Agentes terapéuticos de base aptámeros útiles en el tratamiento de trastornos relacionados con complemento.

Conjugado de aptámero/PEG o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo que tiene la secuencia de aptámero de:**Fórmula**

en el que fC y fU ≥ 2'-flúor nucleótidos, y mG y mA ≥ 2'-OMe nucleótidos y todos los demás nucleótidos son 2'-OH y 3T indica una desoxitimidina invertida,

en el que el extremo 5' de la secuencia de aptámero está conjugado a un resto de polietilenglicol

(PEG) lineal de 40 kDa mediante un enlazador.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E13150168.

Solicitante: Archemix LLC.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 601 Montgomery Street, Suite 2020 San Francisco, CA 94111 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: WILSON, CHARLES, KURZ,MARKUS, DIENER,John, EPSTEIN,David, BENEDICT,CLAUDE, GRATE,DILARA, KEENE,SARA CHESWORTH, KURZ,JEFFREY, MCCAULEY,THOMAS GREEN, ROTTMAN,JAMES, THOMPSON,KRISTIN, ZOLTOSKI,ANNA J.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS... > Procesos de medida, investigación o análisis en... > C12Q1/68 (en los que intervienen ácidos nucleicos)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen ingredientes... > A61K31/7088 (Compuestos que tienen al menos tres nucleósidos o nucleótidos)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/115 (Aptámeros, p.ej. ácidos nucleicos que unen una molécula diana específicamente y con alta afinidad sin hibridar entre ellos)

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Fragmento de la descripción:

Agentes terapéuticos de base aptámeros útiles en el tratamiento de trastornos relacionados con complemento 5 CAMPO DE LA INVENCIÓN

[0001] La invención se refiere generalmente al campo de los ácidos nucleicos y más particularmente a aptámeros que pueden unirse a la proteína C5 del sistema de complemento, útiles como agentes terapéuticos y de diagnóstico en trastornos cardiacos, inflamatorios y autoinmunes relacionados con el complemento, lesión por reperfusión

isquémica y/o otras enfermedades o trastornos en los que está implicada la activación del complemento mediada por C5. La invención se refiere además a materiales y a procedimientos para la administración de aptámeros que pueden unirse a la proteína del sistema del complemento C5.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

[0002] Los aptámeros son moléculas de ácido nucleico que tienen afinidad de unión específica a moléculas a través de interacciones distintas del apareamiento de bases de Watson-Crick clásico.

[0003] Los aptámeros, al igual que los péptidos generados por expresión en fago o anticuerpos monoclonales 20 ("mAbs"), pueden unirse específicamente a dianas seleccionadas y modular la actividad de la diana, por ejemplo,

mediante la unión de aptámeros puede bloquearse el funcionamiento de la capacidad de su diana. Descubiertos por un procedimiento de selección in vitro de conjuntos de oligonucleótidos de secuencias al azar, se han generado aptámeros para más de 100 proteínas que incluyen factores de crecimiento, factores de transcripción, enzimas, inmunoglobulinas y receptores. Un aptámero típico tiene 10-15 kDa de tamaño (30-45 nucleótidos), se une a su 25 diana con afinidad subnanomolar y discrimina a dianas estrechamente relacionadas (por ejemplo, los aptámeros no se unirán normalmente a otras proteínas de la misma familia de genes). Una serie de estudios estructurales ha mostrado que los aptámeros pueden usar los mismos tipos de interacciones de unión (por ejemplo, enlaces de hidrógeno, complementariedades electrostáticas, contactos hidrófobos, exclusión estérica) que accionan la afinidad y la especificidad en inmunocomplejos.

[0004] Los aptámeros tienen varias características deseables para su uso como agentes terapéuticos y de diagnóstico que incluyen alta especificidad y afinidad, eficacia biológica y excelentes propiedades farmacocinéticas. Además, ofrecen ventajas competitivas específicas con respecto a anticuerpos y otros agentes biológicos proteicos,

por ejemplo:

11 Velocidad v control. Los aptámeros se producen por un procedimiento completamente in vitro que permite la rápida generación de cabezas de serie iniciales, que incluyen cabezas de serie terapéuticas. La selección in vitro permite que la especificidad y la afinidad del aptámero se controle exhaustivamente y permite la generación de cabezas de serie, incluyendo cabezas de serie contra dianas tanto tóxicas como no inmunogénicas.

21 Toxicidad e inmunoaenicidad. Los aptámeros como clase han demostrado poca o ninguna toxicidad o 40 inmunogenicidad. En una dosificación crónica de ratas o marmotas con altos niveles de aptámero (10 mg/kg al día durante 90 días) no se observó ninguna toxicidad por ninguna medida clínica, cellar o bioquímica. Mientras que la eficacia de muchos anticuerpos monoclonales puede estar gravemente limitada por la respuesta inmunitaria a los propios anticuerpos, es extremadamente difícil provocar anticuerpos dirigidos contra aptámeros, lo más probablemente debido a que los aptámeros no pueden presentarse por linfocitos T mediante el MHC y la respuesta 45 inmunitaria está generalmente entrenada para no reconocer fragmentos de ácido nucleico.

31 Administración. Mientras que la mayoría de los agentes terapéuticos de anticuerpos actualmente aprobados se administran por infusión intravenosa (normalmente durante 2-4 horas), los aptámeros pueden administrarse por inyección subcutánea (la biodisponibilidad del aptámero por administración subcutánea es >80% en estudios en mono (Tucker y col., J. Chromatography B. 732: 203-212, 1999)). Con buena solubilidad (>150 mg/ml) y peso 50 molecular comparativamente bajo (aptámero: 10-50 kDa; anticuerpo: 150 kDa), una dosis semanal de aptámero puede administrarse por inyección en un volumen inferior a 0,5 mi. Además, el pequeño tamaño de los aptámeros permite que penetren en el área de limitaciones conformacionales que no permite que penetren anticuerpos o fragmentos de anticuerpos, que presenta todavía otra ventaja de los agentes terapéuticos basados en aptámeros o profilaxis.

41 Escalabilidad v coste. Los aptámeros terapéuticos se sintetizan químicamente y por consiguiente pueden escalarse fácilmente según se necesite para cumplir la demanda de producción. Mientras que las dificultades en el escalado de la producción están limitando actualmente la disponibilidad de algunos agentes biológicos y el coste de capital de una planta de producción de proteínas a gran escala es enorme, un único sintetizador de oligonucleótidos a gran escala puede producir más de 100 kg/año y requiere una inversión inicial relativamente modesta. El coste 60 actual de los artículos para la síntesis de aptámeros a la escala de kilogramo se estima en 500 $/g, comparable al de anticuerpos altamente optimizados. Se esperan mejoras continuas en el desarrollo de procedimientos para reducir el coste de los artículos a <100 $/g en cinco años.

51 Estabilidad. Los aptámeros terapéuticos son químicamente consistentes. Están intrínsecamente adaptados para recuperar la actividad tras la exposición a factores tales como calor y desnaturalizantes y pueden almacenarse 65 durante periodos prolongados (>1 año) a temperatura ambiente como polvos lloflllzados.

El Sistema del Complemento

[0005] El sistema del complemento comprende un conjunto de al menos 20 proteínas del plasma y de membrana, que actúan juntas en un sistema de cascada regulado para atacar las formas extracelulares de los patógenos (por

ejemplo, bacterias). El sistema del complemento incluye dos cascadas de activación enzimática distintas, las vías clásica y alternativa (figura 1), y una vía no enzimática conocida como la vía de ataque a membrana.

[0006] La primera cascada activada enzimáticamente, conocida como la vía clásica, comprende varios componentes, C1, C4, C2, C3 y C5 (enumerados por orden en la vía). El inicio de la vía clásica del sistema del

complemento ocurre después de la unión y la activación del primer componente del complemento (C1) tanto mediante los activadores inmunes como los no inmunes. C1 comprende un complejo dependiente del calcio de los componentes C1q, C1r y C1s, y se activa a través de la unión del componente Clq. C1q contiene seis subunidades Idénticas, y cada subunidad comprende tres cadenas (las cadenas A, B y C). Cada cadena tiene una región superior globular, que está conectada a una cola similar al colágeno. La unión y activación de C1q por los inmunocomplejos 15 tiene lugar a través de la región del grupo superior de C1q. Numerosos activadores de C1q que no son de anticuerpo, incluyendo proteínas, lípidos y ácidos nucleicos, se unen a y activan C1q a través de un sitio distinto en la reglón del tallo similar al colágeno. Después, el complejo C1qrs cataliza la activación de los componentes del complemento C4 y C2, formando el complejo C4bC2a, que funciona como una convertasa de C3.

[0007] La segunda cascada activada enzimáticamente, conocida como la vía alternativa, es una ruta rápida, Independiente del anticuerpo para la activación y amplificación del sistema del complemento. La vía alternativa comprende varios componentes, C3, Factor B y Factor D (enumerado por orden en la vía). La... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Conjugado de aptámero/PEG o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo que tiene la secuencia de aptámero de:

fCmGfCfCGfCmGmGfUfCfUfCmAmGmGfCGfCfUmGmAmGfUfCfUmGmAmGfUfU fUAfCfCfUmGfCmG-3T (SEQ ID NO: 4),

en el que fC y fU = 2-flúor nucleótidos, y mG y mA = 2'-OMe nucleótidos y todos los demás nucleótldos son 2'-OH y 3T Indica una desoxltlmldlna Invertida,

en el que el extremo 5 de la secuencia de aptámero está conjugado a un resto de polietilenglicol (PEG) lineal de 40 15 kDa mediante un enlazador.

2. Conjugado de aptámero/PEG o una sal, según la reivindicación 1, en el que el extremo 5 de la secuencia de

aptámero tienen un enlazador en 5 tal como se indica a continuación: H2N--------5 Aptámero 3, en el que--------

indica el enlazador, y en el que el aptámero modificado con amina está conjugado al resto de polietilenglicol (PEG)

lineal de 40 kDa mediante un enlazador.

3. Conjugado de aptámero/PEG o una sal, según la reivindicación 1 ó 2, en el que el enlazador es un enlazador alquilo que comprende 6 grupos CH2 consecutivos, un enlazador alquilo que comprende entre 2 y 18 grupos CH2 consecutivos, un enlazador alquilo que comprende entre 2 y 12 grupos CH2 consecutivos, o un enlazador alquilo que

comprende entre 3 y 6 grupos CH2 consecutivos.

4. Composición que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del conjugado de aptámero/PEG, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o una sal del mismo, y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.

5. Uso del conjugado de aptámero/PEG o sal, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento, prevención o mejora de una enfermedad mediada por la proteína del complemento C5, C5a y/o C5b-9 en un mamífero.

6. Conjugado de aptámero/PEG o sal, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para su uso en un procedimiento para el tratamiento, prevención o mejora de una enfermedad mediada por la proteína del complemento C5, C5a y/o C5b-9 en un mamífero.

7. Uso, según la reivindicación 5, o el conjugado de aptámero/PEG o sal para su uso en un procedimiento para el 40 tratamiento, prevención o mejora de una enfermedad mediada por la proteína del complemento C5, C5a y/o C5b-9

en un mamífero, según la reivindicación 6, en el que el mamífero es un ser humano.

8. Uso, según la reivindicación 5, o el conjugado de aptámero/PEG o sal para su uso en un procedimiento para el tratamiento, prevención o mejora de una enfermedad mediada por la proteína del complemento C5, C5a y/o C5b-9

en un mamífero, según la reivindicación 6, en el que la enfermedad es una enfermedad isquémica aguda, una enfermedad inflamatoria aguda, o una enfermedad inflamatoria crónica o mediada por el sistema inmunitario.

9. Uso, según la reivindicación 5, o el conjugado de aptámero/PEG o sal para su uso en un procedimiento para el tratamiento, prevención o mejora de una enfermedad mediada por la proteína del complemento C5, C5a y/o C5b-9

en un mamífero, según la reivindicación 6, en el que la enfermedad es infarto de miocardio, ictus, lesión por isquemia/reperfusión, enfermedad infecciosa, septicemia, shock, rechazo de trasplante agudo, rechazo de trasplante hiperagudo, alergia, asma, artritis reumatoide u otra enfermedad reumatológica, esclerosis múltiple u otra enfermedad neurológica, soriasis u otra enfermedad dermatológica, miastenia gravis, lupus eritematoso sistémico (LES), rechazo de trasplante subagudo, rechazo de trasplante crónico, o glomerulonefritis u otra enfermedad renal.

10. Uso, según la reivindicación 5, o el conjugado de aptámero/PEG o sal para su uso en un procedimiento para el tratamiento, prevención o mejora de una enfermedad mediada por la proteína del complemento C5, C5a y/o C5b-9 en un mamífero, según la reivindicación 6, en el que la enfermedad es una lesión de miocardio relacionada con cirugía de revascularizadón coronaria (CABG), lesión de miocardio relacionada con angioplastia de globo, o lesión

de miocardio relacionada con restenosis.

11. Uso, según la reivindicación 5, o el conjugado de aptámero/PEG o sal para su uso en un procedimiento para el tratamiento, prevención o mejora de una enfermedad mediada por la proteína del complemento C5, C5a y/o C5b-9 en un mamífero, según la reivindicación 6, en el que la enfermedad que se va a tratar es una complicación mediada

por la proteína del complemento C5, C5a y/o C5b-9 relacionada con una cirugía CABG.

12. Uso, según la reivindicación 5, o el conjugado de aptámero/PEG o sal para su uso en un procedimiento para el tratamiento, prevención o mejora de una enfermedad mediada por la proteína del complemento C5, C5a y/o C5b-9 en un mamífero, según la reivindicación 6, en el que el conjugado de aptámero/PEG se administra peri- operativamente.

13. Uso, según la reivindicación 5, o el conjugado de aptámero/PEG o sal para su uso en un procedimiento para el tratamiento, prevención o mejora de una enfermedad mediada por la proteína del complemento C5, C5a y/o C5b-9 en un mamífero, según la reivindicación 6, en el que el conjugado de aptámero/PEG se administra por vía

intravenosa.

14. Procedimiento de diagnóstico in vitro que comprende poner en contacto el conjugado de aptámero/PEG o sal, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, con una composición que se sospecha que comprende la proteína del complemento C5, o una variante de la misma, y detectar la presencia o ausencia de la proteína del complemento C5, o una variante de la misma.

15. Procedimiento de diagnóstico, según la reivindicación 14, en el que la proteína del complemento C5, o variante de la misma, es una proteína del complemento C5 humana, o una variante de la misma.

16. Conjugado de aptámero/PEG o sal, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para su uso en 20 diagnóstico in vitro.

17. Conjugado de aptámero/PEG o sal, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para su uso en diagnóstico in vivo.

18. Conjugado de aptámero/PEG o sal, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para su uso en el tratamiento, prevención o mejora de una enfermedad in vivo.