Método para medir la resistencia de las películas.

Un procedimiento para medir el efecto de una acción sobre una película que comprende las siguientes etapas:

a) introducir, en una solución, al menos una sustancia capaz de formar una película,

b) introducir, en la solución obtenida en (a), al menos dos partículas, reposando dichas partículas sobre una superficie sumergida S en dicha solución,

c) reagrupar las partículas sobre dicha superficie sumergida S, formando dichas partículas sobre dicha superficie un punto o una mancha,

d) formar dicha película de dicha sustancia,

e) observar el punto o mancha sobre la superficie S,

f) aplicar una acción mecánica y/o física a dicha solución,

g) observar el efecto sobre la película de la acción aplicada en la etapa (f) observando el punto o mancha sobre la superficie S, y

h) determinar el efecto de la acción aplicado a la película comparando las observaciones de las etapas que se han mencionado anteriormente (e) y (g).

Método para medir la resistencia de las películas.

Campo técnico

La presente invención se refiere a un procedimiento para medir el impacto de una acción sobre una película. En particular, la presente invención se refiere a un procedimiento para medir el efecto de una acción, por ejemplo, una acción mecánica, hidrodinámica, física, química o biológica, sobre la integridad de una película.

La presente invención encuentra aplicación especialmente en el campo de la biología, la química y la biotecnología.

En la descripción a continuación, las referencias entre corchetes ([Ref.]) se refieren a la lista de referencias que se presenta al final del texto.

Técnica anterior

Existen una multitud de depósitos o capas delgadas de sustancias (biológicas) inertes o vivas unidas a soportes: por ejemplo pinturas, barnices, películas compuestas por macromoléculas, biopelículas de microorganismos y diversas células, por ejemplo bacterias, levaduras, algas y las células de organismos pluricelulares. A continuación, estas capas y depósitos sobre un soporte se denominarán por el término "película".

Entre estas películas, se forman gradualmente un gran número con el tiempo, por ejemplo por polimerización de monómeros, por agregación o interpenetración de macromoléculas, por el crecimiento de biopelículas de microorganismos, por multiplicación celular y/o producción de sustancias que unen las células entre sí.

Esta formación con frecuencia puede ajustarse mediante diversos parámetros físicos o sustancias, cuyo impacto es útil de conocer. Una película también puede modificarse después de su formación por la acción de un tratamiento fisicoquímico, por ejemplo, mediante detergentes, disolventes, radiación, por ejemplo, acción térmica, etc.

Todas estas acciones pueden dar como resultado películas para las que puede ser interesante conocer la resistencia a una acción hidrodinámica, tal como un chorro, una corriente o la agitación de una solución que recubre la película. Por ejemplo, también es posible interesarse simplemente por saber si esta película ha sido aún capaz de formarse o si se ha quebrado. En el resto de este documento, estas propiedades se denominaran por el término "integridad".

Los procedimientos conocidos hacen posible comparar la integridad de las películas de diversas naturalezas, obtenidas mediante diversos métodos de formación y resultantes de diversos tratamientos.

Por ejemplo, en uno de los procedimientos conocidos, se usa un soporte, cuyo color es diferente al de la película. Por lo tanto, cuando las películas se forman en este soporte, es fácil para un experto en la técnica medir la integridad del mismo después de, por ejemplo, una acción hidrodinámica, un tratamiento fisicoquímico y/o un ajuste de su formación mediante el análisis de una imagen adquirida.

Sin embargo, también existen películas que son transparentes o que no pueden colorearse, por ejemplo, películas vivas, películas formadas por microorganismos, películas resultantes de la polimerización o agregación para las cuales la sustancia usada para la coloración puede interferir con su formación.

Existen procedimientos en la técnica anterior para medir la integridad de una película, por ejemplo, a partir de sus 50 propiedades físicas, tales como su índice de refracción, por ejemplo, en Singh y col., Physica Scripta. Vol. 65, 167180 (2002) : "Refractive Index Measurement and its Applications" [Ref. 1] y en Vôrôs y col., Biophysical Journal, Vol. 87, 553-561 (2004) : "The Density and Refractive Index of Adsorbing Protein Layers" [Ref. 2].

Sin embargo, estos procedimientos son procedimientos costosos que requieren personal preparado y cualificado y 55 también instrumentos sofisticados y costosos.

Hay situaciones, por ejemplo en el campo médico o el campo biológico, en las que es necesario medir la integridad de un gran número de películas diferentes en presencia de compuestos químicos, moléculas biológicas, modificaciones termodinámicas, etc. Por ejemplo, puede ser una cuestión de evaluar la eficacia de un compuesto

sobre biopelículas o bien la acción, por ejemplo, la degradación, modificación o eficacia, de una enzima en una película polimérica.

En estas situaciones, por ejemplo, en el caso de realizaciones de cribado de moléculas o enzimas que son activas contra biopelículas, por ejemplo, para evaluar la eficacia de antibióticos sobre películas en el contexto de la atención sanitaria, las técnicas que se han descrito previamente no son satisfactorias ya que no permiten que un experto en la técnica realice las mediciones a un ritmo suficientemente alto.

Además, los procedimientos conocidos requieren el uso de un gran número de instrumentos que no pueden usarse 10 simultáneamente en un procedimiento de cribado. Además, los instrumentos usados son costosos, y requieren la presencia de personal cualificado.

Además, el tiempo para obtener los resultados con los procedimientos conocidos es muy largo y puede requerir la adición de reactantes que sean capaces de modificar el resultado y, por lo tanto, de conducir a una variabilidad de 15 los resultados y la falta de reproducibilidad de los mismos.

Por lo tanto, existe la necesidad real de encontrar un procedimiento para medir el efecto de una acción sobre una película que supere estos fallos, inconvenientes y obstáculos de la técnica anterior, en particular un procedimiento que haga posible controlar el tiempo, reducir la instrumentación necesaria para este procedimiento, reducir los costes y mejorar la detección del efecto.

El documento Journal of Microbiological methods, vol. 68, Nº 3, página 605-612, 2007, XP 005892101, ISSN 01677012 desvela un dispositivo y un método para la evaluación rápida de la formación de una biopelícula potencial por una bacteria que comprende el uso de partículas magnéticas y la aplicación de una fuerza magnética.

El documento FR 2 916 761 desvela un método para determinar la sensibilidad de un microorganismo a un antibiótico capaz de inhibir el desarrollo de una biopelícula que comprende también el uso de partículas magnéticas y la aplicación de una resistencia magnética.

Ninguno de estos documentos desvela el reagrupamiento de las partículas sobre una superficie sumergida antes de la formación de la biopelícula.

Descripción de la invención

El procedimiento de la presente invención hace posible resolver los fallos, inconvenientes y obstáculos de la técnica anterior que se han mencionado anteriormente.

En particular, un objeto de la presente invención es un procedimiento para medir el efecto de al menos una acción sobre una biopelícula que comprende las siguientes etapas: 40

a. introducir, en una solución, al menos una sustancia capaz de formar una película,

b. introducir, en la solución obtenida en (a) , al menos dos partículas, reposando dichas partículas sobre una superficie sumergida S en dicha solución,

c. reagrupar las partículas sobre dicha superficie sumergida S, formando dichas partículas sobre dicha 45 superficie un punto o una mancha,

d. formar dicha película de dicha sustancia,

e. observar el punto o mancha sobre la superficie S,

f. aplicar una acción mecánica y/o física a dicha solución,

g. observar el efecto sobre la película de la acción aplicada en la etapa (e) observando el punto o 50 mancha sobre la superficie S, y

h. determinar el efecto de la acción aplicado a la película comparando las observaciones de las etapas que se han mencionado anteriormente (e) y (g) .

De acuerdo con la invención, una sustancia capaz de formar una película puede ser, por ejemplo, microorganismos, 55 alimentos, sustancias químicas, macromoléculas sintéticas, macromoléculas biológicas, coloides y emulsiones, objetos de tamaño microscópico y objetos de tamaño nanoscópico.

Estos pueden ser, por ejemplo, células eucariotas, por ejemplo, células eucariotas animales, por ejemplo células sanguíneas, por ejemplo, leucocitos, por ejemplo granulocitos, leucocitos neutrófilos; leucocitos eosinófilos;

leucocitos basófilos; linfocitos B, linfocitos T, linfocitos NK, monocitos, eritrocitos, trombocitos. También pueden ser células eucariotas vegetales, por ejemplo, células epidérmicas vegetales, células de xilema, células del floema, células del parénquima, células de colénquima y células de esclerénquima. También pueden ser hongos o levaduras. Pueden ser, por ejemplo, Candida, Cr y ptococcus, Malassezia, Pityrosporum, Pneumocystis, Epidermophyton, Microsporum, Trichophyton. También pueden ser protozoos, por ejemplo,... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para medir el efecto de una acción sobre una película que comprende las siguientes etapas:

a) introducir, en una solución, al menos una sustancia capaz de formar una película, b) introducir, en la solución obtenida en (a) , al menos dos partículas, reposando dichas partículas sobre una superficie sumergida S en dicha solución, c) reagrupar las partículas sobre dicha superficie sumergida S, formando dichas partículas sobre dicha 10 superficie un punto o una mancha, d) formar dicha película de dicha sustancia, e) observar el punto o mancha sobre la superficie S, f) aplicar una acción mecánica y/o física a dicha solución, g) observar el efecto sobre la película de la acción aplicada en la etapa (f) observando el punto o mancha sobre la superficie S, y h) determinar el efecto de la acción aplicado a la película comparando las observaciones de las etapas que se han mencionado anteriormente (e) y (g) .

2. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la acción es una acción seleccionada 20 entre una acción mecánica o física.

3. El procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la sustancia capaz de formar una biopelícula se selecciona entre microorganismos, alimentos y sustancias químicas.

4. El procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dichas, al menos dos, partículas son independientemente una partícula magnética, una magnetizable o una eléctricamente cargada o una partícula cubierta con al menos una capa magnética o magnetizable.

5. El procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dichas, al menos dos, partículas se iluminan por medio de una fuente de luz para aumentar el contraste entre la partícula y la solución.