UTILIZACION POR VIA TOPICA DE AL MENOS UN OLIGONUCLEOTIDO DE ARN DE DOBLE HELICE (DSRNA) ANTI-TIROSINA.

Utilización de al menos un oligonucleótido de ARN de doble hélice de secuencia seleccionada entre la SEC ID Nº:

1, la SEC ID Nº: 2, la SEC ID Nº: 13, la SEC ID Nº: 14, la SEC ID Nº: 15, la SEC ID Nº: 16, la SEC ID Nº: 17, la SEC ID Nº: 18, la SEC ID Nº: 19, la SEC ID Nº: 20, la SEC ID Nº: 21 o la SEC ID Nº: 22 para una aplicación por vía tópica para inhibir la expresión de una proteína de la piel o de sus anejos, cuya proteína es la tirosinasa

Utilización por vía tópica de al menos un oligonucleótido de ARN de doble hélice (dsRNA) anti-tirosina.

La invención se relaciona con una nueva utilización de al menos un oligonucleótido de ARN de doble hélice (dsRNA) para una aplicación por vía tópica, así como con composiciones tópicas que contienen, en un medio fisiológicamente aceptable, al menos un oligonucleótido de ARN de doble hélice encapsulado.

La invención se relaciona igualmente con un procedimiento de tratamiento cosmético que utiliza al menos un oligonucleótido de ARN de doble hélice.

La presente invención se relaciona con una nueva utilización de al menos un oligonucleótido de ARN de doble hélice (dsRNA) para una aplicación por vía tópica, así como con composiciones para uso tópico que contienen, en un medio fisiológicamente aceptable, al menos un oligonucleótido de ARN de doble hélice encapsulado.

Se utilizan numerosas substancias por vía tópica para paliar o prevenir ciertas alteraciones estéticas o ciertos trastornos de la piel o de sus anejos. Entre ellas, se buscan más particularmente las substancias que presentan una especificidad biológica real.

En efecto, cuanto más presenten las substancias una actividad específica, tal como una actividad biológica específica, menos riesgo tendrán de provocar efectos secundarios indeseables. Por ejemplo, en una composición destinada a aclarar la tez o a prevenir la pigmentación indeseable, se preferirá utilizar una substancia cuya acción se dirija a una enzima, como la tirosinasa. Se puede citar también a modo de ejemplo la utilización de una substancia que actúe específicamente sobre ciertas metaloproteinasas o ciertas elastasas para la preparación de una composición para prevenir el envejecimiento.

Hasta ahora, este problema de especificidad se resolvía gracias a la utilización de oligonucleótidos de ARN o de ADN nativo o ADN antisentido. Tal utilización conlleva, sin embargo, limitaciones.

En efecto, la utilización de oligonucleótidos (tales como, por ejemplo, los descritos en la solicitud de patente WO 01/58918) de ADN, de ARN no específico o de ADN antisentido en formulaciones tópicas no ha permitido obtener una eficacia deseable. En particular, en la superficie de la piel, ARNasas degradan el ARN nativo; las cantidades que alcanzan los ARNm diana no pueden ser suficientes para obtener el efecto buscado.

Otra limitación de la utilización de los oligonucleótidos de una sola hélice, tales como los mencionados anteriormente, es el riesgo de que se produzcan eventuales replegamientos secundarios (o reemparejamientos secundarios) del oligonucleótido. Por ello, la administración in vivo de oligonucleótidos de una sola hélice (tales como oligonucleótidos de ADN antisentido) es con frecuencia ineficaz. Además, la estabilidad de los efectos in vivo de los oligonucleótidos de una sola hélice es corta a causa de una degradación intracelular rápida de los oligonucleótidos y de una vida media extracelular corta in vivo (Khan A. y col., J. Drug Target 2000, 8, 319-334).

Se necesita así una composición que resuelva a la vez las dificultades de administración dirigida de los principios activos y el problema de especificidad y que se adapte a una aplicación tópica.

Se ha establecido el conocimiento de los oligonucleótidos de ARN de doble hélice, también llamados dsRNA por "double-stranded RNA", desde hace mucho tiempo en las plantas y en los organismos eucariotas (Haines D.S. y col., J. Cell Biochem. 1991; 46:9-20); tienen como función inhibir la expresión de un gen específico (Fire A., Trends in Genetic 1999; 15: 358-363).

La utilización de dsRNA con fines terapéuticos fue descrita en la solicitud de patente WO01/36646, que propone un método de inhibición de genes implicados en enfermedades, en particular cánceres. Los ejemplos de aplicación de este método proponen la inhibición de la expresión de un gen en células indiferenciadas, tales como células embrionarias, u ovocitos, por inyección intracelular de dsRNA dirigido al gen que se ha de inhibir. El objetivo es obtener un efecto sistémico. Los modos de administración contemplados se relacionan con administraciones por vía general.

Contrariamente a las composiciones farmacéuticas propuestas en este documento, una formulación tópica debe alcanzar una célula diferenciada específica, sin actuar más que a un nivel superficial, es decir, a nivel de la piel o de sus anejos (dermis, epidermis y faneras), incluso únicamente en la superficie de la piel dirigiéndose a los microorganismos eucariotas que la recubren. También se puede querer buscar un efecto a nivel de un tipo celular cutáneo específico, tal como el fibroblasto, el melanocito, el queratinocito, la célula de Langherans o la célula endotelial, implicado en alteraciones estéticas o trastornos dermatológicos particulares.

En el marco de la presente invención, se ha visto ahora que es posible utilizar oligonucleótidos de ARN de doble hélice para inhibir específicamente la expresión de determinadas proteínas de células diferenciadas, en particular de células de la piel, y, por lo tanto, para la preparación de composiciones para uso tópico externo.

Es por lo que la presente invención tiene por objeto la utilización para una aplicación por vía tópica de al menos un oligonucleótido de ARN de doble hélice que es activo sobre células diferenciadas, tales como las células de la dermis y de la epidermis (melanocitos, fibroblastos, queratinocitos...).

La utilización según la invención presenta las propiedades antes mencionadas a la vez que permite superar las dificultades encontradas hasta el día de la fecha:

- se dirige específicamente a la expresión de proteínas de las células de la dermis y de la epidermis o de microorganismos eucariotas en la superficie de la piel; se podrá hacer el abordaje de las células, en particular, mediante la elección de un revestimiento que permita la liberación de los oligonucleótidos de ARN de doble hélice en la célula diana;

- los oligonucleótidos de ARN de doble hélice permiten la inhibición específica de un gen (o de varios en el caso de una composición que asocie oligonucleótidos de ARN de doble hélice con secuencias diferentes y que se dirigen a ARNm codificantes para proteínas diferentes);

- los oligonucleótidos de ARN de doble hélice, gracias a su estructura dicatenaria, son resistentes a las ARNasas (enzimas de degradación del ARN); no se degradan en la superficie de la piel;

- por su estructura dicatenaria, estos oligonucleótidos de ARN de doble hélice no pueden sufrir replegamiento y autoemparejarse;

así, la biodisponibilidad del producto activo, es decir, la cantidad de oligonucleótido de ARN de doble hélice que produce el efecto buscado que llega a las células, es netamente mejor y permite la utilización de una menor cantidad de oligonucleótido de ARN de doble hélice.

Las composiciones que contienen el ARN de doble hélice según la invención estarán particularmente adaptadas a un uso cosmético o dermatológico, ya que permiten alcanzar la diana celular sin un modo de administración invasivo, y son activas sin tener que penetrar en el núcleo celular.

Es por medio de un mecanismo complejo a nivel citoplásmico que actúa la maquinaria celular que induce una inhibición de la expresión del ARNm correspondiente.

La administración a una célula de oligonucleótido de ARN de doble hélice induce un fenómeno de extinción postranscripcional del ARNm al que se dirige.

El mecanismo molecular puesto en juego hace intervenir secuencias de 21 a 23 nucleótidos comprendidas en los oligonucleótidos de ARN de doble hélice, siendo estas secuencias responsables de la especificidad de la secuencia del ARNm. Estos oligonucleótidos de ARN de doble hélice son también denominados dsRNA o aún siRNA (por "short interfering RNA", véase Tuschl T., Chem. Biochem. 2001, 2: 239-245). El mecanismo hace intervenir a un complejo dsRNA-proteína formado de manera dependiente de ATP y que desencadena una reacción de degradación específica del ARNm diana (Nykanen A y col., Cell 2001, 107: 309-321).

El objeto de la presente invención se relaciona primeramente con una utilización para una aplicación por vía tópica de al menos un oligonucleótido de ARN de doble hélice que lleva generalmente al menos 10 nucleótidos, especialmente entre 12 y 40 nucleótidos, preferiblemente de 20 a 25 nucleótidos;...

1. Utilización de al menos un oligonucleótido de ARN de doble hélice de secuencia seleccionada entre la SEC ID Nº: 1, la SEC ID Nº: 2, la SEC ID Nº: 13, la SEC ID Nº: 14, la SEC ID Nº: 15, la SEC ID Nº: 16, la SEC ID Nº: 17, la SEC ID Nº: 18, la SEC ID Nº: 19, la SEC ID Nº: 20, la SEC ID Nº: 21 o la SEC ID Nº: 22 para una aplicación por vía tópica para inhibir la expresión de una proteína de la piel o de sus anejos, cuya proteína es la tirosinasa.

2. Utilización según la reivindicación anterior, caracterizada por ser el oligonucleótido una hebra simple de ARN autocomplementario emparejado por replegamiento.

3. Composición tópica que contiene, en un medio fisiológicamente aceptable, al menos un oligonucleótido de ARN de doble hélice de secuencia seleccionada entre la SEC ID Nº: 1, la SEC ID Nº: 2, la SEC ID Nº: 13, la SEC ID Nº: 14, la SEC ID Nº: 15, la SEC ID Nº: 16, la SEC ID Nº: 17, la SEC ID Nº: 18, la SEC ID Nº: 19, la SEC ID Nº: 20, la SEC ID Nº: 21 o la SEC ID Nº: 22, que inhibe la expresión de la tirosinasa, encapsulado en un recubrimiento.

4. Composición según la reivindicación 4, caracterizada por seleccionar el recubrimiento entre las microesferas, las nanoesferas, los oleosomas o las nanocápsulas.

5. Composición según la reivindicación 4 ó 5, caracterizada por tener el recubrimiento un diámetro inferior o igual a 2 µm.

6. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5, caracterizada por representar el o los oligonucleótido(s) de ARN de doble hélice entre un 5.10^-7 y un 5% en peso con respecto al peso total de la composición.

7. Procedimiento cosmético de despigmentación y/o de blanqueamiento de la piel o de las faneras, caracterizado por el hecho de que el oligonucleótido de ARN de doble hélice de secuencia seleccionada entre la SEC ID Nº: 1, la SEC ID Nº: 2, la SEC ID Nº: 13, la SEC ID Nº: 14, la SEC ID Nº: 15, la SEC ID Nº: 16, 20, la SEC ID Nº: 21 o la SEC ID Nº: 22 es capaz de inhibir la expresión de un ARN mensajero codificante de la tirosinasa.