RECEPTOR DE PROTEÍNAS SIMILARES A TGR3.

La presente invención se refiere a novedosas proteínas que contienen un dominio que corresponde a la mitad C terminal de un dominio ZP similar al identificado en el Receptor III de TGF-beta y al uso de estas proteínas y secuencias de ácido nucleico de los genes codificantes en el diagnóstico, la prevención y el tratamiento de enfermedades. En particular, la presente invención se refiere al uso de estas proteínas para modular la actividad de las proteínas que pertenecen a la superfamilia TGF-beta. Antecedentes El proceso de descubrimiento de fármacos actualmente está experimentando una revolución fundamental a medida que la genómica funcional crece. La expresión "genómica funcional" se aplica a un abordaje que utiliza herramientas bioinformáticas para atribuir funciones a secuencias de proteínas de interés. Tales herramientas se están volviendo cada vez más necesarias a medida que la velocidad de generación de datos de secuencias supera rápidamente la capacidad de los laboratorios de investigación de asignar funciones a estas secuencias de proteínas. A medida que las herramientas bioinformáticas aumentan en potencia y precisión, estas herramientas reemplazan rápidamente las técnicas convencionales de caracterización bioquímica. En efecto, las herramientas bioinformáticas avanzadas usadas para la identificación en la presente invención son ahora capaces de proporcionar resultados en los que se puede depositar un alto grado de confianza. Varias instituciones y organizaciones comerciales están examinando los datos de las secuencias a medida que van quedando disponibles y se están haciendo descubrimientos importantes continuamente. Sin embargo, permanece una necesidad constante de identificar y caracterizar genes adicionales y los polipéptidos que éstos codifican, como objetivos para la investigación y el descubrimiento de fármacos. Introducción a proteínas secretadas La capacidad de las células de producir y secretar proteínas extracelulares es fundamental para muchos procesos biológicos. Las enzimas, factores de crecimiento, proteínas de matriz extracelular y moléculas de señalización son todas secretadas por células. Esto se produce a través de la fusión de una vesícula de secreción con la membrana plasmática. En la mayoría de los casos, pero no en todos, las proteínas se dirigen al retículo endoplasmático y a las vesículas de secreción mediante un péptido señal. Los péptidos señal son secuencias que actúan en cis que afectan el transporte de cadenas de polipéptidos desde el citoplasma a un compartimiento unido a la membrana tal como una vesícula de secreción. Los polipéptidos que están dirigidos a las vesículas de secreción se secretan dentro de la matriz extracelular o se retienen en la membrana plasmática. Los polipéptidos que se retienen en la membrana plasmática tendrán uno o más dominios transmembrana. Ejemplos de proteínas secretadas que tienen un rol central en el funcionamiento de una célula son citoquinas, hormonas, proteínas de matriz extracelular (moléculas de adhesión), proteasas y factores de crecimiento y diferenciación. Introducción a receptores de superficie celular Los receptores de superficie celular son componentes importantes de cualquier célula procariota o eucariota y se ha demostrado que tienen roles importantes en una gran cantidad de funciones fisiológicas diversas, muchas de las cuales participan en procesos de enfermedades. La alteración de su actividad es un medio para alterar el fenotipo de la enfermedad relevante y, como tal, la identificación de nuevos receptores de superficie celular es altamente relevante. Introducción a proteínas de Zona Pelúcida El dominio Zona Pelúcida, o dominio 'ZP', se caracteriza por 8 cisteínas altamente conservadas y otros residuos polares o hidrófobos distribuidos en 260 aminoácidos y se reconoció por primera vez en los receptores ZP2 y ZP3 de esperma del ratón. Sin embargo, muchas otras proteínas que no son proteínas de recubrimiento de ovocitos en mamíferos se clasifican ahora como proteínas que contienen dominios ZP, incluidas uromodulina, glicoproteína-2, tectorinas y ß, el receptor III del factor de crecimiento transformante beta (TGR3) y endoglina (Bork P and Sander C, FEBS Lett. 1992, 300: 237-40; Jovine L et al., Nat Cell Biol. 2002, 4: 457-61). Este dominio generalmente se incluye en proteínas transmembrana tipo multidominio, en donde se localiza en una sola copia en la sección C terminal de la porción extracelular y puede llevar a cabo varias funciones. Puede mediar la polimerización de polipéptidos extracelulares pero también puede participar en la unión de un ligando. De hecho, los elementos C terminales que permiten la asociación a la membrana celular (un dominio transmembrana simple o un ancla de glicosilfosfatidilinositol) pueden separarse proteolíticamente de la porción extracelular y la célula secreta una forma madura de la proteína. El dominio ZP puede distinguirse estructuralmente y funcionalmente en dos mitades, al parecer generadas mediante duplicación (Yonezawa N and Nakano M, Biochem Biophys Res Commun. 2003, 307: 877-82; Jovine L et al., Proc 2   Natl Acad Sci USA. 2004, 101: 5922-7). En particular, el Receptor III de TGF-beta contiene un sitio de unión a TGFbeta en la región C terminal del dominio ZP (WO 95/10610; Kaname S and Ruoslahti E, Biochem J. 1996, 315: 815- 20). Entre las proteínas que contienen el dominio ZP, el Receptor III de TGF-beta reviste particular importancia, ya que se une a TGF-beta, un ligando en sí mismo que pertenece a una superfamilia de proteínas que incluye no solo TGFbeta, sino otras muchas proteínas, tales como GDF (Factores de Crecimiento/Diferenciación), BMP (Proteínas Morfogenéticas Óseas), Activinas o Inhibinas, que tienen relevancia terapéutica (Tsuchida K et al., Curr Drug Targets Immune Endocr Metabol Disord. 2004, 4: 157-66; Chang H et al., Endocr Rev. 2002, 23: 787-823; de Caestecker M, Cytokine Growth Factor Rev. 2004, 15: 1-11). De hecho, se han descrito fragmentos de receptores para proteínas similares a TGF-beta en la bibliografía que tienen utilidad terapéutica (WO 95/10610; WO 97/05892; Bandyopadhyay A et al., Cancer Res. 2002, 62: 4690-5; Liu M et al., Am J Respir Crit Care Med. 2002, 165: 419-23; Vilchis-Landeros MM et al., Biochem J. 2001, 355:215-22). La variedad de proteínas conocidas por contener el dominio ZP y sus roles fisiológicos sugieren que las proteínas que contienen el dominio ZP pueden ser proteínas importantes que participan en patologías humanas tales como cánceres, retinopatías, neuropatías, trastornos reproductivos y trastornos del desarrollo. Por consiguiente, el conocimiento en aumento de las proteínas que contienen el dominio ZP, y más preferiblemente aquellos homólogos del Receptor III de TGF-beta que pueden unirse a uno o más miembros de la superfamilia TGFbeta, es de extrema importancia para aumentar la comprensión de las vías subyacentes que conducen a los estados de enfermedad mencionados anteriormente, así como también a otros estados de enfermedad, en particular aquellos relacionados con módulos y fragmentos específicos, y para desarrollar terapias más efectivas para tratar trastornos, tales como cánceres. WO058473 divulga la secuencia de nucleótidos GSN:AAC74735. WO058473 también divulga GSP:AAB40526. EM_EST:BG752983 divulga la secuencia de ARNm 602732441F1 NIH_MGC_43 Homo sapiens cDNA clon IMAGE:4875922 5'. LA INVENCIÓN La invención proporciona un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos como se describe en SEQ ID NO:8. La invención también proporciona un polipéptido que comprende SEQ ID NO:10. La invención también proporciona un polipéptido que es un fragmento o un equivalente funcional tal como se describe en cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que tiene más de 80% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos descrita en SEQ ID NO:8, preferiblemente más de 85%, 90%, 95%, 98% o 99% de identidad de secuencia, y contiene un subdominio ZP/TGR3 como se encuentra en cualquiera de las secuencias de aminoácidos codificadas por SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12 o SEQ ID NO:14. La presente invención proporciona novedosas secuencias que contienen un dominio que corresponde a la mitad C terminal de un dominio ZP similar al identificado en el Receptor III de TGF-beta (de aquí en adelante, un subdominio ZP/TGR3) que puede tener características estructurales y funcionales como se indica en la bibliografía (Yonezawa N and Nakano M, Biochem Biophys Res Commun. 2003, 307: 877-82; Jovine L et ai, Proc Natl Acad Sci USA. 2004, 101: 5922-7). Esta secuencia, sola o fusionada con otras secuencias, puede tener un efecto terapéutico en el tratamiento de enfermedades, en particular aquellas asociadas con la expresión y secreción excesiva de una proteína que pertenece a la superfamilia de... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos tal como se describe en SEQ ID NO:8. 2. Un polipéptido de acuerdo con la reivindicación 1 que consiste en la secuencia de aminoácidos tal como se describe en SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:19 o SEQ ID NO:21. 3. Un polipéptido que comprende SEQ ID NO:10. 4. Un polipéptido de acuerdo con la reivindicación 3 que consiste en la secuencia de aminoácidos tal como se describe en SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:19 o SEQ ID NO:21. 5. Un polipéptido que es un fragmento o un equivalente funcional tal como se describe en cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que tiene más de 80% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos descrita en SEQ ID NO:8, preferiblemente más de 85%, 90%, 95%, 98% o 99% de identidad de secuencia, y contiene un subdominio ZP/TGR3 como se encuentra en cualquiera de las secuencias de aminoácidos codificadas por SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12 o SEQ ID NO:14. 6. Una proteína de fusión que comprende el polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes. 7. El polipéptido de la reivindicación 6, en donde dicho polipéptido comprende una etiqueta de histidina. 8. El polipéptido de la reivindicación 7, cuya secuencia se describe en SEQ ID NO: 19 o SEQ ID NO:21. 9. El polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicho polipéptido comprende un péptido señal. 10. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 9, cuya secuencia se describe en SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:19 o SEQ ID NO:21. 11. Un vector que comprende una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o 6 a 10. 12. Un vector de acuerdo con la reivindicación 11 que comprende la secuencia de ácido nucleico tal como se describe en SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18 o SEQ ID NO:20. 13. Un vector de acuerdo con la reivindicación 12, en donde la molécula de ácido nucleico consiste en la secuencia de ácido nucleico tal como se describe en SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18 o SEQ ID NO:20. 14. Una célula huésped transformada con un vector de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13. 15. Un anticuerpo que se une específicamente al subdominio ZP/TGR3 como se encuentra en cualquiera de las secuencias de aminoácidos codificadas por SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12 o SEQ ID NO:14 del polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10. 16. Un polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, un vector de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, una célula huésped de acuerdo con la reivindicación 14, un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 15, para uso en terapia o diagnóstico de enfermedades. 17. Un polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para uso en la unión con una proteína que pertenece a la superfamilia de proteínas TGF-beta.   66   67   68   69     71