Utilización de un anticuerpo monoclonal (mAb) superagonista, que es específico para la CD28 expresada encélulas T,

para la preparación de una composición farmacéutica destinada al tratamiento de la leucemia linfocíticacrónica del tipo de células B (B-CLL).

Utilización de una sustancia activa que se une con la CD28 para la preparación de una composición farmacéutica destinada al tratamiento de la B-CLL

Sector del invento

El invento se refiere a la utilización de una sustancia activa para la preparación de una composición farmacéutica destinada al tratamiento de la leucemia linfocítica crónica del tipo de células B (B-CLL) .

Antecedentes del invento y estado de la técnica

Para la comprensión del invento son importantes en primer lugar los siguientes antecedentes tecnológicos. La activación de las células T en reposo para la proliferación y la diferenciación funcional requiere primeramente la ocupación de dos estructuras superficiales, de los denominados receptores: 1. del receptor de antígenos, que posee una especificidad diferente de una célula a otra, y es necesario para el reconocimiento de antígenos, p.ej. de productos víricos de disociación; así como 2. de la molécula CD28, la cual se une de modo natural a unos ligandos situados sobre la superficie de otras células del sistema inmunitario y que es expresada de igual manera en todas las células T en reposo con la excepción de un subconjunto de las células T de CD8 de seres humanos. Se habla de una estimulación concomitante de la reacción inmunológica específica para antígenos por medio de la CD28. En un cultivo de células se pueden recrear estos procesos mediante la ocupación del receptor de antígenos así como de la molécula CD28 con unos adecuados anticuerpos monoclonales (mAb’s) . En el sistema clásico de la estimulación concomitante, ni la ocupación del receptor de antígenos ni la de la molécula CD28 a solas dan lugar a la proliferación de células T, pero la ocupación de los dos receptores es no obstante eficaz. Esta observación se realizó en células T de un ser humano, de un ratón y de una rata.

Por el contrario, se conocen también unos mAb's específicos para la CD28, que pueden inducir la proliferación de células T sin ninguna estimulación concomitante. Una tal activación superagonista, es decir independiente de la ocupación del receptor de antígenos, de los linfocitos T en reposo mediante unos mAb's específicos para la CD28, es conocida a partir de la cita bibliográfica de Tacke y colaboradores, Eur. J. Immunol., 1997, 27:239-247. Conforme a ello, se describieron dos tipos de anticuerpos monoclonales específicos para la CD28 con diferentes propiedades funcionales: unos mAb's concomitantemente estimuladores, que estimulan concomitantemente la activación de células T en reposo solamente en el caso de una simultánea ocupación del receptor de antígenos; y unos mAb's superagonistas, que pueden activar la proliferación de linfocitos T de todas las clases in vitro y en un animal de ensayo sin ninguna ocupación del receptor de antígenos. A partir de las citas bibliográficas, el documento de patente alemana DE 197 22 888, el documento de solicitud de patente internacional WO 03/048194 A y el documento de solicitud de patente PCT/Alemania 03/00890 se conocen asimismo unos mAb's específicos para la CD28, que activan eficazmente a los linfocitos T tanto in vitro como también in vivo sin ninguna estimulación de los TCR (receptores de linfocitos T) , es decir que actúan de un modo "superagonista". Estos mAb's, y en cualquier caso los que están dirigidos contra la CD28 humana, son designados también como superMAB's.

La leucemia linfática crónica de la serie de células B (la leucemia linfocítica crónica del tipo de células B, B-CLL) , con una incidencia de 3/100.000 habitantes, constituye la leucemia más frecuente de la edad adulta (Landis y colaboradores, 1999) . La enfermedad se caracteriza por una acumulación progresiva de linfocitos B monoclonales malignos en la sangre, en los nódulos linfáticos, en el hígado y en la médula ósea. Con la progresión de la enfermedad se llega a un aumento del número de linfocitos en la sangre, a un aumento de tamaño de los nódulos linfáticos, del hígado y del bazo, así como a una anemia y una trombocitopenia (Caligaris-Cappio, 2000; Rozman y Montserrat, 1995) . Hoy en día no es posible realizar una terapia curativa de la B-CLL.

Entre las complicaciones principales en el caso de la B-CLL se cuentan ciertas infecciones, de las que son responsables, entre otros, los defectos de células T o respectivamente unas pequeños números de células T, observados en muchos pacientes (Cantwell y colaboradores, 1997; Scrivener y colaboradores, 2003) .

Una función restringida se puede encontrar por lo demás también en el caso de las células tumorales propiamente dichas. Así, está restringida masivamente la propiedad de las células B de la B-CLL, de actuar como unas células presentadoras de antígenos (APZ) y por consiguiente de ser reconocidas y eliminadas por las células T específicas para tumores. Esto se debe, entre otras cosas, a que las células B de la B-CLL no expresan, o expresan sólo de un modo insuficiente, a los ligandos naturales de la CD28 CD80 (= B7.1) y CD86 (= B7.2) en su superficie celular. Por consiguiente, las células T potencialmente específicas para tumores sólo reciben una única señal acerca de la interacción entre el receptor de células T y el MHC + un antígeno tumoral, y no reciben la segunda señal concomitantemente estimuladora, que es necesaria para la activación plena. De un modo resumido, esto apunta al hecho de que al sistema inmunitario de pacientes de B-CLL no se le hace posible evidentemente eliminar por sus propios medios a las células tumorales.

Un enfoque para una forma de terapia tiene como meta mejorar la función como APZ’s de las células B de la B-CLL y por consiguiente reforzar la respuesta inmunitaria anti-tumoral del paciente. A este fin, diversos grupos de trabajo intentaron activar deliberadamente a las células B de la B-CLL y por consiguiente inducir la expresión de los ligandos concomitantemente estimuladores. En este caso, mediante una transferencia génica, se consiguió expresar en las células B de la B-CLL, unos ligandos de la CD40 (CD40L) que estimulan a las células B, y hacer posible de esta manera la interacción entre los CD40L y la proteína CD40 que está presente en todas las células B (inclusive las células B de la B-CLL) . La señal transmitida por medio de la CD40 al interior de la célula condujo a la expresión deseada de los ligandos concomitantemente estimuladores CD80 y CD86 (Kato y colaboradores, 1998; Wendtner y colaboradores, 2002) . Las células de leucemia modificadas de esta manera pudieron actuar por fin realmente de una manera más eficaz como APZ's y fueron eliminadas por fin también - primeramente in vitro - por células T autólogas (Kato y colaboradores, 1998) . También era eficaz la transferencia génica in vivo de los CD40 L: Ésta condujo en los pacientes tanto a una elevación del número de células T como también a una reducción de las células leucémicas (Wierda y colaboradores, 2000) . Este enfoque terapéutico no afecta sin embargo a los defectos de células T precedentemente aludidos de la enfermedad de B-CLL.

A continuación se indican los datos bibliográficos de la literatura científica precedentemente aludida. Caligaris-Cappio, F., Rev Clin Exp Hematol 4, 5-21 (2000) . Cantwell, M. y colaboradores, Nat Med 3, 984-989 (1997) . Kato, K. y colaboradores, J Clin lnvest 101, 1133-1141 (1998) . Landis, S. H. y colaboradores, CA Cancer J Clin 49, 8-31 (1999) . Rozman, C. y colaboradores, N Engl J Med 333, 1052-1057 (1995) . Scrivener, S. y colaboradores, Leuk Lymphoma 44, 383-389 (2003) . Wendtner, C. M. y colaboradores, Blood 100, 1655-1661 (2002) . Wierda, W. G. y colaboradores, Blood 96, 2917-2924 (2000) .

Problema técnico del invento

El invento se basa en el problema técnico de indicar una composición farmacéutica, con la que se pueda tratar la B-CLL, reforzándose simultáneamente de un modo general el sistema inmunitario debilitado de un modo condicionado por la enfermedad, en particular la inmunidad celular mediada por las células T.

Principios del invento y formas de realización preferidas

Para la resolución de este problema técnico, el invento enseña el objeto de la reivindicación 1.

El invento está basado en el reconocimiento de que con el empleo de los mAb's conformes al invento se da por así decir un doble golpe de efecto. Por un lado, son activadas o respectivamente expandidas las células T normales, que han sido reprimidas de un modo condicionado por la enfermedad. De esta manera, a veces unas infecciones con peligro mortal se pueden impedir o debilitar en el transcurso... [Seguir leyendo]

1. Utilización de un anticuerpo monoclonal (mAb) superagonista, que es específico para la CD28 expresada en células T, para la preparación de una composición farmacéutica destinada al tratamiento de la leucemia linfocítica crónica del tipo de células B (B-CLL) .

2. Utilización de acuerdo con la reivindicación 1, siendo producible el mAb inmunizando a un mamífero no humano con la CD28 o con una secuencia parcial de ésta, extrayéndose células del mamífero no humano y produciéndose células de hibridoma a partir de estas células, y seleccionándose las células de hibridoma así obtenidas con la condición de que en su material sobrenadante del cultivo estén contenidos unos mAb's, que se unen de un modo superagonista con la CD28.

3. Utilización de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 o 2,

siendo obtenible el mAb a partir de células de hibridoma, tales como las que se han depositado bajo los números DSM DSM ACC2531 (mAb: 9D7 o respectivamente 9D7G3H11) o DSM ACC2530 (mAb: 5.11A o respectivamente 5.11A1C2H3) , o

conteniendo el anticuerpo en la cadena pesada una secuencia de aminoácidos para la región variable de acuerdo con la Figura 9a (VHC) y en la cadena ligera una secuencia de aminoácidos para la región variable de acuerdo con la Fig. 9b (VLC) , conteniendo las cadenas pesada y ligera de manera opcional adicionalmente las secuencias de aminoácidos indicadas respectivamente en las Figuras 9a y 9b para la región constante de la cadena pesada (CHC) y para la región constante de la cadena ligera (CLC) (en las variantes alternativas allí indicadas) , conteniendo la cadena pesada y la cadena ligera de manera opcional adicionalmente las secuencias de aminoácidos indicadas respectivamente en las Figuras 9a y 9b para el péptido director, estando compuestas la cadena pesada y la cadena ligera de manera preferida en cada caso a base de las secuencias de plena longitud representadas en las Figuras 9a y 9b (en las variantes alternativas del terminal de C, tal como se indica en las Figuras 9a y 9b) .

4. Utilización de acuerdo con la reivindicación 1, estando la composición farmacéutica constituida galénicamente para la inyección por vía intravenosa i.v..

5. Procedimiento para la reducción de células B de la B-CLL y para la expansión de células T en un líquido que contiene células T normales, células B así como células B de la B-CLL, el cual se encuentra fuera del cuerpo.

realizándose que, mediante una interacción de las células T normales, presentes en el líquido, con un mAb superagonista específico para un receptor, que es por naturaleza un estimulador concomitante, en células T, a saber CD28, en reposo, las células T normales son activadas o respectivamente expandidas,

realizándose que, mediante una interacción de las células T de la B-CLL, presentes en el líquido, con el mAb superagonista, específico para la CD28, éstas son activadas y eventualmente expandidas para la expresión de un ligando de CD40,

realizándose que las células T de la B-CLL activadas o respectivamente expandidas, portadoras de ligandos de la CD40, inducen la expresión de la CD86 y/o la CD80 en las células B de la B-CLL, que llevan la CD40,

realizándose que unas células T autólogas, específicas para un tumor, son activadas o respectivamente expandidas de un modo concomitantemente estimulado por las células B de la B-CLL, que son portadoras de la CD86 y/o la CD80, y

realizándose que las células T específicas para un tumor, activadas, eliminan a las células B de la B-CLL.

Secuencia de aminoácidos de la cadena pesada de TGN1412 inclusive el péptido director

Posibles variantes junto al terminal de C (ningún perjuicio de la función)

(..) SLGK o (..) SLGKK o (..) SLG

Péptido director

Fig. 9a

Péptido director

Fig. 9b

Secuencia de ADN de la cadena pesada de TGN1412 inclusive intrones, UTRs y el péptido director

Pos. 150 cag: 1er codón de VHR Pos. 517 tca: último codón de VHR Pos. 2338 aaa: último codón constante de IgG4 Pos. 2341 tga: interrupción

Fig. 9c

Secuencia de ADN de la cadena ligera de TGN1412 inclusive intrones, UTRs y el péptido director

Pos. 160 gac: 1er codón de VLR Pos. 517 tca: último codón de VLR Pos. 1164 tgt : último codón constante de kappa Pos. 1167 tag: interrupción

Fig. 9d 15 Secuencia de aminoácidos de la cadena ligera de TGN1412 inclusive los péptidos directores