Producción de proteínas recombinantes utilizando métodos de selección no antibióticos y la incorporación de aminoácidos no naturales en las mismas.

Un método para producir un polipéptido recombinante de interés que comprende:

a) obtener una población de células auxotróficas para un primer metabolito y un segundo metabolito, en el que dicho segundo metabolito es un aminoácido natural;

b) introducir en células de dicha población una primera construcción de ácido nucleico que comprende un marcador de selección auxotrófica, en el que dicho marcador de selección auxotrófica comprende una primera secuencia de ácido nucleico que codifica al menos un polipéptido activo en la biosíntesis de dicho primer metabolito, y en el que la expresión de dicho marcador de selección auxotrófica restablece la prototrofia para el primer metabolito;

c) introducir en células de dicha población: (i) una segunda secuencia de ácido nucleico que codifica dicho polipéptido recombinante de interés; y (ii) un promotor unido operativamente a dicha segunda secuencia de ácido nucleico para dirigir la expresión de la segunda secuencia de ácido nucleico;

d) someter dicha población de células a un primer medio que carece de dicho primer metabolito en condiciones de manera que se obtengan células transformadas que tengan la prototrofia restablecida para el primer metabolito; y

e) someter dichas células transformadas a un segundo medio que comprende un aminoácido no natural correlacionado con dicho segundo metabolito en condiciones de manera que dicha segunda secuencia de ácido nucleico se exprese para producir dicho polipéptido recombinante de interés que tenga dicho aminoácido no natural incorporado en el mismo; en el que dicho primer medio y dicho segundo medio son iguales o diferentes; en el que dicha segunda secuencia de ácido nucleico se proporciona en dicha primera construcción de ácido nucleico y en el que dicha célula hospedadora se selecciona entre el Subgrupo 18 de Proteobacterias gramnegativas.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2010/034201.

Solicitante: Pfenex, Inc.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 10790 Roselle St. San Diego, CA 92121 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: RETALLACK,DIANE M, CHEW,LAWRENCE C, SQUIRES,CHARLES H.

Fecha de Publicación: 19 de Julio de 2017.

Clasificación Internacional de Patentes:

C12N15/65 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › utilizando marcadores (enzimas empleados como marcadores C12N 15/52).
C12P21/04 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › C12P 21/00 Preparación de péptidos o de proteínas (proteína monocelular C12N 1/00). › Péptidos o polipéptidos cíclicos o puenteados, p. ej. bacitracina.

PDF original: ES-2640947_T3.pdf

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