Amplificación selectiva de amplicones solapados.
Un método para amplificar de forma selectiva fragmentos de ácido nucleico que tienen una región solapada,
que comprende las etapas de:
a) obtener una primera secuencia de ácido nucleico que comprende una primera etiqueta (t2) y un primer cebador directo (F1) complementario a un primer fragmento de ácido nucleico diana, donde t2 está en posición extremo 5' respecto a F1;
b) obtener una segunda secuencia de ácido nucleico que comprende una segunda etiqueta (t1) y un primer cebador inverso (R1) complementario al primer fragmento de ácido nucleico diana, donde t1 está en posición extremo 5' respecto a R1;
c) obtener una tercera secuencia de ácido nucleico que comprende la segunda etiqueta (t1) y un segundo cebador directo (F2) complementario a un segundo fragmento de ácido nucleico, donde t1 está en posición extremo 5' respecto a F2;
d) obtener una cuarta secuencia de ácido nucleico que comprende una tercera etiqueta (t3), y un segundo cebador inverso (R2) complementario al segundo fragmento de ácido nucleico, donde t3 está en posición extremo 5' respecto a R2, en donde el primer y el segundo fragmento de ácido nucleico diana tienen una región solapada;
e) mezclar el primer y el segundo fragmento de ácido nucleico diana, la primera, la segunda, la tercera y la cuarta secuencia de ácido nucleico, y una cantidad efectiva de reactivos necesaria para llevar a cabo una reacción en cadena de polimerasa (PCR);
f) someter la mezcla de (e) a ciclos de etapas de desnaturalización, maduración y extensión de cebador de PCR durante al menos dos veces; y
g) someter la mezcla de (f) a ciclos de etapas de desnaturalización, maduración y extensión de cebador de PCR a una temperatura de maduración superior a la de la etapa (f) para obtener productos de amplificación.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2016/020284.
Solicitante: Pillar Biosciences Inc.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 12 Michigan Drive Natick, Massachusetts 01760 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: SONG,GANG, WANG,ZHAOHUI.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/686 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › Reacción en Cadena de la Polimerasa [PCR].
PDF original: ES-2718765_T3.pdf
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