CONTROL DE PLAGAS DE ROEDORES.

La presente invención se refiere a nuevos agentes de control de roedores que comprenden anticuerpos, o fragmentos de unión a antígeno de éstos, que se unen a proteínas expresadas en roedores y, en particular, a anticuerpos o fragmentos de unión a antígeno que se unen a proteínas expresadas en el tracto gastrointestinal (GI) de roedores, así como a métodos para preparar dichos nuevos agentes de control de roedores. La invención se extiende además a nuevos anticuerpos y fragmentos de unión a antígeno para usarse en el control de roedores así como a métodos para controlar roedores mediante el uso de dichos anticuerpos, fragmentos de unión a antígeno y nuevos agentes de control de roedores. Se ha admitido desde hace tiempo que los roedores son plagas y causan numerosos problemas. Frecuentemente, hurgan en busca de su alimento a partir del que está destinado a consumo humano y de animales domésticos, causando así daño a y contaminando (con orina, heces y enfermedad) no sólo los cultivos en crecimiento, sino también materiales alimenticios almacenados. También se sabe que los roedores son portadores de una amplia variedad de enfermedades incluyendo por ejemplo, Triquinosis, Leptospirosis, Cólera, Peste Bubónica, Tifus, Disentería, Hantavirus, Salmonellosis, Pasteurellosis, Toxoplasmosis, y Fiebre por mordedura de rata, que pueden extenderse bien mediante contacto directo (p. ej. mediante mordeduras) o indirecto (p. ej. mediante el polvo generado por las heces, orina, y/o saliva, y/o insectos que viven en o que se alimentan de roedores etc.) a seres humanos y/o otra especie de mamífero. Además, los roedores causan frecuentemente daños físicos a propiedades, instalaciones y equipos royendo y escarbando. Los métodos para controlar roedores han surgido así con el tiempo y pueden dividirse en general en tres categorías: i) captura; ii) muerte mediante la exposición a agentes químicos; y iii) esterilización o reducción de la capacidad de los roedores para reproducirse. Estas tres metodologías presentan una o más deficiencias. Por ejemplo, las trampas mecánicas que están diseñadas para capturar y/o matar roedores están por su naturaleza limitadas en su uso por el número de animales del que pueden encargarse, es decir, pueden ser sólo capaces de encargarse de un animal cada vez antes de que se requiera su reajuste por intervención humana. Cuando se considera la alta velocidad a la que se pueden reproducir los roedores (con un tamaño de camada medio de 6-8 y entre 10 y 12 camadas por año, una única pareja de ratas puede producir hasta 15.000 descendientes en un año) puede observarse que la captura no es adecuada para infestaciones grandes. Además, la captura es relativamente trabajosa y requiere una intervención humana regular y esto da lugar no sólo a un coste incrementado del control de plagas sino que también puede ahuyentar a los roedores a los que van dirigidas las trampas. El uso de rodenticidas químicos es actualmente el método principal para los programas prácticos de control de roedores tanto en entornos urbanos como agrícolas. En general, los rodenticidas químicos son agudos o crónicos en su acción, es decir, el compuesto químico media toxicosis bien rápidamente o lentamente después de que el roedor haya ingerido una dosis eficaz. Los rodenticidas agudos incluyen fosfuro de cinc, fosfuro de tricinc, escila roja (ingrediente activo escilirósido), (mono) fluoroacetato de sodio, fluoroacetamida, alfacloralosa y sulfato de talio. Algunos compuestos químicos rodenticidas, tales como caliciferol, brometalina y flupropadina, pueden describirse como rodenticidas subagudos porque se ingiere una dosis letal en las primeras 24 horas, pero se produce la alimentación reiterada y la muerte se retrasa normalmente varios días, aunque la distinción entre rodenticidas que actúan de forma aguda y subaguda no está siempre clara. Aunque los rodenticidas agudos son ventajosos porque actúan muy rápidamente, son en general compuestos químicos muy tóxicos y existen problemas de seguridad y medioambientales asociados con su uso. Además, los supervivientes de cebos con veneno agudo pueden volverse reticentes al cebo, reduciendo así la eficacia global de este método de control de roedores. Los rodenticidas crónicos median su efecto actuando como anticoagulantes, ejemplos de éstos incluyen los anticoagulantes de primera generación hidroxicumarinas (p. ej. warfarina, cumaclor, cumafurilo, cumatetralilo) e indano-dionas (p. ej. pindona, difacinona, clorfacinona); y los anticoagulantes de segunda generación bromadiolona, brodifacum, difenacum, flocumafen y difetialona. El uso de rodenticidas de segunda generación ha sido extensivo durante las últimas 2 a 3 décadas y aún mayor (3 a 5 décadas) para los anticoagulantes de primera generación. Así, las poblaciones de roedores han tenido mucho tiempo para desarrollar resistencia a este método de control y se ha indicado resistencia/tolerancia para cada uno de los ingredientes activos mencionados anteriormente en varias poblaciones y/o especies de roedores (véase Kerrins et al., 2001, "Distribution of resistances to anticoagulant rodenticides in England, 1995-98" p 149-159 Proceedings, Advances in Vertebrate Pest Management II, Second European Vertebrate Pest Management Conference, Braunschweig, Alemania). Una desventaja adicional de los anticoagulantes de segunda generación surge de su modo de acción no específico de especie acoplado con su uso generalizado. Durante muchos años, han existido preocupaciones respecto al envenenamiento secundario de mamíferos y aves predadores y carroñeros que consumen roedores que portan restos de anticoagulante. 2 ES 2 367 273 T3 Tanto brodifacum como flocumafen han sido restringidos al uso interior en el Reino Unido ya que se piensa que presentan un alto riesgo inaceptable de envenenamiento secundario si se usan en el exterior. Sin embargo, la resistencia generalizada a difenacum y bromadiolona que se usan de forma más generalizada puede alentar el abuso de anticoagulantes potentes cuyo uso está restringido al interior. Más recientemente, se han observado niveles bajos de restos y un impacto letal de dichos restos en un amplio rango de especies no diana que tienen una importancia considerable en cuanto a la conservación, p. ej., Lechuzas, Armiños, Comadrejas, Turones y Cernícalos. Un tercer método de control de roedores que se ha propuesto, pero que todavía no ha conseguido ningún éxito comercial real, se basa en reducir el índice de natalidad de los roedores. Se ha investigado el uso de inhibidores de la reproducción, tales como contraceptivos y gametocidas, así como el uso de esterilizantes biológicos y químicos. Sin embargo, cada método presenta alguna desventaja. Por ejemplo, aunque el uso de compuestos químicos o esteroides como agentes antifertilidad ha demostrado ser exitoso para animales en cautividad, son más difíciles de emplear con poblaciones de plagas libres. Los compuestos tienen un sabor desagradable y así es difícil asegurar que los roedores obtienen una dosis adecuada. El gametocida alfaclorohidrina se ha comercializado como un tóxicoesterilizante, sin embargo, tiene efectos variables en diferentes especies y es tóxico (dando lugar hasta a un 50% de mortalidad) a dosis más altas. Las investigaciones más recientes han examinado la inmunocontracepción como un método de control de roedores (véase, por ejemplo, la Solicitud de Patente de EEUU No 2005/0009188; Moore & Wong 1997, Reproduction Fertility & Development 9:125-9; Smith et al, 1997, Reproduction, Fertility & Development, 9:85-9). Sin embargo, existen dificultades con la eficacia cuando la ruta de administración es oral, debido a problemas de tolerancia oral y pueden requerirse adyuvantes. WO01/58955 describe la destrucción dirigida de plagas mediante el suministro de un péptido dirigido frente a un epítopo antigénico de una célula diana del tracto gastrointestinal o digestivo de dicha plaga y una toxina. El péptido puede ser un anticuerpo o fragmento de anticuerpo y la toxina puede ser gelonina. Sin embargo, sólo se proporcionan enseñanzas intelectuales, en contraposición con técnicas, para el direccionamiento a roedores. Existe así una necesidad de nuevos agentes de control de roedores (es decir, agentes que son capaces de controlar una población de roedores, por ejemplo, mediante la muerte de los roedores o mediante la regulación de la capacidad de una población de roedores de reproducirse), que supere algunas de las desventajas que presentan los métodos actuales de control de roedores. La presente invención aborda esta necesidad proporcionando un agente de control rodenticida que comprende un componente de anticuerpo que se une a un epítopo peptídico específico de roedores (RSPE), en el que dicho RSPE consiste en un fragmento oligopeptídico de una proteína expresada... [Seguir leyendo]

1. Un agente de control rodenticida que comprende un componente de anticuerpo que se une a un epítopo peptídico específico de roedores (RSPE), en el que dicho RSPE consiste en un fragmento oligopeptídico de una proteína expresada en un roedor, en el que la secuencia del fragmento oligopeptídico representa un epítopo peptídico continuo extracelular que tiene un porcentaje de identidad de 60% o menos con una secuencia peptídica lineal correspondiente de una proteína homóloga de un animal no diana en el que el componente de anticuerpo está unido a un componente tóxico. 2 Un agente de control de roedores según la reivindicación 1 que comprende una proteína de fusión, comprendiendo dicha proteína de fusión un primer componente de proteína y un segundo componente de proteína, siendo dicho primer componente de proteína el componente de anticuerpo y siendo dicho segundo componente de proteína una toxina. 3. Un agente de control de roedores según la reivindicación 2, en el que dicho primer y segundo componentes de proteína están unidos entre sí mediante un conector peptídico. 4. Un agente de control de roedores según la reivindicación 3 en el que dicho conector peptídico comprende restos de Glicina y Serina, comprendiendo el conector al menos tres restos (Gly4Ser) . 5. Un agente de control de roedores según la reivindicación 1 que comprende un conjugado de proteína, comprendiendo dicho conjugado de proteína un componente de anticuerpo según la reivindicación 1 conjugado químicamente con un componente tóxico. 6. Un agente de control de roedores según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el componente tóxico es una toxina proteica. 7. Un agente de control de roedores según la reivindicación 6, en el que dicha toxina es a) una proteína de longitud completa seleccionada del grupo de proteínas listadas en el grupo 1, en el que el grupo 1 consiste en una proteína que desorganiza las membranas, una ribosiltransferasa, una serina proteasa, un activador de guanilil ciclasa, una proteína implicada en el transporte de iones mediado por ATPasa, una adenilil ciclasa dependiente de calmodulina y una ribonucleasa, o es b) un dominio tóxico de una proteína seleccionada del grupo 1. 8. Un agente de control de roedores según la reivindicación 6, en el que dicha toxina es a) una glicosidasa de ARN de longitud completa o es b) un dominio tóxico de una glicosidasa de ARN. 9. Un agente de control de roedores según la reivindicación 7, en el que dicha toxina es a) -purotionina de longitud completa o una proteína de longitud completa seleccionada del grupo de proteínas listadas en el grupo 2, en el que el grupo 2 consiste en Perfingolisina O, Hemolisina alfa, Esfingomelinasa, Hemolisina delta, Granzima B, Toxina alfa, Toxina Cyt, Toxina de la difteria, Granulisina, Melitina, Perforina, Enterotoxina del cólera, Enterotoxina estable con calor, Equinatoxina, Listeriolisina, VIP2, Enterotoxina auxiliar, Aerolisina, BinA, BinB, Colicina E1, Hemolisina A, CTX IV, Ricina, Amebaporo, Hemolisina El Tor, Hemolisina de Virbio damsela, Pneumolisina, Estreptolisina O, Toxina de Kanagawa, Hemolisina de Leptospira, Toxina Cry, Toxina del ántrax, Exotoxina A de Pseudomonas, Barnasa, y VIP3, o es b) un dominio tóxico de -purotionina o un dominio tóxico de una proteína seleccionada del grupo 2. 10. Un agente de control de roedores según la reivindicación 8, en el que la toxina es gelonina. 11. Un agente de control de roedores según la reivindicación 5, en el que el componente tóxico es un compuesto tóxico seleccionado del grupo que consiste en: colchicina; doxorrubicina; caliqueamicina; un compuesto fármaco antiinflamatorio no esteroideo (NSAID); citocalasina; un anticoagulante; calciferol; brometalina; flupropadina; fosfuro de cinc; escilirósido; (mono)fluoroacetato de sodio; fluoroacetamida; alfacloralosa; sulfato de talio, en el que el anticoagulante se selecciona del grupo que consiste en: brodificum, difenacum, bromadiolona, flocumafen, difetialona, hidroxicumarinas, e indano-dionas. 12. Un agente de control de roedores según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la proteína que se expresa en un roedor se expresa en el epitelio gastrointestinal. 13. Un agente de control de roedores según la reivindicación 12, en el que la proteína que se expresa en el epitelio gastrointestinal se selecciona del grupo que consiste en PEPT1 de rata, CD155 de rata, GTR2 de rata, CFTR de rata, CNT2 de rata, CATB(0+) de rata, MDR1 de rata, MDR1 de ratón, Sucrasa-Isomaltasa de rata, GLUT7 de ratón, GTR5 de rata, Npt2A de rata, OAT-B de rata, ASBT de rata, CAT1 de rata, 0ATP3 de rata, ABCG8 de rata, GTR8 de rata, MRP1 de rata, CNT1 de rata, UT-B de rata, DRA1 de rata, ENT1 de ratón y ENT1 de rata GCC de rata, PLB de rata, LPH de rata, LPH de ratón, AMPN de rata, MCDL de rata, SCAB de rata, KCV2 de rata. ES 2 367 273 T3 14. Un agente de control de roedores según la reivindicación 13, en el que el RSPE se proporciona por una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NOs: 1-36. 15. Un agente de control de roedores según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el componente de anticuerpo es un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno de éste. 16. Un agente de control de roedores según la reivindicación 15, en el que el anticuerpo es a) una inmunoglobulina que comprende cadenas ligeras y pesadas o b) un anticuerpo de cadena única. 17. Un agente de control de roedores según la reivindicación 16, en el que el anticuerpo de cadena única es un scFv. 18. Un agente de control de roedores según la reivindicación 17, en el que el anticuerpo de cadena única carece de cadenas ligeras. 19. Un agente de control de roedores según la reivindicación 18, en el que el anticuerpo de cadena única se obtiene de Camélidos o de Chondrichthyes. 20. Un agente de control de roedores según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el componente de anticuerpo se selecciona del grupo que consiste en una cadena ligera de inmunoglobulina, una cadena pesada de inmunoglobulina, un dominio VH, un dominio VL, Fv, Fab, di-Fab, Fab', F(ab')2, un dominio VHH, un dominio IgNAR V y una CDR. 21. Un agente de control de roedores según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el componente de anticuerpo presenta una unión desplazable al RSPE, pero no presenta una unión desplazable a: i) una proteína homóloga de un animal no diana, o; ii) un epítopo correspondiente de la proteína homóloga de un animal no diana. 22. Un agente de control de roedores según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en la forma de una composición que comprende además al menos un aditivo. 23. Un agente de control de roedores según la reivindicación 22, en el que el al menos un aditivo es un agente de control de roedores seleccionado del grupo que consiste en: un agente de control de roedores según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21, un anticoagulante de primera generación y un anticoagulante de segunda generación y/o al menos un aditivo tiene la función de hacer que la composición tenga un sabor agradable para los roedores. 24. Un método para matar un roedor que comprende poner un agente de control de roedores según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en un área frecuentada por un roedor, de manera que después de la ingestión por dicho roedor de dicho agente de control de roedores, dicho roedor muera. 71 ES 2 367 273 T3 72