Métodos y composiciones que comprenden construcciones supramoleculares.

Un anticuerpo sensible a la conformación, obtenible mediante una construcción antigénica que comprende un péptido antigénico que tiene la secuencia de aminoácidos de β

amiloide, seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 y SEQ ID NO: 5, o un fragmento activo del mismo, en donde el péptido antigénico o fragmento activo del mismo está modificado para tener un polietilenglicol unido de forma covalente, uno en cada uno de los extremos, y reconstituido en un liposoma, anticuerpo que tiene especificidad de unión para el péptido antigénico y

(a) muestra una sensibilidad conformacional y una afinidad por el antígeno que está potenciada en comparación con un anticuerpo producido por el péptido antigénico palmitoilado; y

(b) induce una transición de lámina β a hélice α de péptido amiloide.

Métodos y composiciones que comprenden construcciones supramoleculares

La presente invención se refiere a anticuerpos sensibles a la conformación y a métodos para producirlos.

El sistema ¡nmunitario es un sistema de respuestas complejo del cuerpo que implica muchos tipos diferentes de células que tienen diferentes actividades. La activación de una parte del sistema inmunltarlo normalmente produce una variedad de respuestas debido a la activación no deseada de otras partes relacionadas del sistema. Actualmente no hay métodos o composiciones satisfactorios para producir una respuesta especifica deseada dirigiéndose a los componentes específicos del sistema ¡nmunitario.

El sistema ¡nmunitario es un sistema interactivo complejo del cuerpo que implica una amplia variedad de componentes incluyendo células y factores celulares, que interaccionan con estímulos tanto del interior del cuerpo como del exterior del cuerpo. Aparte de su acción directa, en la respuesta del sistema ¡nmunitario también influyen otros sistemas del cuerpo incluyendo los sistemas nervioso, respiratorio, circulatorio y digestivo.

Uno de los aspectos mejor conocidos del sistema ¡nmunitario es su capacidad para responder a antlgenos extraños presentados por organismos invasores, cambios celulares en el cuerpo o en la vacunación. Algunos de los primeros tipos de células que responden a dicha activación del sistema ¡nmunitario son fagocitos y células asesinas naturales. Los fagocitos incluyen entre otras células, monocitos, macrófagos y neutrófilos polimorfonucleares. Estas células en general se unen al antígeno extraño, lo internalizan y con frecuencia lo destruyen. También producen moléculas solubles que median otras respuestas inmunitarias, tales como respuestas inflamatorias. Las células asesinas naturales pueden reconocer y destruir determinadas células tumorales y embrionarias infectadas por virus. Otros factores de la respuesta inmunitaria incluyen rutas complementarias, que son capaces de responder independientemente a antlgenos extraños o actuar conjuntamente con células o anticuerpos.

En general, se cree que la respuesta a los antlgenos implica tanto respuestas humorales como celulares. Las respuestas inmunitarias humorales son mediadas por factores no celulares que son liberados por las células y se pueden encontrar libres o no en el plasma o fluidos intracelulares. Un componente mayoritario de una respuesta humoral del sistema ¡nmunitario es mediado por anticuerpos producidos por linfocitos B. Las respuestas inmunitarias mediadas por células resultan de las interacciones de células, incluyendo células presentadoras de antígeno y linfocitos B (células B) y linfocitos T (células T).

Uno de los aspectos más ampliamente usados de las capacidades de las respuestas inmunitarias es la producción de anticuerpos monoclonales. La llegada de la tecnología de anticuerpos monoclonales (Mab) a mediados de 1970 proporcionó una nueva herramienta terapéutica y de diagnóstico valiosa. Por primera vez, los investigadores y médicos tenían acceso a cantidades ilimitadas de anticuerpos uniformes capaces de unirse a un sitio antigénico predeterminado y que tenían diferentes funciones inmunológicas efectoras. Actualmente, las técnicas de producción de anticuerpos monoclonales son bien conocidas en la técnica. Sin embargo, sigue habiendo una necesidad continua de anticuerpos especializados. Básicamente, lo que se desea es la capacidad de producir anticuerpos a medida. La necesidad es especialmente grande en el campo de combatir una enfermedad infecciosa en la que los patógenos han adquirido resistencia a los antibióticos usados normalmente. Además, son necesarios antibióticos para dirigirse a afecciones patológicas que resultan de una causa distinta de un agente infeccioso.

La enfermedad de Alzhelmer (EA) es un trastorno neurológico que se cree que es causado principalmente por la formación de placas amiloides causadas por el depósito anormal de proteínas en el cerebro. Las pruebas científicas demuestran que la EA resulta de un aumento en la producción o acumulación de protelna beta-amiloide en placas, que conduce a la muerte de las células nerviosas. La pérdida de células nerviosas en zonas estratégicas del cerebro produce, a su vez, la reducción de neurotransmisores y un deterioro de la memoria. Las proteínas responsables principalmente de la formación de placa incluyen la proteína precursora de amiloide (APP) y dos presenilinas (presenilina I y presenilina II). La degradación de las APP probablemente aumenta su propensión a agregarse en placas. Son necesarios anticuerpos específicos que puedan dirigirse y difundirse a la formación de placa amiloide.

El documento US 2003/108551 A1 (Nicolau et al., 2003) describe anticuerpos dirigidos contra tetrapalmitoil-tetrakis- lisina Ap1-16. En los Ejemplos se demuestra que uno de los anticuerpos, R7CN, disgrega fibras formadas por Api- 42.

Los síntomas de la EA se manifiestan lentamente y el primer síntoma puede ser solo una falta de memoria leve. En esta etapa, los individuos pueden olvidar sucesos recientes, actividades, los nombres de personas o cosas familiares y pueden no ser capaces de resolver problemas matemáticos sencillos. A medida que la enfermedad avanza, los síntomas se notan más fácilmente y se convierten en suficientemente graves para hacer que las personas con EA o sus familiares busquen ayuda médica. Los síntomas de la etapa media de la EA incluyen olvidar cómo se hacen tareas sencillas tales como asearse, y se desarrollan problemas con el habla, comprensión, lectura o escritura. Los pacientes con EA en la etapa final pueden convertirse en ansiosos o agresivos, deambular alejándose de casa y finalmente necesitan un cuidado completo.

Actualmente, la única forma definitiva de diagnosticar la EA es identificar placas y marañas en el tejido cerebral en

una autopsia después de la muerte del individuo. Por lo tanto, los médicos solo pueden hacer un diagnóstico de EA "posible" o "probable" mientras la persona todavía está viva. Usando métodos habituales, los médicos pueden diagnosticar correctamente la EA hasta 90 por ciento de las veces usando varias herramientas para diagnosticar la EA "probable". Los médicos hacen preguntas sobre la salud general de la persona, los problemas médicos anteriores y cualquier dificultad que tenga la persona para llevar a cabo actividades cotidianas. Las pruebas de comportamiento de la memoria, resolución de problemas, de atención, de contar y lenguaje, proporcionan información sobre la degeneración cognitiva, y las pruebas médicas como análisis de sangre, orina o líquido cefalorraquídeo, y barridos cerebrales pueden proporcionar alguna información adicional.

El tratamiento de la EA consiste en tratamientos basados en medicamentos y no basados en medicamentos. Los tratamientos dirigidos a cambiar el curso subyacente de la enfermedad (retrasar o invertir el avance) hasta ahora han sido en gran medida insatisfactorios. Se ha mostrado que los medicamentos que restablecen la deficiencia (defecto) o el mal funcionamiento, en los mensajeros químicos de las células nerviosas (neurotransmisores), tales como los inhibidores de la colinesterasa (ChEl) mejoran los síntomas. También hay medicamentos disponibles que se dirigen a las manifestaciones psiquiátricas de la EA.

Los inhibidores de la colinesterasa, tales como la tacrina y rivastigmina, actualmente son la única clase de agentes que están aprobados por la FDA para el tratamiento de la EA. Estos agentes son medicamentos que restablecen el defecto, o el mal funcionamiento, en la neurotransmisión química del cerebro. Los ChEl impiden la degradación enzimática de neurotransmisores aumentando asi la cantidad de mensajeros químicos disponibles para transmitir las

señales nerviosas en el cerebro.

Para algunas personas en las etapas temprana y media de la enfermedad, los fármacos tacrina (COGNEX®, Morris Plains. NJ), donepezll (ARICEPT®, Tokvo. JPL rivastigmina (EXELON®, East Hanover, NJ), o galantamina (REMINYL®, New Brunswick. NJ) pueden ayudar a prevenir que empeoren algunos síntomas durante un tiempo limitado. Otro fármaco, la memantina (NAMENDA®, Nueva York. NYL se ha aprobado para el tratamiento de la EA de moderada a grave. Además, algunos medicamentos pueden ayudar a controlar los síntomas de comportamiento de la EA tales como el insomnio, agitación, vagabundeo, ansiedad y depresión. El tratar estos síntomas con frecuencia hace que los pacientes estén más cómodos y hace que su cuidado sea más fácil para los cuidadores. Desgraciadamente, a pesar de los significativos avances de los tratamientos que muestran que esta clase de agentes son sistemáticamente mejores que el placebo, la enfermedad... [Seguir leyendo]

1.- Un anticuerpo sensible a la conformación, obtenible mediante una construcción antigénica que comprende un péptido antigénico que tiene la secuencia de aminoácidos de (3 amiloide, seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 y SEQ ID NO: 5, o un fragmento activo del mismo, en donde el péptido antigénico o fragmento activo del mismo está modificado para tener un polietilenglicol unido de forma covalente, uno en cada uno de los extremos, y reconstituido en un liposoma, anticuerpo que tiene especificidad de unión para el péptido antigénico y

(a) muestra una sensibilidad conformacional y una afinidad por el antígeno que está potenciada en comparación con un anticuerpo producido por el péptido antigénico palmitoilado; y

(b) induce una transición de lámina (3 a hélice a de péptido amiloide.

2. El anticuerpo de la reivindicación 1, en donde dicho anticuerpo es del isotipo lgG1.

3. El anticuerpo de la reivindicación 1, que, tras incubación con fibras amiloides, conduce a fibras con un tamaño de < 800 nm en un 40-60% de todas las fibras presentes.

4. El anticuerpo de la reivindicación 1, producido por una construcción de antígeno que comprende un péptido antigénico que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 1 modificada para que contenga una Usina unida covalentemente a cada uno de los extremos de la secuencia amiloide FRHDSGY y un polietilenglicol (PEG) unido covalentemente a lisina en un extremo y a dioleil-fosfatidil colina etanolamina en el otro extremo de la molécula de PEG, anticuerpo que

(a) solubiliza de manera eficaz fibras de A(3i_4o y A(3i.42; y

(b) protege ¡n vitro células PC12 frente a la apoptosis y la inhibición metabólica inducida por fibras de A(3i.4o y A(3i-42.

5. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicho anticuerpo es un anticuerpo policlonal o un anticuerpo monoclonal.

6. El anticuerpo de la reivindicación 4, que, tras la administración a un animal o paciente humano, conduce a niveles significativos de restablecimiento de la memoria y a un despertar de la curiosidad sin inducir una hemorragia en el cerebro del animal o paciente humano inmunizado.

7. El anticuerpo de la reivindicación 1, que se une a oligómeros A(3i_4o solubles.

8. Uso de un epítopo seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4, o un fragmento del mismo, embebido en una construcción antigénica que comprende un péptido antigénico o fragmento activo del mismo, modificado para tener un polietilenglicol unido de forma covalente, uno en cada uno de los extremos, y reconstituido en un liposoma, para la generación de un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7.

9. El anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, para la Inmunización pasiva de individuos frente a enfermedades y trastornos neurológicos.

10. El anticuerpo de la reivindicación 9, en donde dicha enfermedad o trastorno es la enfermedad de Alzheimer.

11. Un método para producir un anticuerpo sensible a la conformación para la inmunización pasiva de individuos frente a enfermedades y trastornos neurológicos, método que comprende reconstituir una construcción antigénica en liposomas, en donde la construcción antigénica comprende un péptido que tiene la secuencia de aminoácidos de (3 amiloide o un fragmento activo de la misma, seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 y SEQ ID NO: 5, o un fragmento de la misma, en donde el péptido antigénico o fragmento activo del mismo está modificado para tener un polietilenglicol unido de forma covalente, uno en cada uno de los extremos, y proporcionar un anticuerpo dirigido contra la construcción antigénica.

12. El método de la reivindicación 11, en el que la enfermedad neurológica es la enfermedad de Alzheimer.