se obtiene de la leche de dicho animal transgénico no humano. 8. Uso según la reivindicación 6 o 7, donde el animal transgénico no humano es un bovino o un animal del orden Lagomorpha. 9. Uso según la reivindicación 8, donde el animal transgénico no humano es un conejo. 10. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-9, donde el inhibidor C1 se usa en una cantidad en el intervalo de 50-2000 unidades por kg de peso corporal. 11. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-10, donde la composición farmacéutica también contiene un agente trombolítico, o es para su uso en combinación con un agente trombolítico o es para su uso uso después del tratamiento con tal agente. 12. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-11, donde la composición farmacéutica es para la prevención, reducción o tratamiento de una aparición imprevista o aguda de lesión por isquemia y reperfusión. 13. Uso según la reivindicación 12, donde la aparición imprevista o aguda de lesión por isquemia y reperfusión ocurre después de un accidente cerebrovascular o accidente cerebrovascular perinatal. 14. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-11, donde la composición farmacéutica es para la prevención, reducción o tratamiento de una aparición prevista de lesión por isquemia y reperfusión. 15. Uso según la reivindicación 14, donde la aparición prevista de lesión por isquemia y reperfusión ocurre después de un transplante de órgano.   21   22   23   24     26   27   28   29