Un anticuerpo monoclonal anti-CD40 humano que es capaz de unirse específicamente a un antígeno CD40 humano expresado en la superficie de una célula que expresa CD40 humano,

estando dicho anticuerpo monoclonal exento de actividad agonista significativa, por lo que cuando se une dicho anticuerpo monoclonal al antígeno CD40 expresado en la superficie de dicha célula, se inhibe el crecimiento o diferenciación de dicha célula, para uso en un procedimiento de tratamiento de un sujeto humano con leucemia linfocítica crónica (CLL), comprendiendo el procedimiento la administración a dicho sujeto de una cantidad efectiva del anticuerpo monoclonal anti-CD-40 humano, seleccionándose dicho anticuerpo anti-CD40 monoclonal humano del grupo constituido por: a) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo capaz de unirse al anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o al anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543; b) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-87 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en SEC ID Nº 10 ó SEC ID Nº 12; c) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-89 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en SEC ID Nº 10 ó SEC ID Nº 12; y d) un anticuerpo monoclonal que compite con el anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543 en un ensayo de unión competitiva

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere a procedimientos para el tratamiento de leucemia linfocítica crónica usando anticuerpo monoclonales anti-CD40 antagonistas.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La leucemia linfocítica crónica (CLL) es un cáncer de células B caracterizado por proliferación y acumulación de células neoplásticas en médula ósea, sangre, nódulos linfáticos y el bazo. CLL es el tipo más común de leucemia en adultos en el hemisferio occidental. La incidencia de CLL aumenta en la población en envejecimiento, siendo la edad media en el momento del diagnóstico de 65 años. Los protocolos de tratamiento actuales incluyen agentes quimioterapéuticos tales como fludarabina, 2clorodeoxiadenosina (cladribina), cloroambucilo, vincristaina, pentostatina, ciclofosfamida, alemtuzumab (campath-1H), doxorubicina, y prednisona. La fludarabina es el quimioterapéutico más efectivo con tasas de respuesta de 17 a 74%, pero CLL llega a ser frecuentemente refractario a cursos repetidos del fármaco (Rozman and Montserrat (1995) NEJM 2133:1052).

La tasa de superviviencia media de paciente con CLL es de nueva años, si bien algunos pacientes con genes de inmunoglobulina mutados tienen un pronóstico más favorable. Véase, por ejemplo, Rozman and Montserrat (1995) NEJM 2133:1052) y Keating y col. (2003) Hematol. 2003:153. En casos en los que CLL se ha transformado en linfoma de células grandes, las supervivencia media cae a menos de un año; de forma similar, casos de leucemia prolinfocítica tienen una pronóstico peor que CLL clásica (Rozman and Montserrat (1995) NEJM 2133:1052). Hasta la fecha no se ha obtenido evidencia de una cura.

CD40 es un antígeno de superficie celular de 55 kDa presente en la superficie de las células B normales y células B neoplásicas humanas, células dendríticas, células presentadoras de antígenos (APC), células endoteliales, células monocíticas y epiteliales. La unión del ligando CD40 al antígeno CD40 en la membrana de la célula B proporciona una señal coestimulatoria positiva que estimula la activación y proliferación de células B, dando lugar a la maduración de células B en una célula de plasma que secreta altos niveles de inmunoglobulina soluble. Las células transformadas de pacientes con linfomas de células B de bajo y alto grado, leucemia linfoblástica aguda de células B, CLL, leucemia mieloblástica y enfermedad de Hodgkin expresan CD40. Las células B malignas de diversos tumores de linaje de células B expresan un alto nivel de CD40 y parecen

depender de la señalización de CD40 para la supervivencia y proliferación. Esto hace del antígeno CD40 una diana potencial para la terapia anti-cáncer. Dado el mal pronóstico para pacientes con leucemia linfocítica crónica se necesitan protocolos de tratamiento alternativos.

Los documentos WO 01/83755, WO 02/28480 y WO 02/28904 describen anticuerpos capaces de unirse a CD40, procedimientos para producir estos anticuerpo y procedimientos para su uso.

Ellmark y col (Immunology 2002, 106, 456-463) describe la modulación de la interacción del ligando CD40-CD40 usando fragmentos de anticuerpo de cadena simple anti-CD40 humanos.

BREVE RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La invención proporciona un anticuerpo monoclonal anti-CD40 humano que es capaz de unirse específicamente a un antígeno CD40 humano expresado en la superficie de una célula que expresa CD40 humano, estando dicho anticuerpo monoclonal exento de actividad agonista significativa, por lo que cuando se une dicho anticuerpo monoclonal al antígeno CD40 expresado en la superficie de dicha célula, se inhibe el crecimiento o diferenciación de dicha célula, para uso en un procedimiento de tratamiento de un sujeto humano con leucemia linfocítica crónica (CLL), comprendiendo el procedimiento la administración a dicho sujeto de una cantidad efectiva del anticuerpo monoclonal anti-CD-40 humano, seleccionándose dicho anticuerpo anti-CD40 monoclonal humano del grupo constituido por: a) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo capaz de unirse al anticuerpo

monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o al anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543;

b) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-87 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en SEC ID Nº 10 ó SEC ID Nº 12;

c) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-89 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en SEC ID Nº 10 ó SEC ID Nº12;y

d) un anticuerpo monoclonal que compite con el anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12

que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543 en un ensayo de unión competitiva. La invención también proporciona el uso de una cantidad eficaz de un anticuerpo

monoclonal anti-CD40 humano que es capaz de unirse específicamente a un antígeno CD40 humano expresado en la superficie de una célula que expresa CD40 humano, estando dicho anticuerpo monoclonal exento de actividad agonista significativa, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un sujeto humano con leucemia linfocítica crónica (CLL), por lo que cuando se une dicho anticuerpo monoclonal al antígeno CD40 expresado en la superficie de dicha célula, se inhibe el crecimiento o diferenciación de dicha célula, seleccionándose dicho anticuerpo anti-CD40 monoclonal humano del grupo constituido por: a) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo capaz de unirse al anticuerpo

monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o al anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543;

b) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-87 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en SEC ID Nº 10 ó SEC ID Nº 12;

c) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-89 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en SEC ID Nº 10 ó SEC ID Nº12;y

d) un anticuerpo monoclonal que compite con el anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543 en un ensayo de unión competitiva. La invención también proporciona un anticuerpo monoclonal anti-CD40 humano

que es capaz de unirse específicamente a un antígeno CD40, estando dicho anticuerpo monoclonal exento de actividad agonista significativa cuando se une al antígeno CD40, para uso en un procedimiento de inhibición del crecimiento de células de leucemia linfocítica crónica (CLL) que expresan antígeno CD40, comprendiendo el procedimiento la puesta en contacto de dichas células con una cantidad efectiva del anticuerpo anti-CD40 monoclonal, seleccionándose dicho anticuerpo del grupo constituido por:

a) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo capaz de unirse al anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o al anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543;

b) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-87 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en SEC ID Nº 10 ó SEC ID Nº 12;

c) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-89 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en SEC ID Nº 10 ó SEC ID Nº12;y

d) un anticuerpo monoclonal que compite con el anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de...

1. Un anticuerpo monoclonal anti-CD40 humano que es capaz de unirse específicamente a un antígeno CD40 humano expresado en la superficie de una célula que expresa CD40 humano, estando dicho anticuerpo monoclonal exento de actividad agonista significativa, por lo que cuando se une dicho anticuerpo monoclonal al antígeno CD40 expresado en la superficie de dicha célula, se inhibe el crecimiento o diferenciación de dicha célula, para uso en un procedimiento de tratamiento de un sujeto humano con leucemia linfocítica crónica (CLL), comprendiendo el procedimiento la administración a dicho sujeto de una cantidad efectiva del anticuerpo monoclonal anti-CD-40 humano, seleccionándose dicho anticuerpo anti-CD40 monoclonal humano del grupo constituido por: a) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo capaz de unirse al anticuerpo

monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o al anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543;

b) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-87 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en SEC ID Nº 10 ó SEC ID Nº 12;

c) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-89 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en SEC ID Nº 10 ó SEC ID Nº12;y

d) un anticuerpo monoclonal que compite con el anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543 en un ensayo de unión competitiva.

2. Uso de una cantidad eficaz de un anticuerpo monoclonal anti-CD40 humano que es capaz de unirse específicamente a un antígeno CD40 humano expresado en la superficie de una célula que expresa CD40 humano, estando dicho anticuerpo monoclonal exento de actividad agonista significativa, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un sujeto humano con leucemia linfocítica crónica (CLL), por lo que cuando se une dicho anticuerpo monoclonal al antígeno CD40 expresado en la superficie de dicha célula, se inhibe el crecimiento o diferenciación de

dicha célula, seleccionándose dicho anticuerpo anti-CD40 monoclonal humano del grupo

constituido por:

a) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo capaz de unirse al anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o al anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543;

b) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-87 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en SEC ID Nº 10 ó SEC ID Nº 12;

c) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-89 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en SEC ID Nº 10 ó SEC ID Nº12;y

d) un anticuerpo monoclonal que compite con el anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543 en un ensayo de unión competitiva.

3. Un anticuerpo monoclonal anti-CD40 humano que es capaz de unirse específicamente a un antígeno CD40, estando dicho anticuerpo monoclonal exento de actividad agonista significativa cuando se une al antígeno CD40, para uso en un procedimiento de inhibición del crecimiento de células de leucemia linfocítica crónica (CLL) que expresan antígeno CD40, comprendiendo el procedimiento la puesta en contacto de dichas células con una cantidad efectiva del anticuerpo anti-CD40 monoclonal, seleccionándose dicho anticuerpo del grupo constituido por: a) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo capaz de unirse al anticuerpo

monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o al anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543;

b) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-87 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en SEC ID Nº 10 ó SEC ID Nº 12;

c) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-89 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en SEC ID Nº 10 ó SEC ID Nº12;y

d) un anticuerpo monoclonal que compite con el anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543 en un ensayo de unión competitiva.

4. Uso de una cantidad eficaz de un anticuerpo monoclonal anti-CD40 humano que es capaz de unirse específicamente a antígeno CD40 en la fabricación de un medicamento para la inhibición del crecimiento de células de leucemia linfocítica crónica (CLL) que expresan antígeno CD40, estando dicho anticuerpo monoclonal exento de actividad agonista significativa cuando se une a antígeno CD40, seleccionándose dicho anticuerpo del grupo constituido por: a) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo capaz de unirse al anticuerpo

monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o al anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543;

b) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-87 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en SEC ID Nº 10 ó SEC ID Nº 12;

c) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-89 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en SEC ID Nº 10 ó SEC ID Nº12;y

d) un anticuerpo monoclonal que compite con el anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543 en un ensayo de unión competitiva.

5. Un procedimiento in vitro para la inhibición del crecimiento de células de leucemia linfocítica crónica (CLL) que expresan antígeno CD40, comprendiendo dicho procedimiento la puesta en contacto de dichas células con una cantidad efectiva de un anticuerpo anti-CD40 monoclonal humano que es capaz de unirse específicamente a

dicho antígeno CD40, estando dicho anticuerpo monoclonal exento de actividad agonista

significativa cuando se une al antígeno CD40, seleccionándose dicho anticuerpo del

grupo constituido por:

a) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo capaz de unirse al anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o al anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543;

b) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-87 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en SEC ID Nº 10 ó SEC ID Nº 12;

c) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los residuos 82-89 de la secuencia de CD40 humano que se muestra en SEC ID Nº 10 ó SEC ID Nº12;y

d) un anticuerpo monoclonal que compite con el anticuerpo monoclonal CHIR-5.9 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 que puede obtenerse de la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543 en un ensayo de unión competitiva.

6. El anticuerpo, uso o procedimiento de cualquier reivindicación precedente, en el que dicho anticuerpo anti-CD40 monoclonal humano se selecciona del grupo constituido por:

(i) un anticuerpo que comprende un dominio variable de cadena ligera que contiene los residuos 44-54, 70-76 y 109-117 de SEC ID Nº 2 o SEC ID Nº 6;

(ii) un anticuerpo que comprende un dominio variable de cadena pesada que contiene los residuos 50-54, 69-84 y 114-121 de SEC ID Nº 4 o SEC ID Nº 7;

(iii) un anticuerpo que comprende un dominio variable de cadena ligera que contiene los residuos 46-52, 70-72 y 111-116 de SEC ID Nº 2 o SEC ID Nº 6; y

(iv) un anticuerpo que comprende un dominio variable de cadena pesada que contiene los residuos 45-51, 72-74 y 115-120 de SEC ID Nº 4 o SEC ID Nº 7.

7. El anticuerpo, uso o procedimiento de la reivindicación 6, en el que dicho anticuerpo anti-CD40 monoclonal humano comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo constituido por:

(i) los residuos 21-132 de SEC ID Nº 2;

(ii) los residuos 21-239 de SEC ID Nº 2;

(iii) SEC ID Nº 2;

(iv) los residuos 20-139 de SEC ID Nº 4;

(v) los residuos 20-469 de SEC ID Nº 4;

(vi) SEC ID Nº 4;

(vii) los residuos 20-469 de SEC ID Nº 5;

(viii) SEC ID Nº 5;

(ix) los residuos 21-132 de SEC ID Nº 2 y los residuos 20-139 de SEC ID Nº 4;

(x) los residuos 21-239 de SEC ID Nº 2 y los residuos 20-469 de SEC ID Nº 4;

(xi) los residuos 21-239 de SEC ID Nº 2 y los residuos 20-469 de SEC ID Nº 5;

(xii) SEC ID Nº2 ySEC ID Nº 4; y

(xiii) SEC ID Nº 2ySECID Nº5.

8. El anticuerpo, uso o procedimiento de la reivindicación 6, en el que dicho anticuerpo anti-CD40 monoclonal humano comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo constituido por:

(i) los residuos 21-132 de SEC ID Nº 6;

(ii) los residuos 21-239 de SEC ID Nº 6;

(iii) SEC ID Nº 6;

(iv) los residuos 20-144 de SEC ID Nº 7;

(v) los residuos 20-474 de SEC ID Nº 7;

(vi) SEC ID Nº 7;

(vii) los residuos 20-474 de SEC ID Nº 8;

(viii) SEC ID Nº 8;

(ix) los residuos 21-132 de SEC ID Nº 6 y los residuos 20-144 de SEC ID Nº 7;

(x) los residuos 21-239 de SEC ID Nº 6 y los residuos 20-474 de SEC ID Nº 7;

(xi) los residuos 21-239 de SEC ID Nº 6 y los residuos 20-474 de SEC ID Nº 8

(xii) SEC ID Nº6 ySEC ID Nº 7; y

(xiii) SEC ID Nº 6ySECID Nº8.

9. El anticuerpo, uso o procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que dicho anticuerpo se selecciona del grupo constituido por el anticuerpo CHIR-5.9 producido por la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5542 o CHIR-12.12 producida por la línea celular de hibridoma

5 depositada en la ATCC como Depósito de Patente Nº PTA-5543.

10. El anticuerpo, uso o procedimiento de cualquier reivindicación precedente, en el que dicho anticuerpo monoclonal se une al antígeno CD40 humano con una afinidad (KD) de al menos 10-6 M.

11. El anticuerpo, uso o procedimiento de la reivindicación 10, en el que dicho anticuerpo monoclonal se une al antígeno CD40 humano con una afinidad (KD) de al menos 10-8 M.

10

12. El anticuerpo, uso o procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que dicho anticuerpo monoclonal es un fragmento de unión al antígeno de dicho anticuerpo monoclonal anti-CD40, en el que dicho fragmento retiene la capacidad de unirse específicamente a dicho antígeno CD40 humano.

13. El anticuerpo, uso o procedimiento de la reivindicación 12, en el que dicho fragmento se selecciona del grupo constituido por un fragmento Fab, un fragmento F(ab')2, un fragmento Fv y un fragmento Fv de cadena única.

14. El anticuerpo, uso o procedimiento de cualquier reivindicación precedente, en el 25 que dicho anticuerpo monoclonal se produce en una línea celular CHO.