El uso de un anticuerpo policlonal de cabra anti-AHL de clase II en la preparación de un medicamento para su uso en el tratamiento de una enfermedad en un ser humano que implica una respuesta inmune proliferativa,

en la que la enfermedad es una enfermedad inflamatoria, una enfermedad autoinmune, una lesión axonal o nerviosa, y en el que el anticuerpo policlonal de cabra anti-AHL de clase II se induce después de la exposición al VIH

La presente invención se refiere, en particular pero no exclusivamente, a un agente terapéutico para el tratamiento de enfermedades que implican una respuesta inmune proliferativa.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El documento WO 97/02839 se refiere a Supresión Viral, Tratamiento y Prevención de Infecciones Virales. Este, proporciona un procedimiento para producir anticuerpos neutralizantes para el tratamiento de una infección viral en un paciente, que comprende las etapas de:

a. exponer a un mamífero a un virus, de tal manera, que dicho mamífero produzca anticuerpos neutralizantes contra dicho virus y

b. recoger los anticuerpos neutralizantes de dicho mamífero. En los ejemplos, se obtiene una vacuna contra el VIH, denominada AAV2, mezclando virus VIH con anticuerpos neutralizantes del VIH obtenidos de una cabra.

El documento WO 01/60156 se refiere a Anticuerpos Neutralizantes y a Composiciones de Potenciación Inmunomoduladora. Este, proporciona una composición inmunomoduladora que comprende:

anticuerpos heterólogos específicos para un antígeno; y

un antígeno, en el que los anticuerpos heterólogos forman un complejo con el antígeno por

combinación con un vehículo farmacéutico.

Los ejemplos son similares a los del documento WO 97/02839, y de nuevo, se obtiene una vacuna contra el VIH, denominada AAV2, mezclando virus VIH con anticuerpos neutralizantes del VIH obtenidos de una cabra.

El documento WO 96/20215 describe el uso de anticuerpos anti-CMH de clase II, que interfieren en la interacción entre lipopolisacáridos (LPS) y su molécula transductora. Se dice que esto es beneficioso en el tratamiento de diversas enfermedades y trastornos inflamatorios. La publicación describe resultados experimentales obtenidos de sistemas in vitro y de tratamiento in vivo de ratones a los que se inyectó LPS y previamente tratados con anticuerpos de ratón anti-ALH de clase II.

El documento WO 98/13066 describe el uso de anticuerpos anti-CMH de clase II para inhibir la función de células B independientes de linfocitos T para prevenir o reducir el rechazo de xenoinjerto.

El documento WO 02/07760 está relacionado con un agente terapéutico. Este, proporciona un procedimiento de prevención de infección por VIH o un tratamiento de un individuo infectado por el VIH, que comprende las etapas de

(1) exposición del sistema inmune de cabra al VIH;

(2) purificación del anticuerpo de la cabra después de la exposición al VIH; y

(3) tratamiento de un individuo con el anticuerpo obtenido en la etapa 2 anterior.

En ensayos clínicos preliminares, basados en el producto del anticuerpo del documento WO 02/07760, se han tratado con éxito pacientes con VIH usando suero de una cabra después de la exposición al VIH.

Preferentemente, el tratamiento emplea una composición sérica que puede obtenerse mediante un procedimiento que implica inducir anticuerpos eficaces en una cabra, extraer sangre de la cabra, demostrar la capacidad neutralizante del VIH en la sangre extraída, retirar sólidos de la sangre, precipitar los sólidos usando sulfato de amonio u otro agente de precipitación adecuado supersaturado, separar el precipitado, disolver el precipitado en un medio acuoso adecuado y dializar la solución con un límite de 5 a 50.000 Daltons, preferentemente de 7 a 30.000 Daltons, más preferentemente de 8500 a 15.000 Daltons, en especial, aproximadamente 10.000 Daltons. El procedimiento de inmunización de la cabra puede ser por administración intramuscular pero también pueden usarse otras técnicas convencionales tales como la administración subcutánea o intradérmica. El procedimiento de purificación también puede completarse mediante otros procedimientos de acción de fraccionamiento comúnmente usados (ácido caprílico por ejemplo) siempre que se use el residuo total.

Más particularmente, el tratamiento emplea típicamente un suero de cabra obtenido de la siguiente manera. Ejemplo de Producción de Suero de Cabra

Por inyección intramuscular, se inoculó en una cabra virus VIH-3b lisados, suspendidos en un sobrenadante comercial normal, usando una inyección intramuscular de VIH-3b a una concentración de 109 partículas virales por ml. Previamente, el virus se destruyó por calor a 60ºC durante 30 minutos. Después de un intervalo apropiado, tal como dos semanas, se extrajeron muestras de sangre para una valoración inicial. En el procedimiento optimizado, la cabra recibió una inyección semanal durante cuatro semanas, seis semanas después se extrajo sangre del animal para obtener el reactivo.

Se extrajeron aproximadamente 400 cc de sangre de la cabra mediante técnicas estériles. El área de extracción con aguja se rasuró y se preparó con betadina. Se usó una aguja del calibre 18 para extraer aproximadamente 400 cc de sangre del animal. Cabe destacar, que el animal puede tolerar una extracción de sangre de aproximadamente 400 cc sin que el animal sufra ningún efecto adverso. El animal no tiene que sacrificarse. Después, puede extraerse sangre del animal en aproximadamente 10 a 14 días, después de que éste

recupere su volumen de sangre.

Se confirmó la presencia de anticuerpos posiblemente útiles. Después, una vez confirmada la presencia de dichos reactivos, a las 4-6 semanas se extrajo sangre de la cabra y se centrifugó para separar el suero. Después, para retirar coágulos grandes y materia particulada, se filtraron 300 ml de suero. Después, el suero se trató con sulfato de amonio supersaturado (solución al 45% a temperatura ambiente) para la precipitación de anticuerpos y otros materiales. La solución resultante se centrifugó a 5000 rpm durante cinco minutos, después de los cuales, se retiró el líquido sobrenadante. La inmunoglobulina precipitada se resuspendió en solución salina tamponada con fosfato (‘tampón PBS', véase Sambrook y col. ‘Molecular cloning, A Laboratory Manual', 1989) lo suficiente para redisolver el precipitado.

Después la solución se dializó a través de una membrana con un límite de peso molecular de 10.000 Daltons. La diálisis se realizó en tampón PBS, cambiado cada cuatro horas durante un período de 24 horas. La diálisis se realizó a 4ºC.

Después de 24 horas de diálisis, los contenidos de la bolsa de diálisis se vaciaron en un vaso de precipitado estéril. La solución se ajustó de manera que la masa por unidad de volumen = 10 mg por ml. La dilución se realizó usando PBS. Después, la solución resultante se filtró a través de un filtro de 0,2 micrómetros en un recipiente estéril. Después de la filtración, la solución se dividió en alícuotas, en dosis individuales de 1 ml y se conservaron a -22ºC antes de su uso.

El reactivo está, por tanto, preparado para su uso.

En este procedimiento pueden realizarse cambios, tales como, por ejemplo, variando la concentración del sulfato de amonio o cambiándolo por otros reactivos. De manera similar, no es necesario que el peso molecular límite de la diálisis sea de 10.000 Daltons. LA INVENCIÓN

Como parte de los tratamientos que usan el suero de cabra, se observó que había otros resultados beneficiosos.

Los hallazgos de una mejora clínica significativa, en pacientes infectados por VIH, así como en los pacientes con diversas afecciones, tales como esclerosis múltiple y algunos cánceres tienen la posible interconexión de que todas estas enfermedades están en estados inflamatorios crónicos.

De acuerdo con la presente invención, se proporciona el uso de un anticuerpo policlonal de cabra anti-ALH de clase II, como se describe en la reivindicación 1.

Para sorpresa de los inventores, éstos pudieron demostrar fácilmente que las cabras inmunizadas con VIH producen suero que puede desactivar el ensayo de respuesta de linfocitos mixtos, que es uno de los ensayos de activación clásicos usados in vitro. Pensando que esto podría ser alguna propiedad inherente del suero de cabra, los inventores quedaron impresionados cuando los sueros de cabras, que no habían recibido inyección, no tuvieron ninguna actividad en estos ensayos.

Los inventores también demostraron que esta actividad está estrechamente asociada con la actividad contra anticuerpos de ALH de clase II. Los inventores desconocen si esto representa una respuesta de mimetismo molecular o si la cabra detecta el ALH de clase II que lleva el virus cuando aparece y se desprende de las células infectadas,...

1. El uso de un anticuerpo policlonal de cabra anti-AHL de clase II en la preparación de un medicamento para su uso en el tratamiento de una enfermedad en un ser humano que implica una respuesta inmune proliferativa, en la que la enfermedad es una enfermedad inflamatoria, una enfermedad autoinmune, una lesión axonal o nerviosa, y en el que el anticuerpo policlonal de cabra anti-AHL de clase II se induce después de la exposición al VIH.

10 2. El uso de la reivindicación 1, en el que el anticuerpo tiene actividad anti-ALH de clase II y anti-VIH.

3. El uso de la reivindicación 1, en el que la enfermedad es esclerosis múltiple.

15 4. El uso de la reivindicación 1, en el que la enfermedad es artritis reumatoide.

5. El uso de la reivindicación 1, en el que la enfermedad es neuritis.