Terapia con péptidos.

Un polipéptido de menos de 30 aminoácidos de longitud que comprende la secuencia de uno cualquiera de los SEQ ID NO:

53 a 58 y 64 a 72; o un derivado o análogo del mismo que tiene menos de 30 aminoácidos de longitud y comprende una secuencia que tiene una identidad de secuencia de más de 65% con dicha secuencia de uno cualquiera de los SEQ ID NO: 53 a 58 y 64 a 72, y que se une a un HLA de clase II del MHC y activa una célula T específica para dicho polipéptido;

para su uso en un método para el tratamiento o la prevención del fracaso o el rechazo de aloinjertos.

Terapia con péptidos Campo de la invención

La presente invención se refiere a la terapia con péptidos, y en particular a la utilización de la inmunoterapia con péptidos para tratar o prevenir el rechazo de aloinjertos. La invención se extiende a diversos constructos, y métodos de uso de tales constructos en el tratamiento de pacientes de trasplante, por ejemplo, pacientes que sufren de insuficiencia renal terminal (IRT) que requieren un trasplante de riñón.

Antecedentes de la invención

Los resultados del trasplante renal son buenos a corto y medio plazo. Sin embargo, a largo plazo, los riñones se pierden sistemáticamente como consecuencia de la nefropatía crónica del aloinjerto (trasplante). Esto es en gran medida una consecuencia de dos fenómenos en curso: - (i) el rechazo crónico; y (ii) la nefrotoxicidad por inhibidor de calcineurina. Ambos fenómenos interactúan con un determinante pre-existente del resultado, es decir, daño crónico del parénquima renal establecido antes y poco después del trasplante. Por otra parte, el requisito para la inmunosupresión a largo plazo en los receptores de trasplante tiene consecuencias adversas, tales como aumento de la susceptibilidad a la infección y a la malignidad. Los beneficios del trasplante como tratamiento para pacientes que sufren de IRT se manifiestan tanto en la calidad de vida como en la supervivencia mejorada. Sin embargo, una larga espera para ser trasplantado puede ser frustrante para el individuo y afectar materialmente a los resultados a largo plazo. Una variedad de factores determinan el tiempo de espera, pero particularmente importante es la presencia en el receptor del trasplante de anticuerpos que exhiben inmunoespecificidad contra moléculas polimórficas conocidas como antígenos leucocitarios humanos (HLA), presentes en los órganos de los donantes potenciales. Los anticuerpos anti-HLA producidos por el receptor del trasplante pueden causar un rechazo de comienzo muy rápido o "hiperagudo" del órgano trasplantado, y por lo tanto su presencia debe ser determinada antes del trasplante. El receptor potencial es excluido a continuación de recibir un trasplante que tiene HLA relevantes, y el paciente debe esperar un órgano que porta antígenos HLA para los que no se produzcan anticuerpos. Los anticuerpos anti-HLA pueden ser estimulados por el embarazo, transfusiones de sangre y trasplante. El uso de eritropoyetina ha reducido la transfusión, y una mejor compatibilidad de HLA a través del intercambio de órganos ha reducido la estimulación de la síntesis de anticuerpos por el trasplante.

Sin embargo, la producción de anticuerpos anti-HLA, es decir, la "sensibilización por HLA", sigue siendo un problema significativo para el trasplante. Esto es particularmente evidente en pacientes que tienen IRT permanente, a menudo desde una edad temprana, que tienen exposición acumulativa intensa a HLA alogénicos (es decir, foráneos). La formación de anticuerpos anti-HLA de conmutación de clase madurados por afinidad por los linfocitos B requiere la presencia de células T coadyuvantes. La presencia de células T coadyuvantes para la producción de anticuerpos implica la participación de HLA mediante receptores de células T a través de la ruta indirecta. Los linfocitos T CD4+ pueden reconocer los HLA alogénicos a través de mecanismos convencionales de captación por células presentadoras de antígenos autólogas, procesamiento de péptidos y presentación en el contexto del auto-MHC de clase II. Esto se denomina ruta indirecta de alorreconocimiento. Además de su papel en la formación de anticuerpos, también se cree que las células T juegan un papel particularmente importante en el rechazo crónico. La ruta directa de alorreconocimiento es la reacción cruzada del receptor de células T específico para el auto-MHC y el péptido exógeno nominal en el MHC alogénico (con el péptido asociado). Esto se cree que es particularmente importante en el rechazo agudo. Los autores de la presente invención consideran por lo tanto que el tratamiento para minimizar, prevenir o eliminar por completo la vía indirecta de alorreconocimiento podría tener un valor considerable, tanto antes como después de recibir un trasplante con el fin de reducir la probabilidad de rechazo y la síntesis de anticuerpos anti-HLA.

Un objetivo a largo plazo de la investigación inmunológica en el trasplante ha sido desarrollar modulación específica del antígeno de la respuesta inmunitaria que haría la inmunosupresión inespecífica innecesaria. Aunque una eliminación completa de la necesidad de la inmunosupresión puede ser poco realista, los autores de la presente invención se dieron cuenta de que cualquier aumento en la especificidad sería bienvenido.

La inmunosupresión no específica del antígeno parece tener valor limitado en la modulación del rechazo crónico y la síntesis de anticuerpos anti-HLA. Sin embargo, si bien los autores de la presente invención no desean vincularse a ninguna hipótesis, consideran que la reducción específica de antígeno o la inhibición de la presentación indirecta podrían disminuir el rechazo crónico y la síntesis de anticuerpos contra HLA. Por analogía con la evidencia en el campo de la alergia, los autores de la presente invención especulan que los tratamientos basados en fragmentos de antígeno, es decir, péptidos, podrían resultar beneficiosos.

Compendio de la invención

Por lo tanto, los autores de la presente invención propusieron desarrollar una técnica de inmunoterapia con péptidos que podría modular la vía indirecta de alorreconocimiento en los seres humanos. Consideran que esto tiene el potencial para la modulación específica de antígenos de las respuestas aloinmunes. Con el fin de probar su hipótesis, estudiaron el alorreconocimiento indirecto en pacientes en los que había evidencia de una respuesta alogénica indirecta específica. Por consiguiente, los autores de la presente invención decidieron investigar los pacientes que habían elaborado un anticuerpo anti-HLA de especificidad conocida, ya que esto implicaba la presencia de un alorrespuesta indirecta específica. Los autores de la presente invención basaron sus estudios en una molécula de antígeno de clase I del MHC común y problemática, HLA-A2, que se ilustra en la Figura 1.

Los autores de la presente invención querían comprender exactamente qué partes de esta molécula de antígeno estimulan los linfocitos T a través de la vía indirecta, y por lo tanto podrían ayudar a la síntesis de anticuerpos anti- HLA-A2 en estos pacientes. Por lo tanto, utilizando la bioinformática, se diseñó una serie de 6 péptidos de 15 unidades solapantes, que correspondía a diversas regiones de la molécula de HLA-A2, y que constituyó la base de un denominado "mapa epitópico". Se creía que este "mapa" de respuestas a HLA-A2 difería probablemente entre individuos, determinadas por elementos controlados genéticamente, tales como HLA-DR y la naturaleza de cualquier exposición previa a HLA-A2, es decir, sensibilización. Sorprendentemente, de los 6 péptidos solapantes que fueron diseñados, 7 péptidos no pudieron ser sintetizados por dificultades técnicas en el procedimiento de síntesis. Si bien los autores de la presente invención no desean vincularse a ninguna hipótesis, consideran que esto era una consecuencia del extremo carácter hidrófobo de los 7 péptidos no sintetizados.

Los autores de la presente invención estudiaron la bioquímica de los 53 péptidos, denominados p1-p53, que se sintetizaron a partir de HLA-A2, como se indica en la Figura 3 con el fin de observar cuáles eran más propensos a actuar como estimuladores a través de la ruta indirecta de alorreconocimiento mediante la unión a moléculas de clase II del MHC, en particular, HLA-DR. Utilizando un sistema basado en ELISA, los autores de la presente invención midieron la afinidad de unión de estos 53 péptidos solapantes a una serie de moléculas de clase II del MHC purificadas. Las diversas moléculas de clase II del MHC que se sometieron a ensayo fueron: DR1, DR3, DR4, DR7, DR11, DR13, DR15, DR51, DR52, DR53, DP41, y DP42. Los autores de la presente invención se sorprendieron al encontrar que los péptidos de varios lugares a lo largo de la molécula de HLA-A2 exhibieron unión promiscua al MHC de clase II. Los autores de la presente invención llevaron a cabo a continuación investigaciones in vitro utilizando 3 de los péptidos para estimular células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de 27 pacientes inscritos para trasplante con historiales de sensibilización de anticuerpos conocidos. Algunos pacientes sometidos a ensayo habían sido previamente sensibilizados a HLA-A2, y por lo tanto produjeron anticuerpos anti- HLA^, otros pacientes no habían sido pre-sensibilizados... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido de menos de 3 aminoácidos de longitud que comprende la secuencia de uno cualquiera de los SEQ ID NO: 53 a 58 y 64 a 72; o un derivado o análogo del mismo que tiene menos de 3 aminoácidos de longitud y comprende una secuencia que tiene una identidad de secuencia de más de 65% con dicha secuencia de uno cualquiera de los SEQ ID NO: 53 a 58 y 64 a 72, y que se une a un HLA de clase II del MHC y activa una célula T específica para dicho polipéptido;

para su uso en un método para el tratamiento o la prevención del fracaso o el rechazo de aloinjertos.

2. El polipéptido o derivado o análogo del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, para su uso en un método para la prevención o el tratamiento del rechazo de aloinjertos.

3. Un polipéptido de entre 15 y 3 aminoácidos de longitud que comprende la secuencia de uno cualquiera de los SEQ ID NO: 53 a 58 y 64 a 72; o un derivado o análogo del mismo que tiene entre 15 y 3 aminoácidos de longitud y comprende una secuencia que tiene una identidad de secuencia de más de 9% con dicha secuencia de uno cualquiera de los SEQ ID NO: 53 a 58 y 64 a 72, y que se une a un HLA de clase II del MHC y activa una célula T específica para dicho polipéptido.

4. Una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido o derivado o análogo del mismo como se define en la reivindicación 3.

5. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un polipéptido o derivado o análogo del mismo como se define en la reivindicación 3 o una molécula de ácido nucleico como se define en la reivindicación 4.

6. Un procedimiento para elaborar una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un polipéptido o derivado o análogo del mismo como se define en la reivindicación 3 o una molécula de ácido nucleico como se define en la reivindicación 4 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

7. Un método in vitro para estimular células T, comprendiendo el método poner en contacto las células T con:

(a) un polipéptido o derivado o análogo del mismo como se define en la reivindicación 3; o

(b) una molécula de ácido nucleico como se define en la reivindicación 4,

en condiciones que permiten la estimulación de las células T y estimular de ese modo las células T.