Uso de un compuesto de fórmula (I) en la que: R1, R2, R3 y R4,

cada uno independientemente, representa: hidrógeno; halógeno; hidroxi; alquilo de (C1-C6) sustituido opcionalmente con hidroxi o alcoxi de (C1-C4); haloalquilo de (C1-C6); alcoxi de (C1-C6); y haloalcoxi de (C1-C6), si es el caso, como un estereoisómero único o como cualquiera de sus mezclas, con inclusión de racematos, para preparar un medicamento para la prevención y/o el tratamiento de enfermedades que resultan de la apertura del MPTP, caracterizadas por daños tisulares degenerativos, estando seleccionadas las enfermedades entre diabetes y complicaciones diabéticas, enfermedades neurológicas y apoplejía, infarto cardiaco, distrofias heredadas y hepatitis

La presente invención se refiere al uso de compuestos que inhiben la apertura del poro de transición de la permeabilidad mitocondrial (MPTP) de células, para preparar medicamentos para la prevención y/o el tratamiento de enfermedades que resultan de la apertura del MPTP, que están caracterizadas por daños tisulares degenerativos.

FUNDAMENTO BIOLÓGICO 5

La transición de la permeabilidad mitocondrial (MPT) es un aumento súbito de la permeabilidad de la membrana interna a solutos con masa molecular inferior a 1500 Da, aproximadamente, con el consiguiente hinchamiento mitocondrial y la liberación de citocromo C. El mecanismo mitocondrial fundamental que causa MPT es la apertura del poro de transición de la permeabilidad (PTP), un canal de la membrana interior de alta capacidad de conducción cuyos componentes moleculares completos han de ser identificados totalmente todavía. (Forte, M.: 10 Bernarda, P. Disección genética del poro de transición de la permeabilidad. J. Bioenerg. Biomembr., 2005, 37, 121-8).

El estado abierto del PTP disipa el gradiente electroquímico protónico dando por resultado la liberación de Ca2+ y la hidrólisis de ATP, y es la causa potencial de hinchamiento osmótico. Esto, a su vez, puede hacer que la membrana interior quede sin plegar y la rotura de la membrana exterior, seguido de liberación de proteínas intermembranales pro-apoptóticas en el citosol. El estado abierto-cerrado del PTP está regulado por múltiples efectores que actúan en sitios 15 diversos y muchos de estos sitios resultan afectados por condiciones y mediadores implicados en una variedad de modelos de muerte celular (Bernardi, P. Transporte mitocondrial de cationes: Canales, intercambiadores y transición de la permeabilidad. Physiol. Rev., 1999, 79, 1127-1155). Por tanto, la apertura del PTP es un mecanismo mediado por mitocondrias que favorece la muerte celular.

La muerte celular programada (apoptosis) es un proceso esencial de los organismos pluricelulares y el grado 20 fisiológico de la apoptosis regula el desarrollo normal y la renovación tisular. No obstante, se encuentra un grado de apoptosis aumentado en muchas condiciones patológicas caracterizadas por una excesiva pérdida celular y una degeneración tisular excesiva. Un gran número de tensiones celulares causan cambios funcionales y estructurales a las mitocondrias que, a través de la muerte celular, afectan a la homeostasia y a la funcionalidad celulares (Green, D.R.; Kroemer, G. La patofisiología de la muerte celular mitocondrial, Science, 2004, 305, 626-629). Un grado aumentado de 25 apoptosis en los compartimentos de células pluripotenciales afecta a la renovación de los tejidos y acelera el envejecimiento, mientras que una disminución de funcionamiento de la masa celular perjudica directamente el comportamiento tisular (Pelicci, P.G. Los mecanismos supresores de tumores contribuyen al envejecimiento del organismo por inducción de la senescencia de células pluripotenciales? J. Clin. Invest., 2004, 113, 4-7).

Las mitocondrias desempeñan un papel primordial en el desencadenamiento de la apoptosis. Los 30 acontecimientos mitocondriales más críticos durante la apoptosis son la remodelación estructural y funcional de este orgánulo y la liberación subsiguiente de proteínas apoptógenas desde el espacio intermembranal mitocondrial hasta el citosol. Estas proteínas incluyen el citocromo C, Smac/DIABLO, AlF, Omi/HtrA2. Además, existe una fuerte evidencia que sugiere que la apertura del PTP puede ser un acontecimiento precoz en la perpretación de la apoptosis.

El papel de la apoptosis mitocondrial en la etiología de muchas enfermedades está bien establecido y el grado 35 aumentado de apoptosis, típico de condiciones de tensiones patológicas que se observa durante el infarto de miocardio, la isquemia renal, las diabetes de tipo I y tipo II o enfermedades neurodegenerativas, siempre se correlaciona con la Transición de la Permeabilidad Mitocondrial y con la pérdida de la integridad mitocondrial. Muchos de estos estados de enfermedad están caracterizados por un aumento importante de especies que reaccionan con oxígeno (ROS) que se sabe que son inductores conocidos de la MPT y de la apoptosis. 40

Algunas de las enfermedades más importantes que resultan de la apertura del MPTP se enumeran seguidamente:

Infarto cardiaco

En la enfermedad isquémica cardiaca tienen lugar acontecimientos sucesivos de isquemia-reperfusión que dan por resultado la muerte de células del miocardio por necrosis y/o apoptosis, y ya ha sido demostrado el papel 45 desempeñado por el PTP y el hinchamiento mitocondrial en el infarto de miocardio (Solaini, G.; Harris, D.A. Disfunción bioquímica de mitocondrias cardiacas expuestas a isquemia y reperfusión, Biochem. J., 2005, 390, 377-394). La rotura de la integridad mitocondrial de los cardiomiocitos por la falta de regulación del Ca2+ y la producción de ROS como consecuencia de la transición hipoxia-hiperoxia, es el desencadenante principal de apoptosis durante el infarto de miocardio. (Di Lisa, F.; Bernardi, P.; Mitocondrias y daño del corazón por isquemia-reperfusión: Fijación de un hueco. 50 Cardiovasc. Res., 2006, 70, 2, 191-199). Además, se ha puesto de manifiesto que la ciclosporina A (CsA), un inhibidor conocido del PTP, mejora la recuperación de la línea de base de la función contráctil del miocardio en el tejido atrial humano después de hipoxia y reperfusión experimentales.

Enfermedades neurológicas y Apoplejía

El PTP y el hinchamiento mitocondrial están implicados también en la muerte celular neuronal que sigue a 55 enfermedades degenerativas y en muchos estados de alta frecuencia de daño cerebral tales como hiperglucemia,

hipoglucemia, apoplejía, isquemia y trauma, así como en epilepsia experimental (Pordan, J.; Cena, V.; Prehn, J.H; Control mitocondrial de muerte neuronal y su papel en trastornos neurodegenerativos. J. Physiol. Biochem., 2003, 59, 129-141; Li, P.A.; Uchino, H.; Elmer, E.; Siesjö, B.K.. Mejora mediante la ciclosporina A del daño cerebral que sigue a 5 ó 10 minutos de isquemia, en ratas sometidas a hiperglucemia preisquémica. Brain Res., 1997, 753, 133-140; Folbergrova, J.; Li, P.A.; Uchino, H.; Smith, M.L.; Siesjö, B.K. Cambios en el estado bioenergético de hipocampos de la 5 rata durante 2,5 minutos de isquemia, y prevención de daño celular por la ciclosporina A en sujetos hiperglucémicos. Exp. Brain. Res., 1997, 114, 44-50; Friberg, H.; Ferrand-Drake, M.; Bengtsson, F.; Halestrap, A.P.; Wieloch T. La ciclosporina A pero no el FK506 protege las mitocondrias y las neuronas contra el daño hipoglucémico e implica la transición de la permeabilidad mitocondrial en la muerte celular. J. Neurosci., 1998, 18, 5151-5159; Sims, N.R. y Anderson M.F. Contribuciones mitocondriales a daño tisular en la apoplejía. Neurochem. Int., 2002, 40, 511-26; 10 Stavrovskaya I.G.; Narayanan M.V.; Zhang W.; Krasnikov B.F.; Heemskerk J.; Young S.S.; Blass J.P.; Brown A.M.; Beal M.F.; Friedlander R.M.; Kristal B.S. Compuestos heterocíclicos aprobados clínicamente actúan sobre una diana mitocondrial y reducen la patología inducida por apoplejía. J. Exp. Med., 2004, 200, 211-22; Matsumoto, S; Friberg, H.; Ferrand-Drake, M.; Wieloch, T. El bloqueo del poro de transición de la permeabilidad mitocondrial hace disminuir la dimensión del infarto en la rata después de la oclusión transitoria de la arteria cerebral media. J. Cereb.Blood Flow 15 Metab., 1999, 19, 736-741 Scheff, S.W.; Sullivan P.G. La ciclosporina A mejora significativamente el daño cortical que sigue al daño cerebral traumático, experimental, en roedores. J. Neurotrauma, 1999, 16, 783-792; Kudin , A.P.; Debska-Vielhaber, G.; Vielhaber. S.; Elger, C.E.; Kunz, W.S. El mecanismo de neuroprotección por topiramato en un modelo animal de epilepsia. Epilepsia, 2004, 45, 1478-1487). La proteína beta-amiloide, responsable de la enfermedad de Alzheimer, induce tensión oxidante y daño mitocondrial que dan por resultado muerte celular neuronal, lo que indica 20 que la disfunción mitocondrial está asociada con la progresión de la enfermedad (Abramov, A.Y.; Canevan, L.; Duchen, M.R.. Los péptidos beta-amiloides inducen disfunción mitocondrial y tensión oxidante en astrocitos y muerte de neuronas por activación de NADPH oxidasa. J. Neurosci., 2004, 24, 565-575). Además, la apoptosis masiva que tiene lugar en las células dopaminérgicas en la enfermedad de Parkinson, ha sido ligada causalmente al MTP (Fiskum, G.; Starkov A.; Polster, B.M.; Chinopoulos, C. Mecanismos mitocondriales de muerte de células neuronales e intervenciones 25 neuroprotectoras en la enfermedad de Parkinson....

1. Uso de un compuesto de fórmula (I)

en la que:

R1, R2, R3 y R4, cada uno independientemente, representa: hidrógeno; halógeno; hidroxi; alquilo de (C1–C6) sustituido 5 opcionalmente con hidroxi o alcoxi de (C1–C4); haloalquilo de (C1-C6); alcoxi de (C1-C6); y haloalcoxi de (C1-C6), si es el caso, como un estereoisómero único o como cualquiera de sus mezclas, con inclusión de racematos, para preparar un medicamento para la prevención y/o el tratamiento de enfermedades que resultan de la apertura del MPTP, caracterizadas por daños tisulares degenerativos, estando seleccionadas las enfermedades entre diabetes y complicaciones diabéticas, enfermedades neurológicas y apoplejía, infarto cardiaco, distrofias heredadas y hepatitis. 10

2. Uso de un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, en la que la enfermedad caracterizada por daños tisulares degenerativos está seleccionada entre diabetes de tipo I y tipo II y complicaciones diabéticas, enfermedades neurológicas y apoplejía.

3. Uso de un compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, en la que la enfermedad caracterizada por daños tisulares degenerativos está seleccionada entre enfermedades vasculares diabéticas y 15 trastornos neurodegenerativos.

4. Uso de un compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que la enfermedad caracterizada por daños tisulares degenerativos es la retinopatía diabética.

5. Uso de un compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que la enfermedad caracterizada por daños tisulares degenerativos es la esclerosis múltiple. 20

6. Uso de un compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en cuya fórmula R1, R2, R3 y R4, cada uno independientemente, representa : hidrógeno; halógeno; hidroxi; alquilo de (C1–C4) sustituido opcionalmente con hidroxi o alcoxi de (C1–C4); haloalquilo de (C1-C4); alcoxi de (C1-C4); y haloalcoxi de (C1-C4), si es el caso, como un estereoisómero único o como cualquiera de sus mezclas, con inclusión de racematos.

7. Uso de un compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en cuya fórmula R1, R2, R3 y R4, 25 cada uno independientemente, representa: hidrógeno; fluoro; cloro; bromo; hidroxi; alquilo de (C1-C4) sustituido opcionalmente con hidroxi o alcoxi de (C1-C2); CF3; CRCl3 ; metoxi; etoxi; isopropoxi; OCF3 ; OCHF2 ; y OCH2F, si es el caso, como un estereoisómero unico o como cualquiera de sus mezclas, con inclusión de racematos.

8. Uso de un compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que el compuesto de fórmula (I) está seleccionado entre el grupo que consiste en 1-(3-clorofenil)-3-(4-fluorofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-30 clorofenil)-3-(3-fluorofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-cloro-4-fluorofenil)-3-(3-fluorofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-clorofenil)-3-(2-fluorofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-cloro-4-fluorofenil)-3-(2-fluorofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-bromo-fenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3-metilfenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3-trifluo-rometilfenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3-clorofenil)-3-(4-hidroxifenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-clorofenil)-3-(4-metoxifenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-metilfenil)-3-(4-clo-

rofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-clorofenil)-3-(4-clorofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-clo- 35

rofenil)-3-(4-metilfenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(5-cloro-2-metoxifenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3-cloro-4-fluorofenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, y 1-(3-clorofenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona.

9. Uso de un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 8, en la que el compuesto de fórmula (i) es 1-(3-clorofenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona.

10. uso del compuesto según la reivindicación 9, para preparar un medicamento para la prevención y/o el tratamiento 40 de la retinopatía diabética.

11. Un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, seleccionado entre el grupo que consiste en:

1-(5-cloro-2-metoxifenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(4-trifluorometoxifenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3-trifluorometilfenil)-3-(4-metilfenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-cloro-4-fluorofenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3-clorofenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3,4-diclorofenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3-metilfenil)-3-(4-clorofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3,4-diclorofenil)-3-(4-cloro- 5

fenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-clorofenil)-3-(4-clorofenil)-pirrol-2,5-diona,

1,3-difenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3-clorofenil)-3-(4-metilfenil)-pirrol-2,5-diona,

y 1-(3-clorofenil)-3-(4-metoxifenil)-pirrol-2,5-diona, para usar como un medicamento.

12. Uso de un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, seleccionado entre el grupo que consiste en:

1-(3-metoxifenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3-fluorofenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3-iodofenil)-3-fenil-pirrol-10 2,5-diona, 1-(3-bromofenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3-trifluorometoxifenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3-metilfenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(2-clorofenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(4-bromo-3-fluorofenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3-cloro-4-metilfenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3-cloro-4-hidroxifenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(4-fluoro-3-metilfenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(2,3-dimetilfenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(4-metoxi-2-metilfenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3-trifluorometilfenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3-clorofenil)-3-(3-metilfenil)-pirrol-2,5-15 diona,1-(3-clorofenil)-3-(4-fluorofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-clorofenil)-3-(3-fluorofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-cloro-4-fluorofenil)-3-(3-fluorofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-cloro-4-fluorofe-

nil)-3-(4-fluorofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-clorofenil)-3-(4-hidroxifenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-clorofenil)-3-(4-bromofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-clorofenil)-3-(3-bromofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-clorofenil)-3-(2-fluoro-

fenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-cloro-4-fluorofenil)-3-(2-fluorofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(2-fluorofenil)-3-fenil-pirrol-20 2,5-diona, 1,3-bis-(4-fluorofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-trifluorometilfenil)-3-(4-metoxifenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(4-fluorofenil)-3-(4-metoxifenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(2-metoxifenil)-3-(4-fluorofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(2-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-pirrol-2,5-diona. 1-(3-trifluorome-

tilfenil)-3-(4-fluorofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3,4-difluorofenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3,4-difluorofenil)-3-(4-metoxifenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(4-fluoro-2-metoxifenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(4-fluoro-2-metoxifenil)-3-(4-25 fluorofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(2-metoxifenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3-clorofenil)-3-(3-fluoro-4-metoxifenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-cloro-4-fluorofenil)-3-(3-fluoro-4-metoxifenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-fluorofenil)-3-(3-fluoro-4-metoxifenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-fluorofenil)-3-(3-fluoro-4-hidroxifenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-cloro-4-fluorofenil)-3-(3-fluoro-4-hidroxifenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3,4-difluorofenil)-3-(4-hidroxifenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-clorofenil)-3-(3-fluoro-4-hidroxifenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-clorofenil)-3-(3,4-dimetoxifenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-30 clorofeniil)-3-(3,4-di-

hidroxifenil)-pirrol-2,5-diona.

13. Un compuesto según la reivindicación 12 que está seleccionado entre el grupo que consiste en 1-(3-clorofenil)-3-(4-fluorofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-clorofenil)-3-(3-fluorofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-cloro-4-fluorofenil)-3-(3-fluorofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-clorofenil)-3-(2-fluorofenil)-pirrol-2,5-diona, 1-(3-cloro-4-fluorofenil)-3-(2-fluorofenil)-pirrol-2,5-35 diona, 1-(3-bromofenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3-metilfenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3-trifluorometilfenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona, 1-(3-clorofenil)-3-(4-hidroxifenil)-pirrol-2,5-diona.

14. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 12 y 13, para usar como un medicamento.

15. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, para fabricar un medicamento para la prevención y/o el tratamiento de enfermedades que resultan de la apertura del MPTP, caracterizadas por daños 40 tisulares degenerativos, estando seleccionadas las enfermedades entre diabetes y complicaciones diabéticas, enfermedades neurológicas y apoplejía, infarto cardiaco, distrofias heredadas y hepatitis.

16. Uso según la reivindicación 15, en la que la enfermedad caracterizada por daños tisulares degenerativos está seleccionada entre diabetes de tipo I y tipo II y complicaciones diabéticas, y enfermedades neurológicas y apoplejía.

17. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 15 y 16, en la que la enfermedad caracterizada por daños tisulares 45 degenerativos está seleccionada entre enfermedades vasculares diabéticas y trastornos neurodegenerativos.

18. Uso según la reivindicación 17, en la que la enfermedad caracterizada por daños tisulares degenerativos es la retinopatía diabética o la esclerosis múltiple.

19. Un compuesto de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1, y 6 a 13, si es el caso, como un estereoisómero único o como cualquiera de sus mezclas, con inclusión de racematos, para usar en la prevención y/o el 50 tratamiento de enfermedades que resultan de la apertura del MPTP, caracterizadas por daños tisulares degenerativos,

estando seleccionadas las enfermedades entre diabetes y complicaciones diabéticas, enfermedades neurológicas y apoplejía, infarto cardiaco, distrofias heredadas y hepatitis.

20. Un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 19, para usar en la prevención y/o el tratamiento de una enfermedad caracterizada por daños tisulares degenerativos que es la retinopatía diabética.

21. Un compuesto de fórmula (I) para uso según la reivindicación 20, que es 1-(3-clorofenil)-3-fenil-pirrol-2,5-diona. 5

22. Una composición farmacéutica que comprende como ingrediente activo un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13.