Mutantes mejorados de glucosa deshidrogenasa soluble dependiente de pirroloquinolina quinona.
Sección de la CIP Química y metalurgia
(20/05/2020). Solicitante/s: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG. Clasificación: C12N9/04.
Un mutante de glucosa deshidrogenasa soluble dependiente de PQQ (s-GDH; EC 1.1.5.2) con especificidad mejorada por glucosa en comparación con maltosa, que tiene una sustitución de treonina en la posición 348 por glicina, alanina o bien serina, en el que dicho mutante comprende adicionalmente
a) al menos una mutación para mejorar la estabilidad del mutante,
b) al menos una mutación para mejorar la afinidad del mutante por glucosa, en el que dicha mutación para mejorar la afinidad por glucosa se selecciona del grupo que consiste en L110H o Y; N229A, G o S; Q246H, M o N; Y333A; G339T; 10 y V436P, y opcionalmente
c) una o más mutaciones para mejorar además la especificidad del mutante por glucosa en comparación con maltosa, y
en el que estas posiciones corresponden a las posiciones aminoacídicas conocidas de la secuencia natural de s-GDH de A. calcoaceticus (SEQ ID NO: 2).
PDF original: ES-2807530_T3.pdf
Sección de la CIP Química y metalurgia
(06/05/2020). Solicitante/s: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG. Clasificación: C12N9/00.
Una ADN polimerasa modificada que tiene una actividad ADN polimerasa que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 70 % de identidad de secuencia con respecto a la secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID NO: 2, secuencia de aminoácidos que tiene una sustitución de acuerdo con S366 A/L y que opcionalmente incluye una o más sustituciones aminoacídicas seleccionadas del grupo que consiste en H223, N224, Y225, H227, I295, Y342, T343, I357, S360, L361, I363, S365Q, Y367, P368, D417, E475, Y476, F478, K518, H527, T529, M531, N535, G539, P542, N545, Q546, A547, L549, I550, N552, G553, F558, A596, G603, A610, V615, Y622, C623, D624, I628, Y629, R632, N635, M641, A643, I644, T647, I648, T651, I652, K655, W656, D657, V658, H660, F662, L690 y combinaciones de las mismas.
PDF original: ES-2804843_T3.pdf
3-hidroxibutirato deshidrogenasa mutante de Alcaligenes faecalis, así como procedimientos y usos que implican la misma.
Sección de la CIP Química y metalurgia
(29/04/2020). Solicitante/s: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG. Clasificación: C12N9/04.
Una 3-hidroxibutirato deshidrogenasa (3-HBDH) mutante de Alcaligenes faecalis con un rendimiento mejorado en relación con la 3-HBDH natural, en la que la enzima mutante comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 80 % idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 (3-HBDH de Alcaligenes faecalis; 3-HBDH natural) o la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 (secuencia central extendida de 3-HBDH natural) y en la que la enzima mutante tiene al menos tres sustituciones de aminoácidos en relación con la 3-HBDH natural, en la que el aminoácido en la posición correspondiente a
- la posición 253 de SEQ ID NO: 1 se sustituye con Ile (253Ile), Ala (253Ala) o Cys (253Cys),
- la posición 233 de SEQ ID NO: 1 se sustituye con Ser (233Ser), Ile (233Ile), Ala (233Ala), Pro (233Pro), Arg (233Arg), Thr (233Thr), Lys (233Lys) o Cys (233Cys), y
- la posición 234 de SEQ ID NO: 1 se sustituye con Thr (234Thr).
PDF original: ES-2803273_T3.pdf
3-Hidroxibutirato deshidrogenasa mutante de Rhodobacter sphaeroides, así como procedimientos y usos que implican la misma.
Sección de la CIP Química y metalurgia
(29/01/2020). Solicitante/s: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG. Clasificación: C12P7/18, C12N9/04, C12Q1/32.
Una 3-hidroxibutirato deshidrogenasa (3-HBDH) mutante de Rhodobacter sphaeroides con un rendimiento mejorado en relación con la 3-HBDH natural en la que la enzima mutante comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 80 % idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 (3-HBDH de Rhodobacter sphaeroides; 3-HBDH natural) y en la que la enzima mutante tiene al menos una sustitución aminoacídica en relación con la 3-HBDH natural en una posición correspondiente a la posición 250 de SEQ ID NO: 1.
PDF original: ES-2782199_T3.pdf
Mutantes mejorados de glucosa deshidrogenasa soluble dependiente de pirroloquinolina quinona.
Sección de la CIP Química y metalurgia
(08/03/2017). Solicitante/s: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG. Clasificación: C12N9/04.
Un mutante de glucosa deshidrogenasa soluble dependiente de PQQ (s-GDH; EC 1.1.5.2) con especificidad mejorada por la glucosa en comparación con la maltosa, que tiene una sustitución de treonina en la posición 348 por glicina, alanina o bien serina, en el que dicho mutante comprende adicionalmente
a) al menos una mutación para mejorar la estabilidad del mutante, en el que dicha sustitución para mejorar la estabilidad se selecciona del grupo que consiste en D87R; N122K; S124K; S146G; V298L y L386F,
b) al menos una mutación para mejorar la afinidad del mutante por la glucosa, y opcionalmente c) una o más mutaciones para mejorar aún más la especificidad del mutante por la glucosa en comparación con la maltosa,
y en el que estas posiciones corresponden a las posiciones de aminoácidos conocidas de la secuencia natural de s-GDH de A. calcoaceticus (SEQ ID NO: 2).
PDF original: ES-2624805_T3.pdf
Mutantes termoestables de la glucosa deshidrogenasa dependiente de quinona de pirroloquinolina.
(04/03/2015) Proteína mutante de s-GDH dependiente de QPQ caracterizada por que en por lo menos una de las posiciones 122 y 124 se encuentra presente el aminoácido lisina, en la que dichas posiciones corresponden a las posiciones aminoácidas conocidas de la GDH de secuencia de tipo salvaje de A. calcoaceticus (SEC ID nº 2, en la que dicho mutante presenta una mayor estabilidad que la proteína que no presenta dichas sustituciones y en la que dicha proteína es por lo menos 90% idéntica a SEC ID nº 2.
MUTANTES TERMOESTABLES DE LA GLUCOSA DESHIDROGENASA DEPENDIENTE DE QUINONA DE PIRROLOQUINOLINA.
(20/10/2011) Proteína mutante de la s-GDH dependiente de PQQ que presenta una mayor estabilidad térmica que la s- GDH de tipo salvaje, caracterizada porque en por lo menos una de las posiciones 122 y 124, se encuentra presente el aminoácido lisina, en la que dichas posiciones corresponden a las posiciones aminoácidas conocidas de la secuencia de tipo salvaje de la s-GDH de A. calcoaceticus SEC ID nº 2 y en la que dicha proteína presenta una identidad de por lo menos 90% respecto a la secuencia SEC ID nº 2.
METODO PARA OBTENER POLINUCLEOTIDOS CIRCULARES MUTADOS Y/O QUIMERICOS.
(16/09/2007) Un método para generar polinucleótidos quiméricos o mutados que consta de los siguientes pasos: a) proporcionar un polinucleótido molde circular cerrado que contenga un primer gen de interés, b) proporcionar fragmentos de un polinucleótido diana de DNA bicatenario proveniente de un segundo gen de interés capaz de hibridar con el primer gen de interés, y que dichos fragmentos tengan extremos 3''OH libres y extremos 5'' fosforilados, c) generar cadenas simples de dichos polinucleótidos molde y de los mencionados fragmentos de polinucleótido diana, d) hibridar dichos fragmentos del polinucleótido diana con los ya mencionados polinucleótidos molde, e) elongar los fragmentos hibridados…