Uso de una composición de suero obtenida a partir de una cabra después de la exposición a VIH en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un ser humano para enfermedad de las neuronas motoras,

en el que la composición se administra por inyección subcutánea

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El documento WO 97/02839 se refiere a supresión viral, tratamiento y prevención de infecciones víricas. Proporciona un procedimiento para producir anticuerpos neutralizantes para el tratamiento de una infección viral en un paciente que comprende las etapas de:

a. exponer un mamífero a un virus de forma que dicho mamífero produzca anticuerpos neutralizantes contra dicho virus y

b. recoger dichos anticuerpos neutralizantes de dicho mamífero. En los ejemplos, una vacuna contra el VIH designada como AAV2 se obtiene mezclando el virus VIH con anticuerpos neutralizantes contra VIH obtenidos de una cabra.

El documento WO 01/60156 se refiere a un anticuerpo neutralizante y composiciones potenciadoras inmunomoduladoras. Proporciona una composición inmunomoduladora que comprende:

anticuerpos heterólogos específicos para un antígeno; y

un antígeno en el que los anticuerpos heterólogos forman un complejo con el antígeno

para la combinación con un vehículo farmacéutico.

Los ejemplos son similares a los del documento WO 97/02839, y de nuevo se obtiene una vacuna contra el VIH designada como AAV2 mezclando el virus VIH con anticuerpos neutralizantes contra VIH obtenidos de una cabra.

El documento WO 02/07760 se refiere a un agente terapéutico. Proporciona un procedimiento para prevenir la infección por VIH o tratar un individuo infectado por VIH que comprende las etapas de

(1) exposición del sistema inmunitario de la cabra a VIH;

(2) purificación del anticuerpo de la cabra después de la exposición a VIH; y

(3) tratamiento de un individuo con el anticuerpo obtenido en la etapa 2 anterior.

El documento WO 03/004049 se refiere a un agente terapéutico e informa del descubrimiento de inmunoglobulinas dirigidas contra HLA y otra actividad de anticuerpo en una composición preparada a partir de suero de cabra tras la exposición a VIH.

En ensayos preliminares basados en el producto del documento WO03/004049, los pacientes con VIH fueron tratados satisfactoriamente usando suero de una cabra después de la exposición a VIH.

Preferentemente, el tratamiento usa una composición de suero que puede obtenerse mediante un procedimiento que implica producir anticuerpos eficaces en una cabra, extraer sangre de la cabra, demostrar la capacidad neutralizante de VIH en la sangre extraída, retirar los sólidos de la sangre, precipitar usando sulfato de amonio supersaturado u otro agente de precipitación adecuado, separar el precipitado, disolver el precipitado en un medio acuoso adecuado y dializar la solución con un corte de 5.000 a 50.000 Dalton, preferentemente de 7.000 a 30.000 Dalton, más preferentemente de 8.500 a 15.000 Dalton, especialmente aproximadamente de 10.000 Dalton. El procedimiento de inmunización en cabra puede ser intramuscular, pero también pueden usarse otras técnicas habituales tales como administración subcutánea o intradérmica. El procedimiento de purificación también puede completarse mediante otros procedimientos de acción de fraccionamiento comúnmente usados (por ejemplo, ácido caprílico), siempre que se use el residuo total.

Más particularmente, el tratamiento usa normalmente un suero de cabra obtenido del siguiente modo. Ejemplo de producción de suero de cabra

Se inoculó una cabra mediante inyección intramuscular con el virus VIH-3b lisado suspendido en un sobrenadante comercial normal usando una inyección intramuscular de VIH-3b a una concentración de 109 partículas víricas por ml. El virus se mató previamente por calor a 60 ºC durante 30 minutos. Las muestras de sangre se extrajeron después de un intervalo apropiado tal como dos semanas para la evaluación inicial. En el procedimiento optimizado, la cabra se inyecta cada semana durante cuatro semanas y posteriormente, a las seis semanas se extrae sangre del animal para obtener el reactivo.

Se extraen aproximadamente 400 cc de sangre de la cabra mediante técnicas estériles. El área para la extracción por aguja se afeita y se prepara con betadine. Se usa una aguja de calibre 18 para extraer aproximadamente 400 cc de sangre del animal. Es de importancia que el animal pueda tolerar una extracción de aproximadamente 400 cc de sangre sin que sufra ningún efecto adverso. El animal no tiene que ser sacrificado. Puede extraerse sangre de nuevo del animal en aproximadamente 10 a 14 días después de reponerse su volumen de sangre.

Se confirmó la presencia de anticuerpos posiblemente útiles. Una vez se confirmó la presencia de tales reactivos, se sacó sangre de la cabra entre 4-6 semanas después y se centrifugó para separar el suero. A continuación se filtraron 300 ml de suero para eliminar coágulos grandes y materia particulada. A continuación, el suero se trató con sulfato de amonio supersaturado (disolución al 45 % a temperatura ambiente) para precipitar anticuerpos y otro material. La solución resultante se centrifugó a 5000 rpm durante cinco minutos, tras lo cual se eliminó el fluido de sobrenadante. La inmunoglobulina precipitada se volvió a suspender en solución salina tamponada con fosfato ('tampón PBS', véase Sambrook y col. 'Molecular cloning, A Laboratory Manual', 1989) suficiente para redisolver el precipitado.

A continuación, la solución se dializó a través de una membrana con un corte de peso

molecular de 10.000 Dalton. La diálisis se llevó a cabo en tampón PBS, se cambió cada cuatro horas durante un periodo de 24 horas. La diálisis se llevó a cabo a 4 ºC.

Después de 24 horas de diálisis, el contenido de la bolsa de diálisis se vació en un vaso de precipitados estéril. La solución se ajustó de forma que la masa por unidad de volumen = 10 mg por ml. La dilución se llevó a cabo usando PBS. A continuación, la solución resultante se filtró a través de un filtro de 0,2 micrómetros en un recipiente estéril. Después de la filtración, la solución se dividió en alícuotas para dar dosis únicas de 1 ml y se guardó a -22 ºC antes de uso.

A continuación, el reactivo está listo para uso.

Pueden hacerse cambios en este procedimiento tales como, por ejemplo, variando la concentración del sulfato de amonio o cambiando a otros reactivos. Similarmente, el corte de diálisis no necesita ser a 10.000 Dalton. LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona el uso de una composición de suero obtenida a partir de una cabra después de la exposición a VIH, según la reivindicación 1 o la reivindicación 2.

En general, la administración de la composición a un ser humano puede producir una mejora significativa en una o más de estas afecciones. Puede administrarse una o más dosis, y normalmente los beneficios se observan después de una serie de al menos tres, cinco o más administraciones.

Normalmente, la invención usa una composición que incluye el componente activo que puede derivarse de la sangre de una cabra adecuadamente expuesta mediante una técnica de extracción de suero que no está diseñada para aislar anticuerpos específicos individuales. En particular, la invención prevé el aislamiento del componente activo, que los inventores creen actualmente que incluye el anticuerpo anti-HLA de suero de sangre de la cabra expuesta, sin la necesidad de purificación y extracción exhaustivas para obtener un anticuerpo individual.

Sin estar vinculado a ninguna teoría o hipótesis, parece que la sustancia de trabajo puede incluir una molécula de cabra biológicamente activa que no es un anticuerpo de cabra, sino una citocina, hormona o tipo de molécula similar que es retenida por el procedimiento de purificación bruta.

Si la sustancia activa es un anticuerpo, entonces puede reconocer uno o más ligandos o receptores que in vivo están desencadenando los efectos fisiológicos que están observando los inventores.

En general, la inyección de anticuerpos o las composiciones de suero en seres humanos derivadas de un huésped no humano está contraindicado. Normalmente se produce una fuerte respuesta inmunitaria contra los mismos anticuerpos extraños. Sin embargo, se ha descubierto sorprendentemente que el uso de extracto de suero de cabra no provoca las reacciones inmunitarias que son de esperar con otras proteínas animales extrañas. La inyección de extracto de suero de cabra es tolerada tanto por pacientes inmunodeprimidos como por individuos normales.

La presente invención...

1. Uso de una composición de suero obtenida a partir de una cabra después de la exposición a VIH en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un ser humano 5 para enfermedad de las neuronas motoras, en el que la composición se administra por inyección

subcutánea.

2. Uso de una composición de suero obtenida a partir de una cabra después de la exposición a VIH en la preparación de un medicamento para el tratamiento de un ser humano para una afección inflamatoria crónica del sistema nervioso.

10 3. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en el que la composición comprende anticuerpo anti-HLA. 4. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la composición se obtiene a partir del suero de una cabra después de la exposición a un lisado de VIH. 5. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que la composición comprende un compuesto activo derivado de la sangre de una cabra adecuadamente expuesta mediante una técnica de extracción de suero que no está destinada para aislar anticuerpos específicos individuales.

6. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la composición se administra semanalmente. 20 7. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la composición se administra mensualmente. 8. El uso de la reivindicación 2, en el que la composición se administra mediante inyección.