APARATO INTEGRADO Y PROCEDIMIENTO PARA DETECTAR LOS ESTADOS INFLAMATORIOS PRESENTES EN UNA MUESTRA DE SANGRE ENTERA.

Aparato integrado y procedimiento para detectar los estados inflamatorios presentes en una muestra de sangre entera CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención concierne a un aparato integrado para detectar estados inflamatorios presentes en una muestra de sangre entera y el procedimiento relativo. En particular, el aparato integrado según la presente invención es capaz de realizar una pluralidad de análisis de tipo físico, tales como la medición de la velocidad de sedimentación (ESR) de tipo inmunológico y de tipo de coagulación, utilizando una única muestra de sangre entera. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Es conocido que, a fin de asegurar una posible patología, se utilizan pruebas de diagnóstico y según los resultados de éstas, se empieza la terapia más apropiada. En un laboratorio clínico, normalmente por lo menos están provistos tres protocolos analíticos previos diferentes, los cuales utilizan tres muestras diferentes de sangre, recogidas en tres recipientes diferentes, de modo que por lo menos se pueden llevar a cabo tres grupos diferentes de pruebas clínicas Un primer grupo de pruebas comprende las pruebas físicas para medir la velocidad de sedimentación de la sangre (ESR), por ejemplo utilizando el procedimiento y el aparato descrito en la solicitud de patente europea EP - A - 1.098.188 (EP 188) a nombre del presente solicitante y para efectuar mediciones del tamaño de la parte corpuscular de la sangre y también para determinar los valores de la anemia y el hematocrito o hemoglobina, como se describe en la solicitud de patente italiana UD 2006000111 a nombre del presente solicitante. El documento WO 2005/022125 también revela un aparato para detectar la velocidad de sedimentación de una muestra de sangre. La prueba para medir la velocidad de sedimentación es indicativa, no específicamente, de la presencia de un estado inflamatorio, puesto que es conocido que, en estados patológicos particulares, los grupúsculos en red tienden a agregarse y formar aglomerados, denominados rouleaux. Esto típicamente se muestra mediante la prueba clínica de velocidad de sedimentación la cual tiene la ventaja de ser fácil de llevar a cabo y es barata. La agregación normalmente está impedida por la carga negativa de los glóbulos rojos, como resultado de lo cual los últimos se repelen entre sí. Sin embargo, es posible que la carga negativa pueda ser neutralizada cuando existen proteínas con una carga positiva presentes en el plasma, lo cual por lo tanto promueven la agregación. Esto explica el incremento en la velocidad de sedimentación en situaciones fisiológicas o patológicas las cuales implican un incremento de fibrinógeno, globulinas beta, globulinas alfa y globulinas gamma. En las patologías de los colágenos, las enfermedades reumáticas y la enfermedad de Hodgkin, existe una conexión entre los valores de la velocidad de sedimentación y el nivel de actividad de la enfermedad: un examen de la velocidad de sedimentación, en estos casos, es un instrumento útil para supervisar las condiciones clínicas de un paciente. A partir de lo anterior está claro que la velocidad de sedimentación revela indirectamente un estado de flogosis. También está claro que la naturaleza no específica de la prueba de la velocidad de sedimentación hace necesario utilizarla en el contexto de los datos clínicos y anamnésicos, los cuales conservan un papel principal. Por lo tanto, cuando el valor de la velocidad de sedimentación excede de los valores normales, es una práctica consolidada llevar a cabo otras pruebas de diagnóstico, incluso aunque sean más caras, pero que sean más específicas. Entre éstas, un segundo grupo de pruebas, de tipo inmunológico, esto es, que se basan en la reacción de anticuerpos antígenos sirve para determinar la concentración de proteína C reactiva (CRP), infecciones de estreptococos (ASO) y el factor reumático RF. La proteína C reactiva CRP es una proteína, presente en el suero sanguíneo, la cual aumenta significativamente a continuación del dañado a los tejidos, las infecciones materiales y virales, las patologías cardíacas y la neoplasia maligna. Los últimos años han contemplado importantes desarrollos en la investigación de los marcadores inflamatorios los cuales pueden actuar como predictores del riesgo de casos cardiovasculares; la hipótesis de mayor crédito es que la 2   aterosclerosis es el resultado de un proceso inflamatorio, el cual se desarrolla en respuesta a un daño metabólico (diabetes, hipercolesterolemia), un daño físico (hipertensión) o un daño derivado del comportamiento (fumar). Las indicaciones clínicas de la medición de estos marcadores consisten en la posibilidad de evaluar el riesgo individual de casos cardiovasculares. La estimación de los factores que tradicionalmente predisponen (edad avanzada, diabetes, fumar, hipertensión, hiperlipidemia y una angina anterior) define el riesgo en un nivel de población bastante aproximadamente, pero permite predecir únicamente el 50 - 60 % de la variación en el riesgo absoluto en el paciente individual. Por lo tanto ha surgido la importancia de averiguar los valores de la proteína C reactiva como predictores del riesgo independiente. Los procedimientos conocidos para determinar la velocidad de sedimentación utilizan el hecho de que, en una solución, un anticuerpo reconoce y se adhiere a un antígeno específico, que determina una reacción inmunológica que es detectada en particular mediante la observación del cambio en las propiedades ópticas de la solución. Para explotar este efecto e investigarlo eficazmente mediante la medición del cambio en las propiedades ópticas, se tiene que evitar la formación de una suspensión o de un precipitado, siendo deseable, por el contrario, la formación de una agregación o una aglutinación. En particular, en condiciones adecuadas una reacción inmunológica puede ocurrir entre anticuerpos específicos inmovilizados en un transportador adecuado, por ejemplo coloideo de oro o partículas de látex y los antígenos, el resultado de lo cual es una mezcla de agregación o aglutinación que se puede determinar en su cambio en absorbencia o bien otras propiedades ópticas. La prueba normal para determinar la proteína C reactiva consiste en la medición del nivel de turbidez causado por la aglutinación debido a la mezcla de una cantidad determinada de suero sanguíneo o plasma con los látex que consisten en bolas, principalmente poliestireno, con un diámetro promedio de aproximadamente 0,120 micras, cubierto con un anticuerpo anti proteína C reactiva y disperso o diluido en líquidos particulares, denominados tampones. La prueba de la proteína C reactiva utilizada en el estado de la técnica se basa en nefelometría y requiere tiempos promedio de aproximadamente 6 minutos para conseguir cinéticas significantes, puesto que la técnica de la nefelometría requiere reactivos de baja concentración. Otros procedimientos se revelan, por ejemplo, en los documentos WO - A - 89/06801 y WO - A - 92/11537, que se basan en un coloideo de oro que forma complejos superagregados, que pueden reemplazar las partículas de látex utilizadas en los ensayos de inmunoaglutinación, detectables mediante un densitómetro o un reflectómetro. Procedimientos adicionales utilizan la sangre entera, en lugar del suero sanguíneo o plasma y proveen una lisis inicial de los glóbulos rojos presentes y después una aglutinación debido al antígeno presente en el volumen del plasma, el cual encuentra el anticuerpo de la proteína C reactiva específico presente en el transportador sensibilizado. En este caso, el valor medido de la proteína C reactiva se corrige con el valor hematocrito de la muestra de sangre entera. Un procedimiento conocido se describe, por ejemplo, en el documento "Rapid Immunometric Measurement of C- Reactive Protein in Whole Blood" (Medición inmunométrica rápida de la proteína C reactiva en sangre entera), de Petter Urdal, Stig M. Borch, Sverre Landaas, May B. Krutnes, Geir O. Gogstad, y Per Hjortdahl, publicado en Clinical Chemistry 38/4, 580-584 (1992). En particular, este último está relacionado con los documentos anteriormente mencionados WO - A - 89/06801 y WO - A - 92/11537 y revela un procedimiento de ensayo inmunológico comercialmente disponible como un conjunto denominado "NycoCard CRPWhole Blood test", para determinar el contenido de proteína C reactiva (CRP) en una muestra de sangre entera que implica una inmovilización de un anticuerpo específico de la proteína C reactiva en un coloideo de oro ultra pequeño que actúa como un transportador adecuado, un tratamiento de lisis en la muestra de la sangre entera, una reacción inmunológica entre el antígeno y el anticuerpo inmovilizado y una investigación de la agregación o aglutinación resultante que deriva a partir del coloideo de oro que transporta los anticuerpos... [Seguir leyendo]

1. Un aparato integrado para la detección de estados inflamatorios presentes en una muestra individual (11) de sangre entera y derivados a partir de un daño metabólico, un daño físico o un daño derivado del comportamiento, que comprende: - un conjunto de detección (12) para detectar la velocidad de sedimentación (ESR) de dicha muestra (11), a fin de obtener una indicación preliminar de un posible estado inflamatorio presente en dicha muestra (11); y caracterizado por - un primer conjunto de dispensación (56) que comprende primeros medios de micro válvulas (44) adecuados para dispensar una cantidad previamente determinada de dicha muestra (11) por lo menos a un conjunto de tratamiento previo (13) adecuado para realizar un tratamiento previo a fin de eliminar sustancialmente el contenido de glóbulos rojos en por lo menos una parte de dicha muestra (11); - un segundo conjunto de dispensación (57) que comprende unos segundos medios de micro válvulas (36) adecuados para dispensar una cantidad previamente determinada de dicha parte de la muestra (11) previamente tratada en el conjunto de tratamiento previo (13) a un primer reactor (18, 19, 20, 25) de un grupo de reacción (14) capaz de realizar por lo menos una reacción inmunológica o de coagulación entre dicha cantidad previamente determinada de la muestra (11) y un látex (21, 22, 23, y 24) dispensado en una cantidad previamente determinada al reactor (18, 19, 20, 25) mediante un tercer conjunto de dispensación (60), dicho látex (21, 22, 23, y 24) estando adecuadamente sensibilizado para causar dicha reacción inmunológica o de coagulación; - medios ópticos (16) capaces de medir la cinética de dicha reacción inmunológica o de coagulación, indicativa de dichos estados inflamatorios presentes en dicha muestra de sangre. 2. Aparato según la reivindicación 1 caracterizado porque dicho primer conjunto de dispensación (56) comprende un primer medio de detección fotométrica (45) adecuado para detectar el volumen de dicha cantidad previamente determinada de la muestra (11). 3. Aparato según la reivindicación 1 o 2 caracterizado porque dicho segundo conjunto de dispensación (57) comprende un segundo medio de detección fotométrica (58) adecuado para detectar el volumen dispensado de dicha cantidad previamente determinada de dicha muestra (11) previamente tratada en el conjunto de tratamiento previo (13). 4. Aparato según cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado por un tercer conjunto de dispensación (60) que comprende un tercer medio de micro válvulas (61) adecuado para dispensar la cantidad previamente determinada del látex (21, 22, 23, y 24) y un tercer medio de detección fotométrica (62) adecuado para detectar el volumen dispensado de dicha cantidad previamente determinada del látex (21, 22, 23, 24). 5. Aparato según cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque comprende un conjunto de mandato y control (50) por lo menos adecuado para coordinar el funcionamiento del segundo conjunto de dispensación (57) y de un tercer conjunto de dispensación (60) a fin de mantener el valor de la relación de la cantidad previamente determinada dispensada de la muestra (11) previamente tratada en el conjunto de tratamiento previo (13) con respecto a la cantidad previamente determinada dispensada del látex (21, 22, 23, y 24) en una gama determinada, correlacionada con la clase de reacción inmunológica o de coagulación. 6. Aparato según la reivindicación 1 caracterizado porque dicho conjunto de tratamiento previo (13) comprende un reactor de lisis capaz de conseguir una reacción de lisis de una parte de dicha muestra (11) a fin de obtener una muestra lisada. 7. Aparato según la reivindicación 1 caracterizado porque dicho conjunto de tratamiento previo (13) comprende un dispositivo de centrifugación capaz de centrifugar una parte de dicha muestra (11) a fin de obtener una muestra centrifugada en la que los glóbulos rojos son separados de la sangre entera. 8. Aparato según cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque dicho conjunto de detección (12) es capaz también de medir el factor hematocrito equivalente de dicha muestra (11). 9. Aparato según cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque un reactor de coagulación (25) del grupo de reacción (14) es capaz también de realizar por lo menos una reacción de coagulación entre una parte de dicha muestra (11) y un reactivo de coagulación (124). 10. Aparato según las reivindicaciones 5 y 9 caracterizado porque el tercer conjunto de dispensación (60) es capaz también de dispensar una cantidad previamente determinada del reactivo de coagulación (124) al reactor de coagulación (25), el conjunto de mandato y control (50) siendo capaz también de mantener la relación de dicha parte de dicha muestra (11) o la cantidad previamente determinada dispensada de la muestra (11) previamente tratada en 12   el conjunto de tratamiento previo (13) con respecto a la cantidad previamente determinada dispensada del reactivo de coagulación (124) en una gama determinada, correlacionada con la reacción de coagulación. 11. Aparato según cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque dicho grupo de reacción (14) comprende un primer reactor (18), en el cual puede ocurrir una primera reacción entre una primera parte de dicha cantidad previamente determinada de la muestra (11) previamente tratada en el conjunto de tratamiento previo (13) y un primer látex (21) que comprende un anticuerpo anti proteína C reactiva. 12. Aparato según cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque dicho grupo de reacción (14) comprende un segundo reactor (19), en el cual puede ocurrir una segunda reacción entre una segunda parte de dicha cantidad previamente determinada de la muestra (11) previamente tratada en el conjunto de tratamiento previo (13) y un segundo látex (22) que comprende estreptolisina "O". 13. Aparato según cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque dicho grupo de reacción (14) comprende un tercer reactor (20), en el cual puede ocurrir una tercera reacción entre una tercera parte de dicha cantidad previamente determinada de la muestra (11) previamente tratada en el conjunto de tratamiento previo (13) y un tercer látex (23) sensibilizado para detectar el factor reumático. 14. Aparato según cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque dicho grupo de reacción (14) comprende un cuarto reactor (25), en el cual puede ocurrir una cuarta reacción entre una cuarta parte de dicha cantidad previamente determinada de la muestra (11) previamente tratada en el conjunto de tratamiento previo (13) y un cuarto látex (24) que comprende un anticuerpo anti fibrinógeno para medir el contenido de fibrinógeno en dicha muestra (11). 15. Aparato según cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque dicho grupo de reacción (14) comprende un cuarto reactor (25), en el cual puede ocurrir una reacción entre una parte de dicha muestra (11) o una parte de dicha cantidad previamente determinada de la muestra (11) previamente tratada en el conjunto de tratamiento previo (13) y dicho reactivo de coagulación (124). 16. Aparato según la reivindicación 5 caracterizado porque dicho conjunto de mandato y control (50) también es capaz de mandar y controlar dicho conjunto de detección (12) y dicho grupo de reacción (14). 17. Aparato según cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque los medios ópticos comprender un fotómetro (16) provisto de una célula de medición con una trayectoria óptica comprendida entre aproximadamente 0,4 mm y 0,9 mm. 18. Procedimiento para la detección de estados inflamatorios presentes en una muestra individual (11) de sangre entera y derivados a partir de un daño metabólico, un daño físico o un daño derivado del comportamiento, caracterizado porque comprende las etapas de: - medición del valor de la velocidad de sedimentación (ESR) de dicha muestra (11), a fin de obtener una indicación preliminar de un posible estado inflamatorio presente en dicha muestra (11); - sometimiento a un tratamiento previo, en un conjunto de tratamiento previo (13), de una parte de dicha muestra (11) a fin de eliminar sustancialmente el contenido de glóbulos rojos, en el que una cantidad previamente determinada de dicha muestra es dispensada al conjunto de tratamiento previo (13) utilizando un primer conjunto de dispensación (56) que comprende un primer medio de micro válvulas (44) adecuado para dispensar dicha cantidad previamente determinada de dicha muestra (11) al conjunto de tratamiento previo (13); - realización de por lo menos una reacción inmunológica o de coagulación entre una cantidad previamente determinada de dicha parte de la muestra (11) previamente tratada en el conjunto de tratamiento previo (13) y un látex (21, 22, 23, y 24), mediante la utilización de un primer reactor (18, 19, 20, 25) de un grupo de reacción (14); en el que la cantidad previamente determinada de la muestra previamente tratada es dispensada al conjunto de reacción (14) utilizando un segundo conjunto de dispensación (57) que comprende un segundo medio de micro válvulas (36) capaz de dispensar dicha cantidad previamente determinada de dicha parte de la muestra (11) previamente tratada en el conjunto de tratamiento previo (13) al primer reactor (18, 19, 20, 25) y en el que el látex (21, 22, 23, y 24) es dispensado utilizando un tercer conjunto de dispensación (60); - medición de por lo menos la cinética de dicha reacción, indicativa de dichos estados inflamatorios presentes en dicha muestra (11). 19. Procedimiento según la reivindicación 18 caracterizado porque también comprende la etapa de la medición del valor del factor hematocrito equivalente de dicha muestra (11), porque la etapa de tratamiento previo comprende una etapa de reacción de lisis de una parte de dicha muestra (11) a fin de obtener una muestra lisada y porque adicionalmente comprende la etapa de la corrección de la medición de la cinética de dicha reacción realizada con la parte de la muestra lisada, por medio de dicho factor hematocrito equivalente. 13   20. Procedimiento según la reivindicación 18 caracterizado porque la etapa del tratamiento previo comprende una etapa de centrifugado a fin de obtener una muestra centrifugada en la que los glóbulos rojos son separados de la sangre entera. 21. Procedimiento según la reivindicación 18 caracterizado porque también comprende una etapa de la realización de por lo menos una reacción de coagulación entre una parte de dicha muestra (11) o una parte de la muestra (11) previamente tratada en el conjunto de tratamiento previo (13) y un reactivo de coagulación (124), utilizando un reactor de coagulación (25) del grupo de reacción (14); en el que una cantidad previamente determinada del reactivo de coagulación (124) es dispensada utilizando el tercer conjunto de dispensación. 22. Procedimiento según la reivindicación 18 caracterizado porque está provisto un conjunto de mandato y control (50) a fin de mantener la relación de la cantidad previamente determinada dispensada de la muestra (11) previamente tratada en el conjunto de tratamiento previo (13) con relación al volumen dispensado del látex (21, 22, 23, y 24) en una gama determinada, correlacionada con la clase de reacción inmunológica o de coagulación. 23. Procedimiento según las reivindicaciones 21 y 22 caracterizado porque el conjunto de mandato y control (50) también es capaz de mantener la relación de dicha parte de dicha muestra (11) o dicha parte de la muestra (11) previamente tratada en el conjunto de tratamiento previo (13) con relación a la cantidad previamente determinada dispensada del reactivo de coagulación (124) en una gama determinada, correlacionada con la reacción de coagulación. 14     16   17   18