Método de diagnóstico de enfermedades inflamatorias usando calgranulina C.

Método para el diagnóstico de enfermedades inflamatorias seleccionadas de artritis reumatoide,

artritisseronegativa, artritis juvenil y artritis reumatoide juvenil de comienzo sistémico (ARJS), que comprende lasetapas de

a) determinar la cantidad y/o concentración de polipéptido de calgranulina C en una muestra de suero de unpaciente; y

b) comparar la cantidad y/o concentración de polipéptido de calgranulina C determinada en dicha muestrade suero con la cantidad y/o concentración de polipéptido de calgranulina C determinada en una muestracontrol de suero,

en el que un aumento en la cantidad de polipéptido de calgranulina C en la muestra de suero encomparación con la muestra control es indicativo de dicha enfermedad

Método de diagnóstico de enfermedades inflamatorias usando calgranulina C

Campo de invención La presente invención se refiere a un método para diagnosticar enfermedades inflamatorias, particularmente para diagnosticar estadios específicos de enfermedades inflamatorias y/o para determinar el riesgo de recaída y/o para discriminar entre enfermedades con síntomas similares basándose en el marcador CALGRANULINA C.

Antecedentes de la invención Muchas enfermedades se caracterizan por síntomas de inflamación (enfermedades inflamatorias) . Un indicio es la presencia de células inflamatorias tales como neutrófilos y macrófagos en sitios locales de inflamación. El estado inflamatorio también puede ser sistémico, es decir, las proteínas secretadas por células inflamatorias pueden detectarse en el suero sanguíneo.

A pesar de antecedentes patógenos diferentes o muy frecuentemente desconocidos, los síntomas tempranos de las enfermedades inflamatorias pueden ser muy similares; por ejemplo la fiebre es un síntoma muy común de enfermedades inflamatorias agudas. Las causas conocidas de las enfermedades inflamatorias son reacciones autoinmunitarias, infecciones bacterianas, virales o parasitarias, trastornos genéticos, alergias. En muchos casos, se han propuesto mezclas de éstas u otras causas, por ejemplo para la enfermedad muy común psoriasis, que se caracteriza por inflamación de la epidermis. En algunos casos de pacientes con psoriasis, también puede verse afectado el sistema locomotor dando como resultado artritis psoriásica. Especialmente las articulaciones se ven afectadas por una fuerte inflamación en esta enfermedad, dando como resultado finalmente rigidez. Presumiblemente, esta enfermedad se caracteriza por estar provocada por múltiples factores tales como predisposición genética, estrés psicológico o irritación de la piel.

Las diferentes formas de artritis inflamatoria crónica comprenden un grupo heterogéneo de trastornos clínicamente relevantes que afectan a tejidos mesenquimales generales. Esto conduce a una grave destrucción del tejido articular, dando como resultado daño en cartílago y hueso, y contribuyendo a un alto grado de discapacidad entre los pacientes. La inflamación del tejido sinovial es una característica común de la enfermedad articular periférica en artritis reumatoide. La inflamación sinovial o “sinovitis” se caracteriza por hiperplasia de la capa de revestimiento e infiltración celular e hipervascularización de la capa de subrrevestimiento. Además de los linfocitos-T, los fagocitos tienen un papel crucial en la patogenia de la inflamación sinovial mediante la secreción de diversas citocinas proinflamatorias y metaloproteinasas (Bresnihan & Tak, 1999, Res Clin Rheumatol 13: 645-659) . Las exacerbaciones agudas son características de la artritis reumatoide. La etiología está en su mayor parte poco clara, pero se sugiere un antecedente de enfermedad autoinmunitaria.

En niños, la artritis reumatoide juvenil (ARJ) , también denominada artritis crónica juvenil (ACJ) o artritis idiopática juvenil (AIJ) , es la enfermedad autoinmunitaria reumática más frecuente. Se ven afectados niños de hasta 16 años. Entre el grupo de diferentes formas de ARJ, la artritis reumatoide juvenil de comienzo sistémico (ARJS) o enfermedad de Still es la forma más grave y peligrosa. La ARJS se caracteriza por una reacción inflamatoria sistémica que implica varios sistemas de órganos, por ejemplo bazo, hígado, ganglios linfáticos, médula ósea y piel. Durante el transcurso adicional de esta enfermedad, los pacientes desarrollan una artritis grave que a menudo es resistente a la terapia antiinflamatoria. La patogenia de este trastorno es completamente desconocida. Pacientes con ARJS no muestran rasgos inmunológicos característicos en la presentación inicial sino más bien una activación general de su sistema inmunitario innato, por ejemplo trombocitosis, neutrofilia y activación del sistema del complemento. Este patrón inflamatorio inespecífico es el responsable de las dificultades con respecto al diagnóstico temprano, especialmente con respecto a la discriminación de infecciones bacterianas. El hecho de que la ARJS se asemeje a infecciones bacterianas en los síntomas tempranos y que no existan marcadores de diagnóstico fiables, hace además muy difícil elegir la medicación correcta muy temprano.

Una regulación exacta del tratamiento de las diferentes formas de ARJ mediante administración de sustancias antiinflamatorias sólo puede llevarse a cabo de manera insuficiente hasta la fecha. La patogenia de las diferentes formas de enfermedad está en su mayor parte poco clara y, por tanto, la terapia no puede dirigirse a una diana específica. Especialmente, el criterio de valoración del tratamiento representa un problema principal en la medicación: aproximadamente el 50% de los pacientes con ARJ recaen tras la retirada del tratamiento con metotrexato (MTX) (Ravelli et al., 1995, J Rheumatol 22: 1574) . Varios autores han propuesto por tanto tratar a los pacientes con ARJ con inmunosupresores durante varios años incluso tras la remisión clínica. Hasta la fecha, no existen parámetros fiables para determinar rápida y sensiblemente la actividad inflamatoria residual de enfermedades de artritis reumatoide con el fin de excluir el riesgo de recaída. Parámetros inflamatorios comunes tales como proteína C reactiva (CRP) o velocidad de sedimentación globular (VSG) carecen de especificidad y sensibilidad (Giannini y Brewer, 1987, Clin Rheumatol 6:197) . Los índices internacionalmente aceptados para determinar la actividad de la enfermedad se basan en su mayoría en criterios clínicos (Giannini y Brewer, citado anteriormente) . Esta observación inadecuada de la actividad de la enfermedad da como resultado un tratamiento fijo de los pacientes con inmunosupresores dando como resultado efectos secundarios graves (Giannini y Cassidy, 1993, Drug Saf 9: 325) .

La artritis psoriásica habitualmente no es tan destructiva como la artritis reumatoide, lo que puede deberse a la menor infiltración sinovial de macrófagos con una producción inferior posterior de citocinas proinflamatorias (Veale et al., 1993, Arthritis Rheum 36: 893-900; Danning et al., 2000, Arthritis Rheum 43: 1244-1256) . No obstante, frecuentemente están presentes neutrófilos en sinovitis en la artritis psoriásica y se ha notificado una regulación por incremento generalizada de la migración de neutrófilos y secreción de enzimas lisosomales en pacientes con artritis psoriásica (Biasi et al., 1998, Inflammation 22: 533-543; Mikulikova et al., 1984, Clin Rheumatol 3: 515-519; Sedgwick et al., 1980, J Invest Dermatol 74: 81-84) . Además, el crecimiento y la función vascular alteradas probablemente debido a una activación endotelial peculiar parecen desempeñar un papel principal en la sinovitis en la artritis psoriásica (Reece et al., 1999, Arthritis Rheum 42: 1481-1484; Fearon et al., 1999, Ann NY Acad Sci 878: 619-621) . Están presentes citocinas-Th1, monocinas y factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) en el sinovio en la artritis psoriásica y se ha sugerido que promueven la angiogénesis en lesiones cutáneas psoriásicas (Fraser et al., 1991, Arthritis-Rheum 44: 2024-2028; Lowe et al., 1995, Br J Dermatol 132: 497-505) . Sin embargo, la expresión sinovial de citocinas en la artritis psoriásica apenas se ha caracterizado. (Ritchlin et al., 1998, J Rheumatol 25: 15441552) .

La enfermedad de Kawasaki, por otro lado, es una enfermedad aguda asociada con fiebre y en la que se ven afectados múltiples órganos. Es de lejos la vasculitis sistémica más común en la infancia. Los niños y niñas menores de 1 año y los niños corren un riesgo especial de enfermedad mortal debido a anomalías de las arterias coronarias. Sin embargo, la etiología es en gran parte desconocida, aunque las pruebas apuntan a una enfermedad autoinmunitaria en la que se ven afectados neutrófilos y células endoteliales. La vasculitis, en particular la enfermedad de Kawasaki, es un proceso necrotizante que afecta predominantemente a arterias de tamaño pequeño y medio. La etiología y patogenia de la vasculitis, en particular de la enfermedad de Kawasaki, sigue estando poco clara. Puede caracterizarse de la mejor manera mediante una estimulación generalizada de respuestas inflamatorias, posiblemente debido a superantígenos. La identificación de un marcador fiable para el diagnóstico del estadio de la enfermedad y la identificación de pacientes con un riesgo aumentado de complicación cardiaca sería ventajosa para el tratamiento adecuado de los pacientes.

La fibrosis quística (FQ) es una enfermedad provocada por alteraciones genéticas, siendo la enfermedad letal heredada más común entre las personas... [Seguir leyendo]

1. Método para el diagnóstico de enfermedades inflamatorias seleccionadas de artritis reumatoide, artritis seronegativa, artritis juvenil y artritis reumatoide juvenil de comienzo sistémico (ARJS) , que comprende las etapas de a) determinar la cantidad y/o concentración de polipéptido de calgranulina C en una muestra de suero de un paciente; y

b) comparar la cantidad y/o concentración de polipéptido de calgranulina C determinada en dicha muestra de suero con la cantidad y/o concentración de polipéptido de calgranulina C determinada en una muestra control de suero,

en el que un aumento en la cantidad de polipéptido de calgranulina C en la muestra de suero en comparación con la muestra control es indicativo de dicha enfermedad.

2. Método según la reivindicación 1, en el que se usa un anticuerpo específico parar determinar la cantidad y/o concentración de polipéptido de calgranulina C.

3. Método según la reivindicación 2, en el que dicho anticuerpo específico reconoce un epítopo derivado de la secuencia de aminoácidos representada en SEQ ID NO: 2.

4. Método según las reivindicaciones 2 ó 3, en el que dicho anticuerpo se selecciona del grupo que comprende antisuero policlonal, anticuerpo policlonal, anticuerpo monoclonal, fragmentos de anticuerpo, anticuerpos de cadena sencilla y diacuerpos.

5. Método según las reivindicaciones 2 a 4, en el que dicho anticuerpo se usa para llevar a cabo un inmunoensayo tal como un ELISA o una técnica inmunohistoquímica.

6. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicha enfermedad es artritis juvenil, y comprendiendo además dicho método identificar el riesgo de recaída tras el primer tratamiento satisfactorio.

7. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicha enfermedad es artritis reumatoide juvenil de comienzo sistémico (ARJS) , y comprendiendo además dicho método una discriminación de la infección bacteriana.