UN METODO PARA LA IDENTIFICACION DE LAS SECUENCIAS DESCONOCIDAS DEL VIRUS ADENO-ASOCIADO (VAA) Y UN KIT PARA EL METODO.

Un método de identificar secuencias desconocidas de virus adeno-asociados (VAA) en sospecha que contiene VAA de una infección latente, dicho método comprendiendo las etapas de:

(a) someter la muestra que contiene el ADN a amplificación por medio de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) utilizando un primer grupo de iniciadores que amplifican específicamente una primera región del VAA que comprende al menos 250 pb de las secuencias de ácido nucleico de la cápside del VAA, dicha primera región teniendo una secuencia variable flanqueada al menos por 18 pares de bases de una secuencia altamente conservada en su extremo 5’ y al menos 18 pares de bases de una secuencia altamente conservada en su extremo 3’, dichos pares de bases estando altamente conservados con relación a un alineamiento de al menos VAA1, VAA2, VAA3, VAA4, VAA5 y VAA6;
(b) opcionalmente someter al ADN a una amplificación adicional utilizando un segundo grupo de iniciadores que amplifican específicamente una segunda región que comprende a la primera región de secuencias de VAA y secuencias que están 5’ de la primera región, de tal manera que se obtienen secuencias de extensión 5’ que se fijan al extremo 5’ de las secuencias del VAA amplificadas por los iniciadores para la primera región;
(c) opcionalmente someter al ADN a una amplificación adicional utilizando un tercer grupo de iniciadores que amplifican específicamente una tercera región que comprende a la primera región de secuencias de VAA y secuencias que están 3’ de la primera región, de tal manera que se obtienen secuencias de extensión 3’ que se fijan al extremo 3’ de las secuencias del VAA amplificadas por los iniciadores para la primera región, cada una de dichas segunda y tercera regiones estando predeterminadas con base en el alineamiento de las secuencias de ácido nucleico de la menos VAA1, VAA2, VAA3, VAA4, VAA5 y VAA6, y cada una de dicha regiones comprendiendo secuencias de ácido nucleico que están altamente conservadas al menos sobre 18 pares de bases en el extremo 5’, opcionalmente secuencias variables en la mitad, y secuencias que están altamente conservadas al menos
sobre 18 pares de bases en el extremo 3’ de las secuencias de la región, con relación a las secuencias de al menos VAA1, VAA2, VAA3, VAA4, VAA5 y VAA6; y cada uno de los grupos de iniciadores consiste de un iniciador 5’ y un iniciador 3’; la presencia de las secuencias amplificadas indicando la presencia de un VAA en la muestra, y una comparación de diferencias entre las secuencias amplificadas y las secuencias de VAA1, VAA2, VAA3, VAA4, VAA5 y VAA6 indicando la presencia de un VAA desconocido.

Tipo: Resumen de patente/invención.

Solicitante: THE TRUSTEES OF THE UNIVERSITY OF PENNSYLVANIA.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 3160 CHESTNUT STREET, SUITE 200,PHILADELPHIA, PENNSYLVANIA.

Inventor/es: GAO, GUANGPING, WILSON, JAMES M., ALVIRA, MARICIO.

Fecha de Publicación: .

Fecha Concesión Europea: 15 de Febrero de 2006.

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales,... > C12N5/10 (Células modificadas por introducción de material genético extraño, p. ej. células transformadas por virus)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS... > Procesos de medida, investigación o análisis en... > C12Q1/68 (en los que intervienen ácidos nucleicos)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/86 (Vectores virales)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/10 (Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34))
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS... > Procesos de medida, investigación o análisis en... > C12Q1/70 (en los que intervienen virus o bacteriófagos)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas;... > C07K14/015 (Parvoviridae, p. ej. virus de la panleucopenia felina, parvovirus humano)
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