Anticuerpos neutralizantes del citomegalovirus humano y uso de los mismos.

Un anticuerpo aislado, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que es específico para una combinación de las proteínas del hCMV UL128, UL130 y UL131A, formando la combinación el epítopo reconocido por dicho anticuerpo o fragmento de unión, y que neutraliza la infección de células endoteliales, de células retinianas o de células dendríticas por el citomegalovirus humano

(hCMV),en el que el anticuerpo o el fragmento comprende las secuencias de la cadena pesada CDR1, CDR2 y CDR3 según se establecen en la SEQ ID NO: 1, en la SEQ ID NO: 2 y en la SEQ ID NO: 3 respectivamente, y comprende las secuencias de la cadena ligera CDR1, CDR2 y CDR3 según se establecen en la SEQ ID NO: 4, en la SEQ ID NO: 5 y en la SEQ ID NO: 6 respectivamente.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/IB2008/002683.

Solicitante: INSTITUTE FOR RESEARCH IN BIOMEDICINE.

Nacionalidad solicitante: Suiza.

Dirección: Via Vincenzo Vela 6 6500 Bellinzona SUIZA.

Inventor/es: LANZAVECCHIA,ANTONIO, MACAGNO,ANNALISA.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION G — FISICA > METROLOGIA; ENSAYOS > INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION... > Investigación o análisis de materiales por métodos... > G01N33/569 (para microorganismos, p. ej. protozoarios, bacterias, virus)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen antígenos... > A61K39/42 (virales)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales > C07K16/08 (contra materiales víricos)

PDF original: ES-2548014_T3.pdf

 

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Fragmento de la descripción:

Anticuerpos neutralizantes del citomegalovirus humano y uso de los mismos Campo técnico

La presente invención se refiere a anticuerpos que tienen una elevada potencia en la neutralización del citomegalovirus humano (hCMV) y que son específicos para una combinación de las proteínas del hCMV UL128, UL130 y UL131A. En el presente documento se describen linfocitos B inmortalizados que producen dichos anticuerpos monoclonales.

En el presente documento también se describe el epítopo determinado por una combinación de las proteínas del hCMV UL128, UL130 y UL131A a las que se unen los anticuerpos, así como el uso de los anticuerpos y del epítopo en métodos de cribado, de diagnóstico, de profilaxis y de terapia de una enfermedad.

Antecedentes de la técnica

El citomegalovirus humano (hCMV) es un patógeno ampliamente distribuido que puede provocar una patología grave en adultos inmunodeprimldos y tras la infección del feto, y que se ha relacionado con enfermedades crónicas tales como la aterosclerosis. El hCMV infecta múltiples tipos celulares que incluyen fibroblastos, células endoteliales, epiteliales y hematopoyéticas [1], Las cepas atenuadas propagadas in vitro del hCMV que están siendo desarrolladas como vacunas candidatas han perdido el tropismo por las células endoteliales, mientras que conservan la capacidad de infectar a los fibroblastos [2], Se cree que dos complejos glucoproteicos víricos controlan el tropismo celular del hCMV. Parece que es necesario un complejo de glucoproteínas tales como gH, gL y gO para la infección de los fibroblastos, mientras que un complejo de gH, gL y las proteínas codificadas por los genes UL131 - UL128 están implicados en la infección de las células endoteliales, de las células epiteliales y de las células dendríticas [2-8],

Ya se han comercializado globulinas hiperinmunes para la profilaxis de la enfermedad por el hCMV asociada al transplante, y pruebas recientes indican que tienen un efecto terapéutico en mujeres embarazadas [9], Esta metodología terapéutica está limitada por la baja cantidad de anticuerpos neutralizantes que pueden ser transferidos, y por esta razón sería altamente deseable la disponibilidad de anticuerpos humanos (tales como anticuerpos monoclonales humanos) con una elevada capacidad de neutralización.

Sin embargo, la diana de los anticuerpos neutralizantes del hCMV aún está por establecer. Aunque algunos anticuerpos contra la gH, la gB y los productos del gen UL128 y UL130 han mostrado una actividad de neutralización in vitro [7, 10, 11] y se ha evaluado un anticuerpo contra la gH en ensayos clínicos que fueron interrumpidos debido a la ausencia de efectos terapéuticos, la potencia de neutralización de los anticuerpos monoclonales aislados es hasta ahora modesta, dado que se observó una neutralización a unas concentraciones de anticuerpos que varían desde 0,5 hasta 20 microgramos/ml. Además, los métodos actuales miden normalmente la potencia de neutralización de los anticuerpos antl-hCMV mediante el uso de fibroblastos como células diana.

Sin embargo, también se sabe que el hCMV provoca enfermedades mediante la infección de otros tipos celulares tales como células endoteliales, epiteliales y leucocitos. Los anticuerpos conocidos contra la UL128 y la UL130 muestran una potencia muy baja en la neutralización de la Infección de las células endoteliales [7] y parece que no hay ningún anticuerpo monoclonal disponible que sea capaz de neutralizar la infección de células diana que no sean fibroblastos con una elevada potencia. Se han descrito anticuerpos contra un complejo proteico del CMV que comprende pUL128 o pUL130 [43], al Igual que anticuerpos que neutralizan el hCMV, incluyendo anticuerpos específicos para una combinación de la UL130 y la UL131A [44],

Existe por tanto una necesidad de anticuerpos que neutralizan la infección por el hCMV de células diana que no sean fibroblastos con una mayor potencia, asi como la elucidación de la (las) diana (s) al (las) que se une(n) dichos anticuerpos.

Sumario de la invención

La invención se basa, en parte, en el descubrimiento de nuevos anticuerpos que neutralizan el hCMV con una elevada potencia, así como de nuevos epítopos a los que se unen anticuerpos de la invención. Consecuentemente, en una forma de realización, la invención comprende un anticuerpo aislado, o un fragmento de unión al antlgeno del mismo, que es específico para una combinación de las proteínas del hCMV UL128, UL130 y UL131A, formando la combinación en epítopo reconocido por dicho anticuerpo o fragmento de unión, y que neutraliza la infección de las células endoteliales, de las células retinianas o de las células dendríticas por parte del citomegalovirus humano (hCMV), en el que el anticuerpo o el fragmento comprende las secuencias de la cadena pesada CDR1, CDR2 y CDR3 según se establece en la SEQ ID NO: 1, en la SEQ ID NO: 2 y en la SEQ ID NO: 3, respectivamente, y las secuencias de la cadena ligera CDR1, CDR2 y CDR3 según se establece en la SEQ ID NO: 4, en la SEQ ID NO: 5 y en la SEQ ID NO: 6, respectivamente.

En otra forma de realización la invención comprende una molécula de ácido nucleico que codifica para un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo de la invención.

En otra forma de realización más la invención comprende un vector que comprende una molécula de ácido nucleico que codifica para un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo de la invención.

En una forma de realización adicional la invención comprende una célula que comprende un vector que comprende una molécula de ácido nucleico de la invención.

En el presente documento también se describe un clon de linfocitos B Inmortalizados que expresan un anticuerpo que tiene una elevada potencia en la neutralización del hCMV, en el que dicho anticuerpo es especifico para una combinación de las proteínas del hCMV UL128, UL130 y UL131A.

En el presente documento también se describe un epftopo que se une a un anticuerpo de la Invención, un pollpéptido inmunógeno que comprende un epítopo que se une a un anticuerpo de la invención, y un ligando que se une a un epítopo que se une a un anticuerpo de la invención.

En el presente documento se describen métodos para la producción de anticuerpos con una elevada potencia en la neutralización del hCMV, en los que dicho anticuerpo es específico para una combinación de las proteínas del hCMV UL128, UL130 y UL131A. El método comprende (I) el cultivo de un clon de linfocitos B inmortalizados que expresan un anticuerpo de la invención y (ii) el aislamiento de los anticuerpos a partir de los linfocitos B.

En otra forma de realización la invención comprende una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo de la invención, y un diluyente o portador farmacéuticamente aceptable. También se describen composiciones farmacéuticas que comprenden un ácido nucleico de la invención, un clon de linfocitos B inmortalizados que expresan un anticuerpo de la Invención, o un polipéptido inmunógeno que comprende un epítopo que se une a un anticuerpo o a un fragmento de anticuerpo de la Invención.

En una forma de realización adicional la invención comprende el uso de un anticuerpo o de un fragmento, de un ácido nucleico, o de una célula o de una composición de la Invención, en la preparación de un medicamento para la prevención o el tratamiento de una infección por el hCMV; y un anticuerpo o un fragmento o la composición de la invención para su uso en la prevención o el tratamiento de una infección por el hCMV.

En el presente documento se describe un kit para el diagnóstico de una infección por el hCMV que comprende anticuerpos o fragmentos de anticuerpos de la invención, un ácido... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un anticuerpo aislado, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que es específico para una combinación de las proteínas del hCMV UL128, UL130 y UL131A, formando la combinación el epítopo reconocido por dicho anticuerpo o fragmento de unión, y que neutraliza la infección de células endoteliales, de células retinianas o de células dendríticas por el citomegalovirus humano (hCMV),en el que el anticuerpo o el fragmento comprende las secuencias de la cadena pesada CDR1, CDR2 y CDR3 según se establecen en la SEQ ID NO: 1, en la SEQ ID NO: 2 y en la SEQ ID NO: 3 respectivamente, y comprende las secuencias de la cadena ligera CDR1, CDR2 y CDR3 según se establecen en la SEQ ID NO: 4, en la SEQ ID NO: 5 y en la SEQ ID NO: 6 respectivamente.

2. El anticuerpo o el fragmento de la reivindicación 1, que comprende las regiones variables de la cadena pesada y ligera según se establecen en la SEQ ID NO: 7 y en la SEQ ID NO: 8 respectivamente.

3. El anticuerpo o el fragmento de la reivindicación 1 o 2, que se une al epítopo conformaclonal formado por las tres proteínas UL128, UL130 y UL131A.

4. El anticuerpo o el fragmento segúncualqulera de las reivindicaciones 1 - 3, en el que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo monoclonal humano, un anticuerpo de cadena única, Fab, Fab, F(ab)2, Fv o scFv.

5. Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica para el anticuerpo o el fragmento segúncualqulera de las reivindicaciones precedentes.

6. La molécula de ácido nucleico de la reivindicación 5 que comprende la secuencia de nucleótidos de una cualquiera de las SEQ ID NO: 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16, o una secuencia de nucleótidos que codifica para la misma secuencia de aminoácidos que la secuencia de nucleótidos segúncualquiera de las SEQ ID NO: 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16.

7. Un vector de expresión que comprende una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 5 o 6.

8. Una célula transformada con el vector de acuerdo con la reivindicación 7.

9. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo o el fragmento según cualquiera de las reivindicaciones 1 - 4 y un diluyente o portador farmacéuticamente aceptable.

10. La composición de la reivindicación 9 que comprende adicionalmente un segundo anticuerpo contra el hCMV, o un fragmento de unión al antígeno del mismo.

11. La composición de la reivindicación 9 que comprende adicionalmente

(a) un segundo anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que se une a una proteína del hCMV elegida de entre la gB, la gH, la gL, la gM, la gN, la gO, la UL128, la UL130 y la UL131A, o una combinación de las mismas; o

(b) un segundo anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que se une a la proteína gB del hCMV.

12. Uso del anticuerpo o del fragmento según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, del ácido nucleico de la reivindicación 5 o 6, o de la célula de la reivindicación 8, o de la composición según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, en la preparación de un medicamento para la prevención o el tratamiento de una Infección por el hCMV.

13. El anticuerpo o el fragmento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 4 o la composición de cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, para su uso en la prevención o el tratamiento de una infección por el hCMV.

14. Una composición que comprende un anticuerpo o un fragmento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para su uso en la prevención o el tratamiento de una infección por el hCMV, en la que la composición comprende adicionalmente un segundo anticuerpo elegido de entre:

(a) un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno del mismo contra el hCMV;

(b) un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno del mismo que se une a una proteína del hCMV elegida de entre la gB, la gH, la gL, la gM, la gN, la gO, la UL128, la UL130 y la UL131A, o una combinación de las mismas;

y

(c) un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno del mismo que se une a la proteína gB del hCMV.

15. Un método para la producción del anticuerpo o del fragmento según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, que comprende (i) el cultivo de la célula de la reivindicación 8 y (ii) el aislamiento del anticuerpo o del fragmento.