DIAGNOSTICO Y MONITORIZACION DEL CARCINOMA HEPATOCELULAR.
Método para diagnosticar HCC (carcinoma hepatocelular) en un sujeto,
que comprende:
(1) determinar el nivel de GP73 o de un polipéptido de 25 kDa +/- 5 kDa que presenta reacción cruzada con un anticuerpo específico de GP73, en una muestra de suero obtenida de un sujeto del que se sospecha que padece HCC; y
(2) comparar el nivel de GP73 o dicho polipéptido en la muestra de suero con los niveles séricos de GP73 o dicho polipéptido en un control, en el que los niveles elevados de GP73 o dicho polipéptido en la muestra de suero con respecto al control indican que el sujeto padece HCC
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2004/028766.
Solicitante: THOMAS JEFFERSON UNIVERSITY
SAINT LOUIS UNIVERSITY
THE UNITED STATES OF AMERICA AS REPRESENTED BY THE DEPARTMENT OF VETERANS AFFAIRS.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 1020 WALNUT STREET,PHILADELPHIA, PA 19107.
Inventor/es: BLOCK, TIMOTHY, M., ROMANO,PATRICK,R, FIMMEL,CLAUS,J, NIKOLAEVA,OLGA.
Fecha de Publicación: .
Fecha Concesión Europea: 9 de Diciembre de 2009.
Clasificación PCT:
- C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
- G01N33/574 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › para el cáncer.
Clasificación antigua:
- G01N1/00 G01N […] › Muestreo; Preparación de muestras para la investigación (manipulación de materiales para un análisis automático G01N 35/00).
Fragmento de la descripción:
Diagnóstico y monitorización del carcinoma hepatocelular.
Campo de la invención
La invención se refiere al diagnóstico del carcinoma hepatocelular (HCC) a través de la detección de marcadores biológicos de HCC en suero, en concreto a través de la detección de la proteína GP73 en suero. La invención también se refiere a la monitorización de sujetos para el desarrollo del HCC, a través de la evaluación de los niveles de GP73 en suero.
Antecedentes de la invención
El HCC es el quinto cáncer más prevalente en el mundo. Sin embargo, debido a que la enfermedad es a menudo refractaria al tratamiento, el HCC es la tercera causa principal de la mortalidad mundial por cáncer, con una tasa de supervivencia de cinco años tras el diagnóstico de menos del cinco por ciento.
La principal etiología del HCC es la infección crónica por el virus de la hepatitis B (HBV) o el virus de la hepatitis C (HCV). El largo período de latencia entre la infección por HBV ó HCV y la aparición del HCC en esta población de alto riesgo proporciona una oportunidad para la detección temprana mucho antes de la aparición de una enfermedad grave. Por lo tanto pueden monitorizarse poblaciones en riesgo para HCC para los bio-marcadores de la enfermedad a medida que se hacen disponibles. Además, a medida que se hacen disponibles más opciones terapéuticas, la detección temprana del HCC resulta importante para mejorar la prognosis de los pacientes.
Actualmente, el estado de la enfermedad de HCC se monitoriza por lo general mediante valoración física, visualización por ultrasonidos del hígado o análisis de suero para un panel de marcadores. Puesto que existe una buena correlación entre los niveles elevados de alfa fetoproteína (AFP) y la aparición de HCC; la determinación de los niveles de AFP a menudo se incluye como un marcador sérico de la enfermedad. Sin embargo la AFP como indicador único de HCC resulta de valor limitado, ya que esta proteína suele encontrarse elevada en ausencia de una enfermedad grave. Su valor en la detección de HCC asociado a HCV está incluso menos claro. Sin embargo, incluso la limitada correlación entre AFP y HCC subraya el potencial del suero como fuente de bio-marcadores de las hepatopatías.
La clasificación clínica de los portadores de HBV y HCV puede dividirse generalmente en cuatro categorías clínicas: inactivo, activo, cirrótico y HCC. Aunque una categoría dada no resulta necesariamente un precursor de lo sucesivo, el HCC puede considerarse una etapa final en la progresión de la hepatopatía en un sujeto infectado. Para facilitar la detección temprana y prognosis de la enfermedad, resultaría altamente deseable la identificación de marcadores moleculares séricos (polipéptidos, glicopéptidos y proteoglicanos), cuya abundancia se correlacione con estas categorías clínicas.
La GP73 es una proteína trans-membrana del Golgi de tipo II que se expresa a un nivel alto en los hepatocitos de los pacientes con hepatitis vírica (Kladney, et al, 2.000, Gene 249, 53-65). La GP73 se expresa constitutivamente en las células epiteliales biliares, y se expresa mínimamente en los hepatocitos normales. En contraposición, los hígados de pacientes con hepatitis de células gigantes presentan una fuerte inmunoreactividad a la GP73 en los hepatocitos multi-nucleados. El ARNm de GP73 y la proteína se expresan en las células del hematoma HepG2 altamente diferenciadas tras la infección con virus, que incluye los adenovirus. Debido a que la GP73 es una proteína trans-membrana del Golgi, no se espera que exista en cantidades significativas en el suero, ni siquiera en sujetos con hígados enfermos o lesionados.
Se han descubierto aumentos significativos de GP73 a nivel de todo el organismo en la hepatopatía debida a causas víricas (HBV, HCV) o causas no víricas (hepatopatía inducida por el alcohol, hepatitis autoinmune); véase Kladney, et al, 2.002, Hepatology 35(6): 1431-40. La expresión de GP73 en los hepatocitos no se encuentra regulada en los hígados enfermos, independientemente de la etiología, mientras que la expresión en las células epiteliales biliares no cambia de manera apreciable.
Aunque estos informes resultan interesantes, la detección de GP73 en las células hepáticas requiere que el paciente se someta a una biopsia de hígado, lo que resulta doloroso e inconveniente.
Por lo tanto, lo que se necesita, es una prueba simple y rápida para determinar el alcance de la hepatopatía y de la lesión causada por la infección del virus de la hepatitis. Una prueba sérica para un bio-marcador de HCC proporcionaría esa velocidad y simplicidad.
WO 03/010336 describe unos marcadores diagnósticos para HCC, incluyendo una proteína transmembrana del Golgi de 63kD depositada bajo el número de entrada NM-001518.1.
Resumen de la invención
La presencia de niveles elevados de GP73 o de un polipéptido de 25 kDa +/- 5 kDa que presenta reacción cruzada con un anticuerpo específico de GP73, en el suero de un sujeto indica si el sujeto está padeciendo de o ha desarrollado HCC. No parece que los trastornos hepáticos no cancerosos o pre cancerosos den lugar a niveles séricos elevados de GP73.
Por lo tanto la invención proporciona un método para diagnosticar HCC en un sujeto, que comprende determinar los niveles séricos de GP73, un polipéptido de 25 kDa +/- 5 kDa que presenta reacción cruzada con un anticuerpo específico de GP73, o ambos en un sujeto con respecto a los niveles séricos de GP73 o del polipéptido en un control. Los niveles séricos elevados de GP73, el polipéptido, o ambos en un sujeto indican que el sujeto padece HCC.
La invención también proporciona un método para monitorizar un sujeto en riesgo de desarrollar HCC, que comprende determinar los niveles séricos de GP73, un polipéptido de 25 kDa +/- 5 kDa que presenta reacción cruzada con un anticuerpo específico de GP73, o ambos en el sujeto durante por lo menos dos momentos. Un aumento de la GP73 sérica, dicho polipéptido o ambos en el sujeto con respecto a los momentos anteriores indica que el sujeto ha desarrollado HCC.
Abreviaturas
En la presente memoria se utilizan las siguientes abreviaturas:
Breve descripción de las figuras
La Figura 1 es un análisis de inmunoelectrotransferecia de GP73 en pacientes infectados por HCV. El panel superior, marcado "GP73", muestra un análisis de inmunoelectrotransferecia con anticuerpo policlonal de conejo anti GP73 contra los siguientes: lisados de tejidos HCC (líneas 1 y 2; 25 µg/línea); lisado de tejido cirrótico (líneas 3 y 4; 25 µg/línea); y sueros (1 µl/línea) de los dos pacientes infectados por HCV con HCC (líneas 5 y 6). El panel inferior, marcado "actina", representa la misma membrana mostrada en el panel superior, tras ser desprendida y a continuación vuelta a examinar para la actina como control para la carga de proteínas.
Reivindicaciones:
1. Método para diagnosticar HCC (carcinoma hepatocelular) en un sujeto, que comprende:
2. Método para monitorizar un sujeto en riesgo de desarrollar HCC (carcinoma hepatocelular), que comprende:
3. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que el nivel de GP73 o dicho polipéptido en la muestra de suero con respecto al nivel de GP73 o dicho polipéptido en el control, o el nivel de GP73 o dicho polipéptido en la segunda muestra de suero con respecto al nivel en la primera muestra de suero, se eleva por lo menos 2 veces.
4. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que el nivel de GP73 o dicho polipéptido en la muestra de suero con respecto al nivel de GP73 o dicho polipéptido en el control, o el nivel de GP73 o dicho polipéptido en la segunda muestra de suero con respecto al nivel en la primera muestra de suero, se eleva por lo menos 3 veces.
5. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que el nivel de GP73 o dicho polipéptido en la muestra de suero con respecto al nivel de GP73 o dicho polipéptido en el control, o el nivel de GP73 o dicho polipéptido en la segunda muestra de suero con respecto al nivel en la primera muestra de suero, se eleva por lo menos 6 veces.
6. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el nivel de GP73 o dicho polipéptido en la muestra de suero se detecta mediante un ensayo de interacción biomolecular.
7. Método según la reivindicación 6, en el que el ensayo de interacción biomolecular es un inmunoensayo.
8. Método según la reivindicación 7, en el que los inmumoensayos se seleccionan del grupo que consiste en una transferencia Western, radioinmunoensayo (RIA), ensayo de inmunofluorescencia, ensayo de quimioluminiscencia, o ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA).
9. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el nivel de GP73 o dicho polipéptido en una muestra de suero se detecta mediante un aptómero.
10. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el nivel de GP73 o dicho polipéptido en una muestra de suero se detecta mediante un anticuerpo.
11. Método según la reivindicación 10, en el que el anticuerpo comprende un anticuerpo anti GP73 monoclonal o policlonal.
12. Método según la reivindicación 10, en el que el anticuerpo comprende un fragmento de anticuerpo.
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