COMPOSICIONES DE OLOR A PARTIR DE MOLÉCULAS HLA.

[0001] La invención se refiere a nuevas composiciones de olor, que se pueden atribuir respectivamente a dos portadores potenciales de olor diferentes (compañeros). [0002] Del estado de la técnica se conocen una multitud de olores de diferente procedencia, con los cuales el usuario ha intentado e intenta influir positivamente, mediante la utilización de aceites esenciales, perfumes o jabones con mejor o peor olor, en el supuestamente insuficiente olor del propio cuerpo. En los últimos años se ha señalado que posiblemente las causas genéticas sean responsables del olor propio de un individuo, y con esto también del efecto de atracción que causan en otros compañeros. Estudios especiales llevados a cabo con personas (al. J. Hum. Genet. 61, 505-51 (1997) permitieron observar que la elección del compañero posiblemente estaba influenciada por el olor, por vía de genes polimorfos del complejo mayor de histocompatibilidad (complejo MHC o HLA en el ser humano) (MHC = complejo mayor de histocompatibilidad; HLA = Antigen Leucocito Humano)). Los genes HLA están en una zona de aproximadamente 4.000.000 de pares de bases (pb) sobre el cromosoma humano 6. Hasta hoy no se ha conseguido una atribución olfatoria de moléculas relacionadas con el desarrollo de un olor específico individual. Sin embargo, hay indicios de que las moléculas MHC son causa de la producción de un perfil de olor específico individual (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94, 2210-2214, 1997; Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96, 1522-1525, 1999. [0003] La invención se basa en la tarea de desarrollar una composición de olor, que en base a una determinada elección de alelos de genes olfatorios relevantes y en un tratamiento posterior de sus productos de síntesis en sustancias específicas de olor, confiera en forma de dos formulaciones separadas, a diferentes compañeros atractivo diferente pero reciproco. [0004] Según la invención es dispuesta una composición de olor. [0005] Composición de olor de moléculas HLA, producida según un procedimiento en el que a) se escogen alelos HLA de clase I, que se produjeron por mutagénesis in-vitro de la bolsa B a partir de alelos HLA clase I ya existentes, que no existen de manera natural y que por lo tanto tienen una frecuencia del 0%, y b) se sintetiza la parte soluble extracelular de la proteína, para la cual se codifica el alelo seleccionado, y después se somete a una ligadura in-vitro en presencia de (~2~ microglobulina ( 2m), dando lugar a un gran número de diferentes péptidos con una longitud tipificada de 7 a 12 aminoácidos con terminación libre de N y C para la conformación de moléculas HLA de clase I solubles, conformadas por dominios extracelulares 1, 2 y 3, 2m y un péptido, donde el péptido enlazado está presente en la bolsa de unión al péptido de la molécula HLA formada por los dominios extracelulares 1 y 2; y c) las moléculas HLA de clase I formadas con los péptidos enlazados, se separan de los otros componentes en una fase de limpieza, y d) las moléculas HLA de clase I purificadas se someten a una fragmentación con una o varias proteasas, y e) las sustancias activas olorosas resultado de la fragmentación, se introducen como componente único o como mezcla en un preparado cosmético. [0006] Así como procedimiento para la fabricación de una composición de olor a partir de moléculas HLA, donde al menos a) se seleccionan entre alelos HLA de clase I conocidos, un alelo que se diferencia por lo menos en una característica de los demás alelos de la molécula HLA clase I, que aparece en menos del 5 % de las personas de la población mundial; o b) se escogen alelos HLA de clase I, que se produjeron por mutagénesis in-vitro de la bolsa B a partir de alelos HLA clase I ya existentes, que no existen de manera natural y que por lo tanto tienen una frecuencia del 0%, y c) se sintetiza la parte soluble extracelular de la proteína, para la cual se codifica el alelo seleccionado, y después se somete a una ligadura in-vitro en presencia de (~2~ microglobulina ( 2m), dando lugar a un gran número de diferentes péptidos con una longitud tipificada de 7 a 12 aminoácidos con terminación libre de N y C para la conformación de moléculas HLA de clase I solubles, conformadas por dominios extracelulares 1, 2 y 3, 2m y un péptido, donde el péptido está presente enlazado en la bolsa de unión al péptido de la molécula HLA formada por los dominios extracelulares 1 y 2 ; y 2   d) las moléculas HLA de clase I formadas con los péptidos ligados se separan de los otros componentes en una fase de limpieza, y e) las moléculas HLA de clase I purificadas se someten a una fragmentación con una o varias proteasas, y f) las sustancias activas olorosas resultado de la fragmentación, se introducen como componente único o como mezcla en un preparado cosmético. [0007] Para una mejor comprensión de la invención, se ofrecen las siguientes explicaciones acerca de la formación intracorporal de las moléculas HLA clase I. [0008] Es conocido que los mamíferos poseen la facultad de distinguir entre su propio tejido y el de otras especies, así como también entre el de otros individuos de su propia especie. Con la ayuda de estudios sobre trasplantes en el ratón, se han podido identificar en el cromosoma 17 en la región H-2 diferentes genes que son responsables causales del rápido rechazo de tejido extraño. Este complejo de genes es conocido desde entonces como complejo mayor de histocompatibilidad (MHC). El MHC humano se encuentra sobre el brazo corto del cromosoma 6 y es denominado complejo HLA (Antigen leucocito humano). Contiene entre otros, los genes para la proteína MHC clase I HLA-A, HLA-B y HLA-C así como la proteína HLA clase II. Las moléculas HLA enlazan péptidos intracelulares que surgen en la degradación de proteínas citosólicas (típicamente MHC clase I) o extracelulares (típicamente MHC clase II), y las transportan a la superficie celular superior. Allí, los complejos de HLA/péptidos pueden ser reconocidos por los linfocitos T del sistema inmunológico. Otros productos de los genes codificados en el MHC participan de la formación de fragmentos de péptidos y su transporte. [0009] Las moléculas HLA clase I se componen de una cadena pesada anclada a la membrana (43 kDa) y de una cadena ligera asociada no covalente, la ß2 - microglobulina (ß2m; 12 kDa; véase Fig. 1). La cadena pesada está formada por tres dominios extracelulares ( 1, 2 y 3) cada uno con aproximadamente 90 aminoácidos, una zona transmembranal de aproximadamente 25 aminoácidos, y una región c-terminal citoplasmática. La asparagina conservada en la posición 86 del dominio 1 está N-glicosilada en todas las proteínas HLA clase I. La ß2 - microglobulina no está ligada a la membrana y sólo posee un dominio. [0010] Gracias a estudios cristalográficos de rayos X (véase p.ej. Biol J.Mol.. Vol. 285, 645-653, 1999) se conoce la estructura tridimensional de la molécula HLA clase I representada en la figura 2. La microglobulina ß2 y el dominio proximal de la membrana de la cadena pesada ( 3), que poseen el plegado característico de las moléculas de la superfamilia de la inmunoglobulina, soportan y estabilizan la hendidura de unión de los péptidos, formada por los dominios conjuntos 1 y 2 , donde el péptido queda incluido entre dos hélices , que están sobre una superficie de 8 cadenas antiparalelas ß (Fig. 3). [0011] La cadena pesada HLA está sometida a un gran polimorfismo, el ß2 m, por el contrario, es idéntico en todas las moléculas HLA clase I y fuera del complejo HLA queda codificado en el cromosoma 15. Hasta ahora se conocen aproximadamente 70 alelos HLA-A , 200 alelos HLA-B y 70 alelos HLA-C, de los cuales cada individuo experimenta como máximo dos alelos por genlocus. La variedad de alelos está casi completamente limitada a los dominios ( 1 y 2 afecta principalmente a aminoácidos, cuyas cadenas laterales señalan hacia las hendiduras de enlace de los péptidos o hacia el receptor celular T. [0012] La base de la hendidura de enlace de los péptidos consiste en 6 cavidades o bolsas de diferente desarrollo, que se forman por las cadenas laterales de los aminoácidos de la proteína HLA. Los péptidos, presentan generalmente una longitud de 8 o 9 aminoácidos y se unen en una conformación alargada (véase Fig. 3). Una red conservada de puentes de hidrógeno, posiciona las terminaciones N y C en las bolsas en los extremos de las hendiduras de enlace y determina por consiguiente la orientación de los péptidos. Entre las cadenas laterales del péptido y los aminoácidos polimorfos de la proteína HLA, se conforman contactos específicos de alelos adicionales. Las formadas por las últimas bolsas, pueden absorber completamente restos de aminoácidos del péptido, que estén dirigidos hacia abajo en la hendidura de enlace. Estas cadenas laterales son también denominadas "anchor residues", puesto... [Seguir leyendo]

1. Composición de olor a partir de moléculas HLA producida según un procedimiento en el que a) son escogidos alelos HLA de clase I, que fueron producidos por mutagénesis in-vitro de la bolsa B a partir de alelos HLA clase I ya existentes, que no existen de manera natural y que por lo tanto tienen una frecuencia del 0%, y b) se sintetiza la parte soluble extracelular de la proteína, para la cual codifica el alelo seleccionado, y después la somete a un ensamblamiento in-vitro en presencia de 2 microglobulina ( 2m), dando lugar a un gran número de diferentes péptidos con una longitud tipificada de 7 a 12 aminoácidos con terminación libre de N y C para la conformación de moléculas HLA de clase I solubles, conformadas por dominios extracelulares 1, 2 y 3, 2m y un péptido, con lo cual el péptido está presente enlazado en la bolsa de unión al péptido de la molécula HLA formada por los dominios extracelulares 1 y 2 ; c) las moléculas HLA de clase I formadas con los péptidos ligados se separan de los otros componentes en una fase de limpieza, y d) las moléculas HLA de clase I purificadas se someten a una fragmentación con una o varias proteasas, y e) se introducen las sustancias activas olorosas resultado de la fragmentación como componente único o como mezcla en un preparado cosmético. 2. Composición de olor según la reivindicación 1, caracterizada por el hecho de que en el punto e) las sustancias activas tras la separación previa de otras sustancias se introducen en composiciones cosméticas. 3.Composición de olor según reivindicación 1, caracterizada por el hecho de que las proteasas se seleccionan entre proteinasas como serin-proteinasas, cisteín-proteinasas, aspartato proteinasas y metal-proteinasas, aminopeptidasas, dipeptidasas, dipeptido carbopeptidasas, carbopeptidasas, omega-peptidasas. 4. Composición de olor según la reivindicación 1, caracterizada por el hecho de que la molécula HLA de clase I producida, según el punto c) o d) debe mezclarse antes de la fragmentación por un periodo de 1 a 36 horas a una temperatura de 4 a 40°C con suero de ratones 2m(-/-). 5. Composición de olor según la reivindicación 1, caracterizada por el hecho de que el producto producido según la reivindicación 1 conforma una unidad de combinación con un segundo producto, que según el procedimiento de la reivindicación 1, se produce con la condición de que el alelo escogido para el segundo producto sea un alelo diferente al del primer producto, donde el alelo para el segundo producto debe diferenciarse en al menos una característica de otros alelos de la molécula HLA clase I, que aparezca en menos del 5% de la población mundial. 6. Composición de olor según reivindicación 5, caracterizada por el hecho de que la unidad de combinación abarca dos formulaciones de olor separadas. 7. Composición de olor según reivindicación 5, caracterizada por el hecho de que aparece como una solución clara en un jabón, un gel cosmético, una emulsión cosmética, una crema, en una concentración de 0, 0001 a 21 % en peso, en relación a la composición total. 8. Procedimiento para la fabricación de una composición de olor de moléculas HLA, donde a) se selecciona entre alelos HLA de clase I conocidos, un alelo que se diferencia al menos en una característica de otros alelos de la molécula HLA clase I, que aparezca en menos del 5% de las personas de la población mundial. b) se escogen alelos HLA de clase I, que se produjeron por mutagénesis in-vitro de la bolsa B a partir de alelos HLA clase I ya existentes, que no existen de manera natural y que por lo tanto tienen una frecuencia del 0%, y c) se sintetiza la parte soluble extracelular de la proteína, para la cual codifica el alelo seleccionado y después se somete a un ensamblamiento in-vitro en presencia de 2 microglobulina ( 2m), dando lugar a un gran número de diferentes péptidos con una longitud de tipificada de 7 a 12 aminoácidos con terminación libre de N y C para la conformación de moléculas HLA de clase I solubles, conformadas por dominios extracelulares 1, 2 y 3, 2m y un péptido, presente en la bolsa de unión al péptido de la molécula HLA formada por los dominios extracelulares 1 y 2 ; y d) las moléculas HLA de clase I formadas con los péptidos ligados se separan de los otros componentes en una fase de limpieza, y e) las moléculas HLA de clase I purificadas se someten a una fragmentación con una o varias proteasas, y 8   f) las sustancias activas olorosas resultado de la fragmentación, se introducen como componentes únicos o como mezcla en un preparado cosmético. 9. Procedimiento según reivindicación 8, caracterizado por el hecho de que en el punto e) las sustancias olorosas activas, después de haber sido separadas de las demás sustancias, se introducen en las composiciones cosméticas. 10. Procedimiento según reivindicación 8, caracterizado por el hecho de que las proteasas se seleccionan entre proteinasas como comoserin-proteinasas, cisteín-proteinasas, aspartato proteinasas y metal-proteinasas, aminopeptidasas, dipeptidasas, dipetido carbopeptidasas, carbopeptidasas, omega-peptidasas. 11. Procedimiento según reivindicación 8, caracterizado por el hecho de que los alelos HLA-A*6601 y HLA-B*730, los alelos HLA-B*1301 y HLA-B*2709, los alelos HLA-B*2705 con sustitución de la bolsa "B" por la bolsa "B" del alelo HLA A*0201 y HLA-B*7301, se utilizan como sustancias de partida para composiciones de olor separadas. 12. Procedimiento según reivindicación 8, caracterizado por el hecho de que la molécula HLA de clase I producida, según el punto c) o d) se introduce antes de la fragmentación por un periodo de 1 a 36 horas a una temperatura de 4 a 40°C en suero de ratones 2m(-/-). 13. Procedimiento según reivindicación 1, caracterizado por el hecho de que el producto producido según la reivindicación 8, conforma una unidad de combinación con un segundo producto, que según el procedimiento de la reivindicación 8, se produce con la condición de que el alelo escogido para el segundo producto sea un alelo diferente al del primer producto, donde el alelo para el segundo producto debe diferenciarse en al menos una característica de otros alelos de la molécula HLA clase I, que aparezca en menos del 5% de la población mundial. 14. Procedimiento según reivindicación 13, caracterizado por el hecho de que la unidad de combinación abarca dos formulaciones de olor separadas. 15. Procedimiento según reivindicación 13, caracterizado por el hecho de que la composición de olor se introduce en una solución clara, un jabón, un gel cosmético, una emulsión cosmética, una crema, en una concentración de 0, 0001 a 21 % en peso, en relación a la composición total. 16. Composición de olor, producida según el procedimiento establecido en la reivindicación 13, en la cual aparece como una solución clara, un jabón, un gel cosmético, una emulsión cosmética, una crema, en una concentración de 0, 0001 a 21 % en peso, en relación a la composición total. 9     11