DISPOSITIVO DE INMUNOENSAYO Y MÉTODO DE USO.
Un dispositivo de ensayo comprende: a) un receptáculo con un extremo abierto y un extremo cerrado,
y b) un soporte, y c) una banda de ensayo de flujo lateral, donde el soporte se compone de una porción alargada para fijar la banda de ensayo al mencionado soporte, un cierre que sella sustancialmente el extremo abierto del mencionado receptáculo, una bisagra flexible que forma el soporte, y un elemento de agarre que sobresale por el extremo abierto del mencionado receptáculo cuando el soporte y la banda de ensayo se insertan en el receptáculo; donde una bisagra flexible es una bisagra o elemento de flexión sin piezas móviles
Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E07019359.
Solicitante: MERIDIAN BIOSCIENCE, INC.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 3471 RIVER HILLS DRIVE CINCINNATI, OH 45244 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: Maher,Jonathan Scott, Kraft,Jeffrey A, Kozak,Kenneth J.
Fecha de Publicación: .
Fecha Solicitud PCT: 2 de Octubre de 2007.
Clasificación Internacional de Patentes:
- B01L9/00M
- G01N33/558 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › utilizando la difusión o la migración del anticuerpo o del antígeno.
Clasificación PCT:
- B01L9/00 TECNICAS INDUSTRIALES DIVERSAS; TRANSPORTES. › B01 PROCEDIMIENTOS O APARATOS FISICOS O QUIMICOS EN GENERAL. › B01L APARATOS DE LABORATORIO PARA LA QUIMICA O LA FISICA, DE USO GENERAL (aparatos de uso médico o farmacéutico A61; aparatos para aplicaciones industriales o aparatos de laboratorio cuya estructura y funciones son comparables a las de aparatos industriales similares, ver las clases relativas a los aparatos industriales, en particular las subclases B01 y C12; aparatos de separación o de destilación B01D; dispositivos de mezcla o de agitación B01F; atomizadores B05B; tamices, cribas B07B; tapones, capuchones B65D; manipulación de líquidos en general B67; bombas de vacío F04; sifones F04F 10/00; grifos, válvulas F16K; tubos, empalmes para tubos F16L; aparatos especialmente adaptados al estudio y análisis de materiales G01, particularmente G01N; aparatos eléctricos u ópticos, ver las subclases apropiadas en las secciones G y H). › Dispositivos de soporte; Dispositivos de sujeción (tenacillas, pinzas B25B).
Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.
PDF original: ES-2357435_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
Dispositivo de inmunoensayo y método de uso.
Antecedentes de la invención
Se revela un novedoso dispositivo para la detección de un analito en una muestra utilizando un ensayo de flujo lateral. El dispositivo y el método de la presente invención se pueden montar de forma fácil y económica, y son adecuados para ser utilizados por el personal con escasa formación especializada. El dispositivo permite también la manipulación y eliminación higiénicas de muestras biológicas. El dispositivo y el método revelados aquí se pueden emplear con etiquetas convencionalmente utilizadas con ensayos de flujo lateral, tales como metales coloidales, o también se pueden emplear con etiquetas colorimétricas o fluorescentes que precisan instrumentación para la detección.
Inmunoensayos
La presente invención se refiere a los ensayos que utilizan bandas de ensayo, en particular, un inmunoensayo de flujo lateral. El inmunoensayo, en general, es una técnica sensible utilizada para medir los niveles de una sustancia empleando la reacción de un anticuerpo o anticuerpos con su antígeno. Por lo general, los inmunoensayos confían en la unión de un anticuerpo con un antígeno. Los anticuerpos monoclonales, en particular, se utilizan con frecuencia porque normalmente estos anticuerpos se unen solamente a un punto de una determinada molécula. Esta unión específica mejora la especificidad y precisión de la unión a un determinado analito. Los anticuerpos utilizados en inmunoensayos tienen típicamente una gran afinidad con el antígeno, de forma que una alta proporción del antígeno se une al anticuerpo.
Los inmunoensayos son herramientas de diagnóstico biomédico potentes y versátiles que se pueden utilizar, por ejemplo, para comprobar los niveles de fármacos y hormonas en los fluidos corporales, diagnosticar enfermedades infecciosas y autoinmunes, y diagnosticar y controlar el tratamiento del cáncer.
Un analito que resulta particularmente ideal para la detección utilizando técnicas de inmunoensayo es la influenza. La influenza es una enfermedad respiratoria viral aguda epidémica-pandémica y altamente contagiosa causada por varios géneros de la familia Orthomyxoviridae. El Influenzavirus A y el Influenzavirus B son los dos géneros asociados más habitualmente con la enfermedad en el ser humano. Los índices de infección por influenza tienden a ser más elevados entre la población pediátrica, mientras que las complicaciones graves de esta enfermedad son más frecuentes entre las personas mayores. Los síntomas y signos clínicos comienzan tras un período de incubación de 1 a 4 días e incluyen tos, fiebre, mialgia y malestar. La presentación clínica de la influenza puede variar desde la infección asintomática hasta la neumonía fatal. La influenza circula conjuntamente con otros patógenos respiratorios; por ello, es importante diferenciar la influenza de otras enfermedades respiratorias. Las pruebas de detección rápida de la influenza facilitan la administración más temprana de los fármacos antivirales, que, en general, aportan beneficios clínicos cuando se administran en el plazo de 48 horas a partir de la aparición de los síntomas. No todos los fármacos antivirales son efectivos tanto contra la influenza A como contra la influenza B; por tanto, es importante distinguir entre los dos.
La influenza A y B se pueden detectar en muestras respiratorias humanas mediante diversos métodos entre los que se incluyen el cultivo de tejidos, el ensayo de inmunofluorescencia e inmunoensayo enzimático. El aislamiento del cultivo de tejidos siguen siendo el patrón oro para la detección de la influenza, aunque se pueden tardar hasta siete días en completar el procedimiento. Las pruebas basadas en el anticuerpo inmunofluorescente son moderadamente sensibles, aunque altamente dependientes de la preparación y calidad de la muestra. La rápida detección de la influenza utilizando inmunoensayos basados en micropartículas y enzimas se ha convertido en un aspecto importante del tratamiento de pacientes de todas las edades con enfermedad respiratoria aguda provocada por la influenza. Los resultados de las pruebas se pueden utilizar para respaldar los datos obtenidos con la evaluación clínica del paciente y ayudar al médico a determinar la línea de actuación.
Las técnicas de inmunoensayo emplean típicamente una etiqueta detectable que permite al usuario determinar si el analito está presente en la muestra. La etiqueta se puede conjugar con una panícula como un anticuerpo que se une al analito (denominado en el presente como primer "reactivo de unión"). El tipo de etiqueta empleado puede variar, y puede incluir etiquetas detectables visualmente, así como etiquetas que precisan instrumental para su detección. Algunos ejemplos, a título meramente enunciativo, de las etiquetas que se pueden utilizar con técnicas de inmunoensayo incluyen enzimas, radioisótopos, marcas fluorescentes, partículas de carbono, perlas, o marcas de solución coloidal de un metal como oro coloidal.
Inmunoensayos de flujo lateral
Los ensayos de flujo lateral (o ensayos "de flujo") son bien conocidos en el campo y se describen en Ching et al., Patente estadounidense 6.534.320, May et al., Patente estadounidense 6.228.660, Charlton et al, Patente estadounidense 5.989.921, Charlton, Patente estadounidense 6.485.982, Charlton, Patente estadounidense 5.714.389, Rosenstein, I) S RE38.430.
Los ensayos de flujo lateral se caracterizan por el hecho de que una solución líquida que contiene un analito a detectar es transportada lateralmente por acción capilar a lo largo de una banda de membrana. Por lo general, la banda de membrana tiene reactivos impregnados. En la membrana, la muestra se aplica en un extremo de la banda (típicamente en la primera almohadilla absorbente) y, en ocasiones, con la ayuda de un disolvente como agua. La muestra se puede mezclar con un reactivo de marcado que tenga un primer reactivo de unión antes del contacto con la banda, o la propia banda puede contener el reactivo de marcado. Mientras el líquido pasa por una ``zona de detección, segundos reactivos de unión inmovilizados en la banda permiten la visualización de los resultados del ensayo. Por lo general, el ensayo de flujo lateral es rápido y permite una detección sensible y precisa de analitos, dependiendo en parte de la selección de los reactivos de unión utilizados.
Los ensayos de flujo lateral pueden emplear técnicas "competitivas" o "no competitivas", siendo ambas bien conocidas en el campo. En el inmunoensayo de tipo competitivo, el analito de una muestra se mezcla con el analito que está conjugado con una etiqueta detectable. A continuación, la mezcla entra en contacto con una banda de ensayo de flujo lateral. Posteriormente la mezcla migra a lo largo de una trayectoria de flujo definida por una membrana. El analito no marcado (de la muestra) y el analito marcado compiten por un número limitado de puntos de unión o un agente de unión inmovilizado en la banda de ensayo. La cantidad de analito marcado detectada en la región de detección en un ensayo competitivo es inversamente proporcional a la concentración de analito en la muestra (es decir, una cantidad superior de marcado acumulado indica unos niveles inferiores de analito en la muestra del ensayo).
Por lo contrario, en los inmunoensayos "no competitivos" o de tipo "sándwich", el antígeno de la muestra se une a un primer reactivo de unión (como un anticuerpo) conjugado con una etiqueta (el "reactivo de marcado"). La muestra que contiene el antígeno unido al reactivo de marcado se pone posteriormente en contacto con una banda de ensayo de flujo lateral. Mientras la mezcla migra por acción capilar a lo largo de la membrana, el complejo del reactivo de marcado-analito entra en contacto y se une a un segundo agente reactivo inmovilizado en la membrana. El complejo etiqueta-analito se acumula sobre la membrana, y resulta en una línea indicadora visible. La cantidad de una etiqueta acumulada es directamente proporcional a la concentración del antígeno en la muestra. Tanto los ensayos de tipo competitivo como los de tipo no competitivo se describen en Ching et al, Patente estadounidense 6.534.320.
Típicamente, los inmunoensayos de flujo lateral emplean los mismos componentes básicos. Estos se describen, por ejemplo, en Ching et al, Patente estadounidense 6.534.320 y May et al, Patente estadounidense 6.228.660. Estos componentes son: un primer material absorbente, una membrana (como nitrocelulosa) y un segundo material absorbente, donde la banda de ensayo tiene reactivos impregnados... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Un dispositivo de ensayo comprende:
donde el soporte se compone de una porción alargada para fijar la banda de ensayo al mencionado soporte, un cierre que sella sustancialmente el extremo abierto del mencionado receptáculo, una bisagra flexible que forma el soporte, y un elemento de agarre que sobresale por el extremo abierto del mencionado receptáculo cuando el soporte y la banda de ensayo se insertan en el receptáculo;
donde una bisagra flexible es una bisagra o elemento de flexión sin piezas móviles.
2. Un dispositivo conforme a la reivindicación 1, donde el soporte comprende también una función de tope.
donde una función de tope posiciona el extremo distal del soporte y la banda de ensayo en la posición adecuada dentro del receptáculo con respecto a una muestra, a una distancia necesaria para iniciar el flujo lateral.
3. Un dispositivo conforme a la reivindicación 1, donde el soporte comprende también al menos una función de alineado, donde una función de alineado es un hueco con una pared sólida a cada lado o una pared periódica.
4. Un dispositivo conforme a la reivindicación 1, donde el soporte también dispone de uno o más elementos de retención.
5. Un dispositivo conforme a la reivindicación 1, donde el soporte se compone de dos partes acoplables complementarias separadas que se acoplan una con otra para formar el elemento de agarre.
6. Un dispositivo conforme a la reivindicación 1, donde el soporte comprende también una bisagra que separa una porción superior y una porción inferior de un elemento de agarre, donde el elemento de agarre se forma plegando la porción superior del elemento de agarre sobre la porción inferior del mismo por dicha bisagra.
7. Un dispositivo conforme a la reivindicación 1, donde el soporte comprende también al menos una región de protección por toda su longitud.
8. Un dispositivo conforme a la reivindicación 1, donde el soporte comprende también una o más guías de detección.
9. Un dispositivo conforme a la reivindicación 1, donde el soporte comprende también una o más clavijas secundarias.
10. Un dispositivo conforme a la reivindicación 9, donde la banda de ensayo comprende también un reactivo de marcado movilizado difusamente.
11. Un dispositivo conforme a la reivindicación 1, donde el receptáculo contiene una etiqueta conjugada al menos con un reactivo de unión.
12. Un dispositivo conforme a la reivindicación 11, donde la etiqueta se selecciona de entre el grupo compuesto por enzimas, radioisótopos, etiquetas fluorescentes, partículas de carbono, perlas y soluciones coloidales de metales.
13. Un dispositivo conforme a la reivindicación 11, donde el reactivo de marcado es una esfera liofilizada.
14. Un dispositivo conforme a la reivindicación 1, donde el reactivo de marcado es liofilizado en una almohadilla y colocado en el receptáculo.
15. Un dispositivo conforme a la reivindicación 1, donde el receptáculo se seleccionada de entre el grupo compuesto por tubos de ensayo, cubetas cuadradas, cubetas triangulares, tubos de ensayo transparentes, cubetas transparente, tubos de ensayo opacos y cubetas opacas.
16. Un dispositivo conforme a la reivindicación 1, donde el receptáculo dispone de una o más mirillas.
17. Un dispositivo conforme a la reivindicación 1, donde el receptáculo está curvado de manera que permite el aumento de su contenido.
18. Un dispositivo conforme a la reivindicación 1, donde la banda de ensayo es una banda de ensayo de flujo lateral que comprende un segundo reactivo de unión inmovilizado específico para la influenza A, un segundo reactivo de unión inmovilizado específico para la influenza B, y una región de control.
19. Un dispositivo conforme a la reivindicación 1, que también comprende un elemento de retención.
20. Un dispositivo conforme a la reivindicación 1, donde:
donde una función de tope posiciona el extremo distal del soporte y la banda de ensayo en la posición adecuada dentro del receptáculo con respecto a una muestra, a una distancia necesaria para iniciar el flujo lateral.
21. Un dispositivo de ensayo conforme a la reivindicación 20, donde el reactivo de marcado comprende una etiqueta detectable y un primer reactivo de unión que se une a la influenza A.
22. Un dispositivo de ensayo conforme a la reivindicación 20, donde el reactivo de marcado comprende una etiqueta detectable y un primer reactivo de unión que se une a la influenza B.
23. Un dispositivo conforme a la reivindicación 20, donde el reactivo de marcado se conjuga con una almohadilla.
24. Un dispositivo de ensayo conforme a la reivindicación 20, donde el reactivo de marcado es una esfera liofilizada.
25. Un dispositivo de ensayo conforme a la reivindicación 20, donde la banda de ensayo comprende también una región de control.
26. Un dispositivo de ensayo conforme a la reivindicación 20, donde la banda de ensayo se compone de una primera almohadilla absorbente, una membrana de nitrocelulosa que cuenta con una parte posterior de plástico y una segunda almohadilla absorbente, que contiene los segundos reactivos de unión inmovilizados impregnados.
27. Un kit para detectar la presencia de un analito en una muestra, comprendiendo dicho kit: el dispositivo de la reivindicación 1, donde el soporte comprende una función de alineado, una o más guías de detección y un elemento de agarre, y una banda de ensayo, donde dicha banda de ensayo está fijada a la porción alargada y el soporte está configurado para ajustarse en el receptáculo, donde una función de alineado es un hueco con una pared sólida a cada lado o una pared periódica.
28. Un kit conforme a la reivindicación 27, donde el receptáculo contiene un reactivo de marcado predispensado.
29. Un kit conforme a la reivindicación 27, donde el kit comprende también un diluyente.
30. Un método para detectar un analito en una muestra, utilizando un dispositivo conforme a la reivindicación 2, que comprende los pasos siguientes:
donde una bisagra flexible es una bisagra o elemento de flexión sin piezas móviles, generalmente una sección fina de plástico u otro material que conecta dos segmentos de una pieza para mantenerlos unidos y permite el movimiento;
donde una función de tope posiciona el extremo distal del soporte y la banda de ensayo en la posición adecuada dentro del receptáculo con respecto a una muestra, a una distancia necesaria para iniciar el flujo lateral.
31. Un método conforme a la reivindicación 30, donde el reactivo de marcado es una esfera liofilizada.
32. Un método conforme a la reivindicación 30, donde los analitos a detectar son uno o más analitos seleccionados de entre el grupo compuesto por la influenza A y la influenza B.
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