Oligonucleótidos que inhiben la migración celular.

Uso de un oligonucleótido bicatenario elegido entre la pareja (SEC ID Nº 1 y SEC ID Nº 2),

la pareja (SEC ID Nº 21 y SEC ID Nº 22), la pareja (SEC ID Nº 3 y SEC ID Nº 4), o la pareja (SEC ID Nº 23 y SEC ID Nº 24), para la fabricación de un fármaco para la prevención o el tratamiento de tumores primarios o tumores invasivos o metastásicos.

Oligonucleótidos que inhiben la migración celular

La presente invención se refiere a oligonucleótidos que inhiben la migración celular, la invasión o la metástasis.

En particular, se refiere al uso de oligonucleótidos bicatenarios para la fabricación de fármacos para la prevención o tratamiento de patologías humanas, tales como tumores.

Más particularmente, la invención tiene por objetivo inhibir la expresión de genes, cuyos productos participan en la activación o mantenimiento de estados patológicos.

La invención también se refiere a las composiciones farmacéuticas para la inhibición de la expresión de genes, cuyos productos participan en la activación o mantenimiento de estados patológicos.

La trombospondina -1 (TSP1) es una molécula de unión a calcio trimérica grande de 450 kDa compuesta por varios dominios (Carlson et al., 2008) que se une a numerosos ligandos y receptores, incluyendo varias integrinas y el receptor aceptor de CD36. TSP1, que fue la primera molécula antiangiogénica caracterizada (Good et al., 1990) , inhibe la migración in vitro e induce la apoptosis de células endoteliales (Jimenez et al., 2000) . La expresión de TSP1 está inhibida en una gran cantidad de tumores (Ren et al., 2006; Zhang y Lawler, 2007) incluyendo tumores primarios de mama y tumores de próstata dependientes de andrógenos, donde existe una correlación inversa entre la expresión de TSP1 y la densidad de vasos sanguíneos (MVD) (Colombel et al., 2005; Fontana et al., 2005b) . Se ha informado previamente de que la expresión de TSP1 es elevada, y ya no está asociada con una MVD reducida, tanto en metástasis de mama (Fontana et al., 2005a) , como en tumores invasivos o metastásicos de próstata que se convierten en refractarios a ablación hormonal (Colombel et al., 2005) . Sin embargo, no se ha establecido una implicación funcional de TSP1 en el desarrollo de tumores.

Ahora está bien establecido que el calcio, que se une a las repeticiones de tipo III de TSP1 y modifica su plegamiento y propiedades (Adams, 2004; Carlson et al., 2008) , regula la proliferación, diferenciación y apoptosis de las células cancerosas (Abeele et al., 2002; Lehen'Kyi et al., 2007; Thebault et al., 2006) . De hecho, los cambios morfológicos y de adherencia cíclicos observados durante la migración celular están acompañados por cambios repetitivos en [Ca2+]i dependiendo del flujo entrante de Ca2+ a través de canales localizados en los canales de la membrana plasmática. La naturaleza molecular de estos canales en las células en migración, e incluso más para células cancerosas metastásicas, aún son en gran medida desconocidos.

La interferencia de ARN (iARN) es un mecanismo de silenciamiento génico post-transcripcional donde la introducción de ARN bicatenario en una célula inhibe la expresión génica de un modo dependiente de secuencia. La iARN se ha observado en varios organismos tales como mamíferos, drosophila, nematodos, hongos y plantas, la iARN puede activarse en células de mamífero, notablemente mediante la introducción de ARNip sintético (Carthew y Sontheimer, 2009) .

Uno de los objetos de la invención es proporcionar inhibidores de moléculas que facilitan el desarrollo de tumores primarios, o la invasión tumoral, o la metástasis.

Otro objeto de la presente invención es proporcionar inhibidores de las moléculas que controlan o median la actividad de las moléculas mencionadas anteriormente.

Otro objeto de la presente invención es proporcionar composiciones farmacéuticas que comprenden dichos inhibidores.

Otro objeto de la presente invención es proporcionar composiciones farmacéuticas que sean eficaces para inhibir el progreso tanto de tumores primarios como de tumores invasivos o metastásicos.

La invención se basa en los inesperados resultados experimentales de acuerdo con los cuales la expresión de TSP1 estimula la migración de las células tumorales desde el entorno hipóxico y por tanto su inhibición produce efectos antitumorales.

Por tanto, en una realización general, la invención se refiere al uso de al menos:

-un inhibidor de la expresión de proteínas, que inhibe la expresión de:

- proteína TSP1, o -una proteína, que controla la expresión de TSP1 o media la actividad de TSP1, o,

-un inhibidor de la actividad proteica, inhibiendo dicho inhibidor la actividad de:

-la proteína TSP1, en particular la actividad responsable de la estimulación de la migración celular, o -una proteína que controla la expresión o media la actividad de TSP1, para la fabricación de un fármaco para la prevención o el tratamiento de tumores primarios, o tumores invasivos o metastásicos.

Por tanto, la invención se refiere a oligonucleótidos bicatenarios elegidos entre la pareja (SEC ID Nº 1 y SEC ID Nº 2) , la pareja (SEC ID Nº 21 y SEC ID Nº 22) , la pareja (SEC ID Nº 3 y SEC ID Nº 4) , o la pareja (SEC ID Nº 23 y SEC ID Nº 24) , para la fabricación de un fármaco para la prevención o el tratamiento de tumores primarios o tumores invasivos o metastásicos.

Los tumores dependen de un suministro adecuado de sangre para su crecimiento. Por lo tanto, para los especialistas en la técnica, la inhibición de la angiogénesis es un método para inhibir el desarrollo de tumores. Se han desarrollado varios compuestos antiangiogénicos en el pasado para alcanzar este objetivo. Por el contrario, la inhibición de un inhibidor de la angiogénesis tal como TSP1 debería aumentar la densidad de los vasos sanguíneos, y por tanto se espera que fomente el desarrollo de tumores. Hasta ahora, no podría abarcarse por los especialistas en la técnica inhibir la expresión o la actividad de la proteína TSP1 para inhibir el desarrollo de tumores.

Los inventores han demostrado aquí que aunque la inhibición de TSP1 en tumores no aumenta la densidad de vasos sanguíneos, la inhibición de TSP1 provoca un fuerte efecto antitumoral.

Según se expanden los tumores, frecuentemente aparecen regiones hipóxicas en los tumores. La hipoxia estimula la producción de factores angiogénicos tales como factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF) , que es un fuerte activador de la angiogénesis. Los nuevos vasos sanguíneos después irrigan el tumor y proporcionan oxígeno, reduciendo de este modo la hipoxia. Según se reduce la hipoxia, ya no se estimula la producción de VEGF, produciendo un mecanismo de retroalimentación.

No existe dicho mecanismo de retroalimentación para controlar la producción de TSP1 en tumores: los inventores han demostrado aquí que la hipoxia induce TSP1 que inhibe la angiogénesis, y por tanto aumenta la hipoxia.

Los inventores también han demostrado aquí que TSP1 puede inducirse mediante un segundo mecanismo: moléculas farmacológicas tales como alcanfor o tapsigargina que aumentan la concentración de calcio citosólico inducen la secreción y/o producción de TSP1. Dicho aumento en la concentración de calcio puede producirse mediante una desregulación de los canales de calcio. Los inventores demuestran que varios canales de calcio de la familia de potencial receptor transitorio (TRP) regulan la expresión de TSP1. Es de observar que varios de estos canales demostraron estar regulados positivamente en células cancerosas (Prevarskaya et al., 2007) .

Las inducciones de TSP1 por hipoxia o por una modificación de la concentración intracelular de calcio son dos procesos que pueden suceder independientemente. Sin embargo, puede haber algunos cruces entre estos procesos ya que los inventores muestran que al menos uno de los canales TRP, TRPV3, está regulado positivamente por hipoxia. Además, los inventores muestran que la hipoxia induce un aumento en la concentración intracelular de calcio.

De forma importante, los inventores también han demostrado que en tumores de próstata, TSP1 es un estimulador principal de la migración celular in vitro y del desarrollo de tumores in vivo ya que su silenciamiento 45 inhibía fuertemente el desarrollo tumoral.

Un inhibidor de la expresión de proteínas se refiere a una molécula biológica, tal como un oligonucleótido o un péptido, o una proteína, o cualquier otro tipo de moléculas orgánicas o inorgánicas, que inhiban la transcripción del gen que codifica dicha proteína, o la traducción del ARNm del gen que codifica dicha proteína.

Una proteína que controla la expresión de TSP1 se refiere a una proteína que controla la transcripción del gen TSP1 o la traducción del transcrito del gen TSP1. Por ejemplo, se han tenido en cuenta varios canales catiónicos no dependientes de voltaje de la familia de potencial receptor transitorio (TRP) , tales... [Seguir leyendo]

1. Uso de un oligonucleótido bicatenario elegido entre la pareja (SEC ID Nº 1 y SEC ID Nº 2) , la pareja (SEC ID Nº 21 y SEC ID Nº 22) , la pareja (SEC ID Nº 3 y SEC ID Nº 4) , o la pareja (SEC ID Nº 23 y SEC ID Nº 24) , para la fabricación de un fármaco para la prevención o el tratamiento de tumores primarios o tumores invasivos o metastásicos.

2. Uso de un producto que contiene o consiste en:

-al menos un oligonucleótido bicatenario definido anteriormente en la reivindicación 1, -al menos un agente anti-angiogénico y/o un agente anti-tumoral,

para la fabricación de un producto de combinación para un uso simultáneo, separado o propagado en el tiempo para la prevención o el tratamiento de tumores primarios o tumores invasivos o metastásicos. 15

3. Oligonucleótido bicatenario para su uso de acuerdo con la reivindicación 1 o producto para su uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el que el fármaco se combina con una terapia anti-tumoral, tal como radioterapia o quimioterapia.

4. Oligonucleótido bicatenario para su uso o producto para su uso de acuerdo con la reivindicación 3, en el que el tumor primario o el tumor invasivo o metastásico es un tumor sólido o un tumor linfoproliferativo, en el que el tumor sólido es tumor de próstata, un tumor de hígado, adenomas hepáticos, hiperplasia nodular focal, un tumor cerebral tal como glioma, un tumor de mama, un tumor de riñón, un tumor de pulmón tal como carcinoma pulmonar no microcítico, carcinoma pulmonar microcítico, blastoma pleuropulmonar y tumor carcinoide, un tumor óseo tal como

osteoma, osteocondroma, quiste óseo por aneurisma, y displasia fibrosa, osteosarcoma, condrosarcoma, sarcoma de Ewing, histiocitoma fibroso maligno, fibrosarcoma, un cáncer de estómago, un tumor de colon, un tumor de intestino delgado, un tumor esofágico, un tumor pancreático, un sarcoma, un tumor cervical, un tumor de vesícula biliar, un melanoma, y en el que el tumor linfoproliferativo es leucemia, linfoma, o un mieloma múltiple.

5. Composición farmacéutica, que comprende como sustancia activa, al menos un oligonucleótido bicatenario elegido entre las siguientes parejas que consisten en (SEC ID Nº 1 y SEC ID Nº 2) ; (SEC ID Nº 3 y SEC ID Nº 4) ; (SEC ID Nº 21 y SEC ID Nº 22) ; (SEC ID Nº 23 y SEC ID Nº 24) , en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

6. Composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 5, en la que la sustancia activa se formula para la administración a una dosis en el intervalo de 0, 05 a 50 mg/kg, en particular de 0, 1 a 20 mg/kg.

7. Composición farmacéutica que comprende, como sustancia activa, un producto que contiene o consiste en:

-al menos un oligonucleótido bicatenario definido anteriormente en la reivindicación 1, -al menos un agente anti-angiogénico, y/o un agente anti-tumoral,

como producto de combinación para un uso simultáneo, separado o propagado en el tiempo.

8. Composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7, en la que el agente anti-angiogénico se elige entre el grupo que comprende Cilengitida, Vandetanib, Lenalidomida, Talidomida, Trióxido Arsénico, Bevacizumab, anti-VEGFR-1, anti-VEGFR-2, anti-PDGFR, anti-FMS-FLT-3, anti-TK1.

9. Composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 8, en la que el agente anti-tumoral se elige entre el

grupo que comprende agentes alquilantes, tales como Bendamustina, Temozolomida, Mecloretamina, Ciclofosfamida, Carmustina, Cis-platino, Busulfán, Tiotepa, o Decarbazina, agentes anti-metabolito, tales como Pentostatina, Metotrexato, Pemetrexed, Floxuridina, Fluorouracilo, Citaraina, Mercaptopurina o Tiguanina, antibióticos citotóxicos tales como Rubitecán, Mitomicina C, Daunorrubicina, Doxorrubicina, Bleomicina, Plicamicina, Mitoxantrona HCI, u Oxaliplatino, derivados vegetales, tales como Vinorelbina, BMS 184476, sulfato de Vincristina,

Vinblastina, Docetaxel taxol.

10. Secuencia oligonucleotídica elegida entre las siguientes secuencias: SEC ID Nº 1, SEC ID Nº 2, SEC ID Nº 3, SEC ID Nº 4, SEC ID Nº 21, SEC ID Nº 22, SEC ID Nº 23, SEC ID Nº 24.

11. Oligonucleótidos bicatenarios elegidos entre las siguientes parejas que consisten en (SEC ID Nº 1 y SEC ID Nº 2) ; (SEC ID Nº 3 y SEC ID Nº 4) ; (SEC ID Nº 21 y SEC ID Nº 22) ; (SEC ID Nº 23ySEC ID Nº 24) .