DISPOSITIVO Y PROCEDIMIENTO DE LIMPIEZA DE UNA PLACA DE POCILLOS.

Dispositivo y procedimiento de limpieza de una placa de pocillos.

La invención describe un dispositivo para la limpieza de una placa de pocillos que se mantiene en todo momento boca abajo, comprendiendo una base (2) que tiene unos depósitos (3) de fluido de limpieza; y un soporte (4) dotado de unas agujas (6) diseñadas para lanzar a presión aire y/o dicho fluido de limpieza contra el interior invertido de los pocillos, ejerciendo un efecto de limpieza mucho mayor que los dispositivos actuales. La invención también se refiere a un procedimiento de limpieza utilizando el dispositivo anterior.

Dispositivo y procedimiento de limpieza de una placa de pocillos

OBJETO DE LA INVENCIÓN

La presente invención pertenece al campo de la biotecnología, y más concretamente al campo de los ensayos que se realizan empleando placas de pocillos.

Un primer objeto de la invención es un dispositivo diseñado para la limpieza de una placa de pocillos que se mantiene en todo momento boca abajo.

Un segundo objeto de la invención está dirigido a un procedimiento para limpiar una placa de pocillos empleando el dispositivo anterior.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La técnica ELISA (acrónimo del inglés Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, o Ensayo por Inmuno-Absorción Ligado a Enzimas) es una técnica de inmunoensayo en la cual un antígeno inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable como cambio de color o algún otro tipo; en ocasiones, con el fin de reducir los costos del ensayo, nos encontramos con que existe un anticuerpo primario que reconoce al antígeno y que a su vez es reconocido por un anticuerpo secundario que lleva enlazado la enzima anteriormente mencionada. La aparición de colorantes permite medir indirectamente mediante espectrofotometría el antígeno en la muestra.

Esta técnica se usa en muchos laboratorios para determinar si un anticuerpo particular está presente en la muestra de sangre de un paciente. Aunque el procedimiento es rutinario y sencillo, involucra a un gran número de variables, tales como selección de reactivo, temperatura, medición de volumen y tiempo, que si no se ajustan correctamente puede afectar a los pasos sucesivos y al resultado de la prueba.

Uno de los pasos que se repite varias veces al realizar la técnica ELISA es la limpieza de la placa de pocillos. Se trata de una operación importante, ya que si la limpieza no se realiza correctamente los resultados podrían quedar falseados debido a la presencia de restos de reactivo en los pocillos. De hecho, este no es un problema exclusivo de la técnica ELISA, ya que de modo general es necesario llevar a cabo una limpieza exhaustiva de cualquier placa que se va a utilizar por segunda vez.

Actualmente para limpiar los pocillos de una placa se deposita un volumen determinado liquido por gravedad en cada uno de los pocillos de una (o varias filas) . Posteriormente se aspira dicho líquido. Este proceso de vertido-aspiración se repite varias veces por cada fila. Después se pasa a la fila siguiente, y así sucesivamente. Se trata por tanto de alternar vertido de líquido y aspiración. Un inconveniente de este sistema es que frecuentemente se producen fenómenos de arrastre líquidos de pocillo a pocillo. También, a veces quedan restos de reactivos en los bordes superiores del pocillo debido el menisco que forma el líquido con la pared del pocillo.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

La siembra de placas en posición invertida es una novedosa técnica desarrollada por los inventores de la presente solicitud y descrita en la solicitud P201130501, que está dirigida a un dispositivo y procedimiento para aplicar un fluido a los pocillos de una placa manteniendo ésta en posición invertida, es decir, con los pocillos hacia abajo. Esta técnica aprovecha el efecto predominante de la tensión superficial en distancias pequeñas para que un líquido, por ejemplo un líquido con un reactivo, se adhiera a la superficie interior de un pocillo suficientemente pequeño estando esté en posición invertida. Una gran ventaja de este procedimiento es que se consigue llenar de líquido todos los pocillos de una forma mucho más rápida, limpia, uniforme y simultánea en toda la placa. Otra importante ventaja es que permite utilizar volúmenes de reactivo mucho menores, hasta 1000 veces, que aquellos utilizados empleando las técnicas tradicionales.

Los inventores de esta solicitud se han basado en parecidos principios para, de acuerdo con un primer aspecto de la invención, desarrollar un novedoso dispositivo que comprende medios para limpiar los pocillos de una placa manteniendo ésta en posición invertida. Este dispositivo viene a complementar al descrito en la solicitud anterior para permitir la realización de la técnica ELISA, u otras similares, manteniendo la placa en posición invertida tanto durante las operaciones de siembra o aplicación de reactivos como en las operaciones de limpieza.

Llevar a cabo la limpieza de los pocillos manteniendo éstos en posición invertida tiene la ventaja adicional de conseguir una limpieza más completa, ya que los restos adheridos al pocillo, así como el líquido de limpieza, ya no tienden a quedar estancados en el fondo del mismo como ocurría con los dispositivos de la técnica anterior. Por el contrario, al encontrarse el pocillo en posición invertida, la propia fuerza de la gravedad facilita que dichos restos tiendan a salir del pocillo Los medios de limpieza mencionados pueden en principio ser cualesquiera, siempre que permitan la limpieza del pocillo manteniendo éste en posición invertida en todo momento. Sin embargo, en una realización preferente de la invención dichos medios comprenden fundamentalmente una base y un soporte, sobre el cual se apoyará la placa en posición invertida durante las operaciones de limpieza. Tanto la base como el soporte están normalmente hechos de plástico, metacrilato, polipropileno u otro material similar. A continuación, se describe cada una de estas partes con mayor detalle.

a) Base La base constituye la pieza sobre la que se apoyará el soporte cuando el dispositivo está en funcionamiento y comprende al menos un depósito adecuado para alojar un fluido de lavado. El depósito normalmente consistirá en un pequeño agujero ciego en la superficie superior de la base, preferentemente con un volumen de entre 100 y 300 microlitros.

b) Soporte El soporte es una pieza algo más compleja que la anterior, estando formada fundamentalmente por una lámina inferior y una lámina superior dispuestas en paralelo:

- La lámina inferior es fundamentalmente una placa plana que está configurada para apoyarse sobre la base. En este contexto, esto significa que la lámina inferior tiene una forma de algún modo complementaria con la forma de la base, de tal modo que ambas “encajan” en su posición correcta. Por ejemplo, la parte superior de la base y la lámina inferior podrían comprender rebordes complementarios que facilitasen el posicionamiento correcto del soporte sobre la base, quedando así ambas "encajadas" una sobre la otra.

-La lámina inferior comprende además al menos una aguja que la atraviesa sustancialmente en perpendicular. En este contexto, el término “sustancialmente” hace referencia a que son posibles pequeñas desviaciones de la normal. Dicha al menos una aguja está situada de tal modo que, cuando el soporte se coloca en su posición correcta sobre la base, su extremo inferior queda introducido en el al menos un depósito de la base.

- La lámina superior comprende al menos un orificio de un tamaño correspondiente a un pocillo de la placa, y está situada en paralelo a la primera de modo que el extremo superior de la al menos una aguja sobresale a través de dicho orificio, quedando entre ambas un espacio adecuado para crear el vacío. En este documento, la expresión “adecuado para crear el vacío” quiere decir que dicho espacio entre las láminas superior e inferior estará cerrado de algún modo en los bordes del soporte y tendrá al menos una boca o conexión para acoplar una pequeña bomba de vacío o similar para crear el vacío.

- La lámina superior además está configurada para que la placa de pocillos en posición invertida se apoye sobre la misma, por ejemplo por medio de rebordes adecuados que faciliten el posicionamiento correcto de la placa de pocillos en posición invertida sobre la misma.

Así, el funcionamiento de este dispositivo es el siguiente. Se rellena el al menos un depósito de la base con un líquido de limpieza y, a continuación, se coloca el soporte sobre la base. Al llevar a cabo esta operación, el extremo inferior de la al menos una aguja del soporte queda introducido en el depósito, mientras que el extremo superior de la aguja sobresale ligeramente a través del al menos un orificio de la lámina superior. A continuación, se coloca la placa que se desea limpiar en posición invertida encima del soporte de tal modo que dicho extremo superior de la aguja queda dentro de un pocillo. Por último, se aplica vacío entre las láminas inferior y superior. Esto tiene el efecto, primero, de aspirar restos adheridos al pocillo; luego, de provocar el ascenso del líquido de limpieza a través de la aguja, proyectándose sobre el fondo del pocillo para arrastrar más...

1. Dispositivo (1) de limpieza de una placa (100) de pocillos (101) , caracterizado porque comprende medios para lavar el pocillo (101) manteniendo dicha placa (100) en posición invertida.

2. Dispositivo (1) de acuerdo con la reivindicación 1, donde dichos medios comprenden:

- una base (2) , que comprende al menos un depósito (3) adecuado para alojar un fluido de lavado; y

-un soporte (4) , que comprende

una lámina (5) inferior configurada para apoyarse sobre dicha base (2) y que comprende al menos una aguja (6) hueca que la atraviesa sustancialmente en perpendicular de tal modo que, cuando el soporte (4) está apoyado sobre la base (2) , su extremo inferior se introduce en el al menos un depósito (3) de la base (2) ; y

una lámina (7) superior que comprende al menos un orificio (8) de un tamaño correspondiente a un pocillo (101) de la placa (100) , y está situada en paralelo a la lámina (5) inferior de modo que el extremo superior de la al menos una aguja (6) sobresale a través de dicho orificio (8) , existiendo entre lámina (5) inferior y la lámina (7) superior un espacio adecuado para crear el vacío, y donde dicha lámina (7) superior está configurada para que la placa (100) de pocillos (101) en posición invertida se apoye sobre la misma.

3. Dispositivo (1) de acuerdo con la reivindicación 2, donde el al menos un depósito (3) tiene un volumen de entre 100 y 300 microlitros.

4. Dispositivo (1) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2-3, donde la distancia que sobresale el extremo superior de la al menos una aguja (6) por encima de la lámina (7) superior del soporte (4) es ligeramente menor que la profundidad de un pocillo (101) de una placa (100) .

5. Dispositivo (1) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2-4, donde la parte superior de la base

(2) y la lámina (5) inferior del soporte (4) comprenden rebordes complementarios para facilitar un posicionamiento correcto del soporte (4) sobre la base (2) .

6. Dispositivo (1) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2-5, donde la lámina (7) superior del soporte (4) comprende rebordes adecuados para facilitar un posicionamiento correcto de la placa (100) de pocillos (101) en posición invertida sobre el soporte (4) .

7. Dispositivo (1) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2-6, donde la superficie superior de la lámina (7) superior comprende un recubrimiento que facilita que el apoyo de la placa (100) invertida sobre dicha lámina superior (7) sea hermético.

8. Dispositivo (1) de acuerdo con la reivindicación 7, donde el recubrimiento comprende caucho, silicona, goma, fibra de vidrio o polímeros plásticos, o combinaciones de los mismos.

9. Dispositivo (1) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 7-8, donde el recubrimiento es desmontable.

10. Dispositivo (1) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2-9, que comprende una pluralidad de depósitos (3) , orificios (8) y agujas (6) formando una matriz cuyas posiciones son equivalentes a las de los pocillos (101) de una placa (100) .

11. Dispositivo (1) de acuerdo con la reivindicación 10, donde la matriz de depósitos (3) , orificios (8) y agujas (6) tiene 6, 12, 24, 48, 60, 72, 96 ó 384 posiciones.

12. Procedimiento de limpieza de una placa (100) de pocillos (101) , caracterizado porque se realiza manteniendo la placa (100) en posición invertida.

13. Procedimiento de limpieza de acuerdo con la reivindicación 12 que se lleva a cabo empleando el dispositivo (1) de cualquiera de las reivindicaciones 2-11, que comprende las siguientes operaciones:

- rellenar el al menos un depósito (3) con un líquido de limpieza;

- colocar el soporte (4) sobre la base (2) , de modo que el extremo inferior de la al menos una aguja (6) se introduzca dentro del al menos un depósito (3) ;

- colocar la placa (100) en posición invertida sobre la lámina (7) superior de modo que el extremo superior de la al menos una aguja (6) quede dentro de un pocillo (101) de la placa (100) invertida; y

- aplicar el vacío en el espacio entre la placa (5) inferior y la placa (7) superior del soporte (4) , lo cual provoca

primero la aspiración del contenido adherido al pocillo (101) ,

después el ascenso del líquido de limpieza a través de la aguja (6) que lava el pocillo (101) de arriba abajo,

por último, agotado el líquido de limpieza, una corriente de aire a través de la aguja (6) que arrastra posibles restos que puedan quedar y seca el pocillo (101) .