Métodos y composiciones para inducir una respuesta inmune frente a VIH y modelos para ensayo.

Un polipéptido de la cubierta de VIH de clado C aislado que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ IDNO:2.

Métodos y composiciones para inducir una respuesta inmune frente a VIH y modelos para ensayo

ANTECEDENTES

El síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) es una amenaza sanitaria importante en todo el mundo. El VIH es la causa principal de SIDA. Hasta la fecha, no existen vacunas eficaces para el SIDA. Por estas razones, se están haciendo grandes esfuerzos para crear vacunas y modelos adecuados para ensayar las vacunas. Una diana de las vacunas terapéuticas es la proteína de la cubierta de VIH (gp160) . Durante la infección, gp160 es escindida por las proteasas de la célula del huésped para formar gp120 y gp41. Barnett et al. (US2002/0146683) describe numerosos polipéptidos de la cubierta de VIH en los que al menos una de las configuraciones en lámina B nativas ha sido modificada. Se enseña que las construcciones se usan en las composiciones de vacuna. Vajdy et al. (US2005/0175631) enseña composiciones farmacéuticas para el tratamiento de SIDA en las que las composiciones tienen un antígeno de VIH y un adyuvante mucosal. WO 2005/028625 describe virus VIH de clado C y aplicaciones de éstos.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

Se describen métodos y composiciones para incitar una respuesta inmune en un sujeto por la administración de un antígeno de VIH. Los antígenos de VIH incluyen polinucleótidos y polipéptidos de VIH de clado C, partículas virales VIH recombinantes y composiciones. Las partículas virales VIH recombinantes son particularmente útiles en modelos animales para estudiar VIH.

Los aspectos y realizaciones de la presente invención se presentan en las reivindicaciones adjuntas.

DESCRIPCIÓN BREVE DE LOS DIBUJOS

La Figura 1 representa un alineamiento de la secuencia de aminoácidos de la región consenso de la cubierta de VIH (SEQ ID NO:12) con las regiones de la cubierta de las cepas 1084i (SEQ ID NO:13) , 1157ip de longitud completa (SEQ ID NO:2) , 1157ip con deleciones en las regiones variables de la cubierta 1, 2 y 3 (SEQ ID NO:6) y 1157ip con deleciones en las regiones variables de la cubierta 1, 2, 3 y 4 (SEQ ID NO:8) .

La Figura 2 representa un alineamiento de la secuencia de ácido nucleico de la región consenso de la cubierta de VIH (SEQ ID NO:14) con las regiones de la cubierta de las cepas 1084i (SEQ ID NO:15) , 1157ip de longitud completa (SEQ ID NO:1) , 1157ip con deleciones en las regiones variables de la cubierta 1, 2 y 3 (SEQ ID NO:5) y 1157ip con deleciones en las regiones variables de la cubierta 1, 2, 3 y 4 (SEQ ID NO:7) .

La Figura 3 ilustra la actividad de anticuerpo neutralizante frente a SHIV-1157ip y SHIV89.6P.

La Figura 4 ilustra los recuentos de células T CD4+ y cargas de ARN viral en Monos Rhesus.

La Figura 5 ilustra la construcción de SHIV-1157ipd3.

La Figura 6 ilustra los niveles de expresión de luciferasa en construcciones con números crecientes de sitios NF-κB y replicación de SHIV-1157ipd3 frente a SHIV-1157ipd3N4.

La Figura 7a ilustra el uso de correceptor de SHIV-1157ipd3 y SHIV-1157ipd3N4.

Las Figuras 7b y c ilustran la neutralización del virus con varios nmAb humanos ampliamente reactivos: b12, 2G12, 2F5 y 4E10, y b12, 2G12, 2F5, 4E10 y 4X, respectivamente.

La Figura 8 representa la secuencia de nucleótidos de la región de la cubierta de la construcción designada 1157ip env (SEQ ID NO: 1) .

La Figura 9 representa la secuencia de aminoácidos de la región de la cubierta de la construcción designada 1157ip env (SEQ ID NO: 2) .

La Figura 10 representa la secuencia de nucleótidos de la región de la cubierta de la construcción designada 1157ipdv12 (SEQ ID NO: 3) .

La Figura 11 representa la secuencia de aminoácidos de la región de la cubierta de la construcción designada 1157ipdv12 (SEQ ID NO: 4) .

La Figura 12 representa la secuencia de nucleótidos de la región de la cubierta de la construcción designada 1157ipdv123 (SEQ ID NO: 5) .

La Figura 13 representa la secuencia de aminoácidos de la región de la cubierta de la construcción designada 1157ipdv123 (SEQ ID NO: 6) .

La Figura 14 representa la secuencia de nucleótidos de la región de la cubierta de la construcción designada 1157ipdv1234 (SEQ ID NO: 7) .

La Figura 15 representa la secuencia de aminoácidos de la región de la cubierta de la construcción designada 1157ipdv1234 (SEQ ID NO: 8) .

La Figura 16 representa la secuencia de nucleótidos de la región de la cubierta de la construcción designada 1157ipd3 (SEQ ID NO: 9) .

La Figura 17 representa la secuencia de aminoácidos de la región de la cubierta de la construcción designada 1157ipd3 (SEQ ID NO: 10) .

La Figura 18 representa la secuencia de aminoácidos de la región Nef de la construcción designada 1157ipd (SEQ ID NO: 11) .

La Figura 19 es una ilustración de la estrategia de clonación para SHIV-1157i.

La Figura 20 es una ilustración de la viremia en macacos vacunados y control.

DESCRIPCIÓN DETALLADA

Definiciones

Tal y como se usa en la presente memoria, un “polinucleótido” se refiere a una secuencia de nucleótidos unida covalentemente (es decir, ribonucleótidos para ARN y desoxirribonucleótidos para ADN) en la que la posición 3’ de la pentosa de un nucleótido se une por un enlace fosfodiéster a la posición 5 de la pentosa del nucleótido siguiente. El término “polinucleótido” incluye polinucleótidos mono y bicatenarios. “Polinucleótido” también engloba un polinucleótido corto, referido frecuentemente como un oligonucleótido (por ejemplo, un cebador o una sonda) . Un polinucleótido tiene un “extremo 5’” y un “extremo 3’” porque los enlaces fosfodiéster de los polinucleótidos se producen entre el carbono 5’ y el carbono 3’ del anillo de pentosa de los mononucleótidos sustituyentes. El extremo de un polinucleótido en el que una nueva unión sería en un carbono 5’ es su nucleótido 5’ terminal. El extremo de un polinucleótido en el que una nueva unión sería en su carbono 3’ es su nucleótido 3’ terminal. Tal y como se usa en la presente memoria, una secuencia de polinucleótido, incluso si es interna a un polinucleótido mayor (por ejemplo, una región de secuencia en un polinucleótido) , también puede decirse que tiene extremos 5’ y 3’.

El término “polinucleótido” tal y como se emplea en la presente memoria engloba formas de un polinucleótido modificadas químicamente, enzimáticamente o metabólicamente. El término también captura secuencias que incluyen cualquiera de los análogos de base conocidos de ADN y ARN, e incluye modificaciones tales como deleciones, adiciones y sustituciones (generalmente de naturaleza conservativa) en la secuencia nativa, siempre que la molécula de ácido nucleico codifique una proteína terapéutica o antigénica. Las modificaciones de los polinucleótidos pueden tener varios efectos incluyendo, por ejemplo, facilitar la expresión del producto polipeptídico en una célula huésped.

Los polinucleótidos usados en la presente invención incluyen polinucleótidos que codifican un fragmento inmunogénico o derivado de éste. Dichos fragmentos inmunogénicos o derivados de éstos incluyen fragmentos que codifican un epítopo de célula B o un epítopo de célula T. Los polinucleótidos usados en la presente invención también incluyen polinucleótidos que codifican un gen env o partícula viral VIH recombinante.

Tal y como se usa en la presente memoria un “polipéptido” es una cadena molecular de aminoácidos y no se refiere a una longitud específica del producto. Así, los péptidos, dímeros de oligopéptidos, multímeros y semejantes están incluidos en la definición de polipéptido. Este término también se pretende que incluya polipéptido que ha sido sometido a modificaciones post-expresión tales como, por ejemplo, glicosilaciones, acetilaciones, fosforilaciones y semejantes. Además, para los propósitos de la presente invención, un “polipéptido” se refiere a una proteína que incluye modificaciones, tales como deleciones, adiciones y sustituciones (generalmente de naturaleza conservativa) en la secuencia nativa, siempre que la proteína mantenga la actividad deseada.... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido de la cubierta de VIH de clado C aislado que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2.

2. Un polipéptido de la cubierta de VIH de clado C modificado en el que la región V1/V2 ha sido delecionada, comprendiendo dicho polipéptido modificado la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:4.

3. Un polipéptido de la cubierta de VIH de clado C modificado en el que las regiones V1/V2 y V3 han sido delecionadas, comprendiendo dicho polipéptido modificado la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:6.

4. Un polipéptido de la cubierta de VIH de clado C modificado en el que las regiones V1/V2, V3 y V4 han sido delecionadas, comprendiendo dicho polipéptido modificado la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:8.

5. Un polinucleótido aislado que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:1, que codifica el polipéptido de la reivindicación 1.

6. Un polinucleótido aislado que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:3, que codifica el polipéptido de la reivindicación 2.

7. Un polinucleótido aislado que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:5, que codifica el polipéptido de la reivindicación 3.

8. Un polinucleótido aislado que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:7, que codifica el polipéptido de la reivindicación 4.

9. Una construcción que comprende el polinucleótido de una cualquiera de las reivindicaciones 5-8.

10. Una composición que comprende el polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 o el polinucleótido de una cualquiera de las reivindicaciones 5-8, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

11. Una composición según la reivindicación 10 para inducir una respuesta inmune en un sujeto.

12. Una composición según la reivindicación 10 para la fabricación de un medicamento para inducir una respuesta inmune en un sujeto.

13. Una composición para usarse como se define en la reivindicación 11 o reivindicación 12, en la que la composición o medicamento es para administrarse con un segundo antígeno VIH.

14. Una composición para usarse como se define en la reivindicación 13, en la que dicho segundo antígeno VIH es gp120 o gp160.

15. Una partícula viral VIH recombinante que comprende una región de la cubierta que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:10 o está codificada por la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:9.

16. La partícula viral recombinante de la reivindicación 15, en la que la partícula viral comprende además la secuencia de aminoácidos Nef de SEQ ID NO:11.

17. La partícula viral recombinante de la reivindicación 15 o reivindicación 16, que comprende dos o más regiones NF-κB.

18. La partícula viral recombinante de la reivindicación 17, que comprende tres o más regiones NF-κB.

19. Una composición que comprende la partícula viral recombinante de una cualquiera de las reivindicaciones 15-18.