Derivados de nucleótidos de purina.

Un compuesto adenosín 3',5'-monotiofosforotioato cíclico en la configuración Rp,

en el que el sustituyente 8 se selecciona entre:

- un grupo aralquilo, alcarilo, alquilo, alquilo cíclico, alquenilo o alquinilo unido opcionalmente mediante un grupo carbonilo o tiocarbonilo y opcionalmente sustituido con grupos acilo, halo, hidroxi, tiol, amino, carboxi (u otro oxiácido), ciano, azido, alcoxi, éster, éter o alquiltio, donde dichos grupos alquilo o análogos insaturados de los mismos contienen hasta 10 átomos de carbono;

- grupos arilo opcionalmente sustituidos; y

- grupos heteroarilo

Derivados de nucleótidos de purina

La invención se refiere nuevos derivados de nucleótidos de purina, a procesos para su preparación, a productos intermedios en su preparación, a composiciones que los contienen, a su uso en medicina y diagnóstico y a métodos de tratamiento y métodos de ensayo que los usan uso, en particular donde el derivado de nucleótido de purina es un fosforotioato monofosfato cíclico de purina sustituido en el carbono 8 del anillo de purina por un sustituyente unido a carbono.

Los monofosfatos cíclicos de purina de origen natural, adenosín monofosfato cíclico (AMPc) y guanosín monofosfato cíclico (GMPc), son moléculas mensajeras importantes que median los efectos sobre la función celular de hormonas. Por ejemplo, el documento WO 3/1425 desvela el uso de análogos de AMPc en los que en la posición 8 hay N, O S para modificar la actividad de las Epacs (proteínas de intercambio activadas directamente por AMPc).

Se ha propuesto poder usar análogos de dichos nucleótidos cíclicos en el tratamiento de patologías asociadas con función ¡nmunitaria reducida o potenciada. Por tanto un análogo de este tipo es el adenosín monofosforotioato cíclico (AMPSc), o más exactamente adenosín 3',5'- monofosforotioato cíclico, en el que uno de los oxígenos que cuelga del átomo de fósforo se reemplaza por un azufre. Como resultado, el fósforo es un centro quiral y en la configuración Rp (en el átomo de fósforo) el AMPSc es un antagonista de AMPc mientras que en la configuración Sp (en el átomo de fósforo) es un agonista de AMPc. El uso de AMPSc en la configuración Rp como antagonista de AMPc como parte de un tratamiento del VIH se ha propuesto, por ejemplo, en el documento WO98/4889 y el uso de AMPSc como inhibidor de crecimiento neoplásico se ha propuesto en el documento US-A-5843916.

El documento WO98/4889 sugiere en particular el uso de antagonistas de AMPc que inhiben la actividad de la enzima proteína quinasa I (PKAI) dependiente de AMPc y en este sentido sugirió el uso de AMPSc en configuración Rp sustituido por un heteroátomo (por ejemplo, Br o Cl) en el carbono 8 del anillo de purina o por un grupo unido a heteroátomo (por ejemplo, piperidina). Además, Gjertsen et al en J. Biol. Chem. 27:2599- 267 (1995) demostraron que el AMPSc-Rp 8-cloro y 8-bromo tenían mayor actividad agonista con respecto a la PKAI que el AMPSc-Rp no sustituido en posición 8.

En el comercio de Biolog-Life Science Institute of Bremen, Alemania, se dispone de diversos AMPSc sustituidos en posición 8, en particular Rp-8-Br-AMPSc, Rp-8-Br-MB-AMPSc (MB es un sustituyente monobutirilo en la posición 2' del anillo de ribosa), Rp-8-CI-AMPSc, Rp-8-CPT-AMPSc (donde CPT = 4-clorofeniltio), Rp-8-HA-AMPSc (donde HA = hexilamino), Rp-8-OH-AMPSc, Rp-8-PIP-AMPSc (donde PIP = piperidino) , Rp-8-AEA-AMPSc (donde AEA = 2- aminoetilamino) , Rp-8-AHA-AMPSc (donde AHA = 6-aminohexilamino), Rp-8-n3-AMPSc (donde N3 = azido), y Rp-8-l-AMPSc. Biolog también ofrece compuestos AMPSc en configuración Sp pero de nuevo todos ellos están o no sustituidos en la posición 8 por un heteroátomo o grupo unido a heteroátomo.

El presente tratamiento de infección por VIH es un fuerte cóctel de fármacos contra el VIH; terapia antirretroviral altamente activa (TARAA). La TARAA incluye inhibidores de proteasa y análogos de nucleósidos y no nucleósidos que dirigen el virus y es el componente principal en el tratamiento de pacientes infectados por el VIH. Sin embargo, aunque la TARAA prolonga significativamente la vida de los pacientes Infectados por VIH deteniendo el desarrollo del SIDA, la función deteriorada de linfocitos T parece persistir. De hecho, durante la TARAA, se ha observado que la respuesta ¡nmunitaria específica del VIH disminuye en lugar de aumentar. Adicionalmente, la TARAA no erradica el virus, los pacientes presentan recaída virológica después de la retirada del tratamiento y en algunos pacientes el virus desarrolla resistencia al tratamiento. Además, una gran cantidad de pacientes desarrollan intolerancia a los presentes fármacos posiblemente con graves acontecimientos adversos.

Por tanto, hay una necesidad cada vez más reconocida de otras modalidades de tratamiento. El tratamiento basado en inmunomodulación que puede mejorar la función del sistema ¡nmunitario un tanto "destruido" de pacientes infectados por VIH podría hacer que el sistema ¡nmunitario fuese competente expulsando el virus de sus reservas y podría ser una importante terapia adyuvante en pacientes infectados por VIH. Niveles elevados de AMPc y por tanto activación aumentada de PKA de tipo I inhibe significativamente la proliferación de linfocitos T de individuos infectados por VIH independientemente de la TARAA en curso. El uso de un antagonista selectivo de PKA de tipo I mejora la proliferación deteriorada de linfocitos T de pacientes infectados por VIH hasta un 3%. Las observaciones descritas anteriormente sugieren que la PKA de tipo I es una posible diana para terapia ¡nmunomoduladora. Los antagonistas selectivos de PKA de tipo I tales como Rp-8-Br-AMPSc ofrecen una posibilidad para invertir la activación inapropiada de la PKA de tipo I en inmunodeficiencias y por lo tanto restablecen la función de linfocitos T y la sensibilidad ¡nmunitaria. Se ha mostrado que la mayoría de los isómeros AMPSc en configuración Rp actúan como antagonistas de PKA uniéndose competitivamente a los sitios de unión del AMPc de la subunidad R, pero no disocian y activan la enzima.

Adicionalmente, la caracterización de derivados de Rp-AMPSc ha mostrado que algunos compuestos (por ejemplo, Rp-8-Br-AMPSc) actúan como antagonistas selectivos y completos de la isoenzima PKA de tipo I y como agonistas parciales de la isoenzima PKA de tipo II. La mayoría de células y tejidos contienen cantidades altamente significativas de PKA de tipo II ancladas en diversos sitios subcelulares e implicadas en la mediación de una gran cantidad de efectos inducidos por AMPc.

En cambio, aunque la PKA de tipo I está también ampliamente distribuida, se ha observado que es principalmente necesaria y suficiente para la regulación de la función de células inmunitarias. Esto ofrece alguna selectividad tlsular/celular, lo que podría favorecer un posible tratamiento basado en un antagonista selectivo de PKA de tipo I.

A pesar de que la PKA de tipo I es una interesante diana farmacológica, no se dispone de antagonistas de AMPc farmacéuticamente aceptables. El desarrollo de fármacos inmunoestlmuladores que interfieren con la acción del AMPc mejorara la función ¡nmunltarla de linfocitos T y puede llevarse a ensayo preclínico desarrollando antagonistas de AMPc selectivos de PKA de tipo I que contrarresten la acción del AMPc. Los objetivos específicos de la investigación realizada fueron el desarrollo de dichos compuestos y el desarrollo de métodos y modelos de evaluación de compuestos como fármacos inmunomoduladores que invierten la inmunodeficiencia en el VIH.

De manera sorprendente se ha descubierto ahora que la afinidad particularmente alta de PKAI (o más exactamente PKA Ría), es decir, agonismo de AMPc y más especialmente antagonismo, puede realizarse usando AMPSc en el que el carbono 8 de purlna está sustituido por un grupo carbilo, es decir, un grupo unido a carbono.

De esta manera, vista desde un aspecto, la invención proporciona un compuesto adenosln 3',5'-monotlofosforot¡oato cíclico en la configuración Rp, en el que el sustituyente 8 se selecciona entre:

un grupo aralquilo, alcarilo, alquilo, alquilo cíclico, alquenilo o alquinilo unido opcionalmente mediante un grupo carbonilo o tiocarbonilo y opclonalmente sustituido con grupos acilo, halo, hidroxi, tiol, amlno, carboxl (u otro oxlácldo), ciano, azido, alcoxi, éster, éter o alquiltio, en los que dicho grupos alquilo o análogos ¡nsaturados de los mismos contienen hasta 1 átomos de carbono;

grupos arilo opcionalmente sustituidos, tales como benceno, naftaleno y sistemas carboxlllcos anulados, y sistemas heterocíclicos anulados Incluyendo piridina, di- y triazinas, furano, tiofeno y pirrol, y los azoles, y Mazóles, y oxa- y tiadiazoles, y tetrazoles; y

grupos heteroarilo, tales como las azinas de anillo de seis miembros, piridina, las dlazlnas, triazinas y sistemas carbocíclicos anulados, y sistemas heterocíclicos anulados como se ha definido anteriormente, y sistemas de anillo de cinco miembros, tales como furano, tiofeno y pirrol, los azoles y Mazóles, y oxa- y tiadiazoles y tetrazoles y sistemas heterocíclicos y carbocíclicos anulados.

Mediante el término derivado en el presente contexto, se hace referencia a un compuesto que está modificado químicamente pero conserva la capacidad de ejercer la actividad de las AMPSc 8 sustituidas en uso, por... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto adenosín 3',5'-monot¡ofosforot¡oato cíclico en la configuración Rp, en el que el sustltuyente 8 se selecciona entre:

un grupo aralquilo, alcarilo, alquilo, alquilo cíclico, alquenllo o alquinilo unido opcionalmente mediante un grupo carbonilo o tiocarbonilo y opcionalmente sustituido con grupos acilo, halo, hidroxi, tiol, amino, carboxi (u otro oxiácido), ciano, azido, alcoxi, áster, éter o alquiltio, donde dichos grupos alquilo o análogos insaturados de los mismos contienen hasta 1 átomos de carbono;

grupos arilo opcionalmente sustituidos; y

grupos heteroarilo.

2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el sustituyente 8 se selecciona entre:

grupos arilo opcionalmente sustituidos seleccionados entre benceno, naftaleno y sistemas carbocíclicos anulados, y sistemas heterocíclicos anulados incluyendo piridina, di- y triazinas, furano, tiofeno, pirrol y los azoles, y triazoles, y oxa- y tiadiazoles, y tetrazoles; y

grupos heteroarilo seleccionados entre las azinas de anillo de seis miembros, piridina, las diazinas, triazinas y sistemas carbocíclicos anulados, y sistemas heterocíclicos anulados como se ha definido anteriormente, y sistemas de anillo de cinco miembros, tales como furano, tiofeno y pirrol, los azoles, y triazoles, y oxa- y tiadiazoles, y tetrazoles y sistemas heterocíclicos y carbocíclicos anulados;

3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en el que el sustituyente 8 comprende un grupo fenilo, furilo o tienilo.

4. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 protegido en uno o más de los grupos azufre fosforotioico, el grupo adenosinamina y el grupo furil hidroxilo.

5. Proceso para la preparación de un adenosín monofosforotioato 3',5'-cíclico 8-carbamoilado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, comprendiendo dicho proceso al menos una de las siguientes etapas:

a) hacer reaccionar un adenosín fosforamidato 3',5'-cícl¡co 8-carbamoilado 2'-protegido con disulfuro de carbono y desproteger el 2-hidroxilo;

b) hacer reaccionar una adenosina 8-carbamoilada con SPCI3 en un disolvente seco;

c) hacer reaccionar una adenosina 8-carbamoilada con un fosfito y posteriormente con azufre;

d) hacer reaccionar un 8-halo-adenosín monofosforotioato cíclico opcionalmente 2-protegido con un agente de alquilación y, si se requiere, desproteger el 2'-hidroxilo;

e) transformar un adenosin monofosforotioato 3',5'-cíclico 8-carbamoilado en una sal del mismo;

f) hacer reaccionar un adenosin monofosforotioato 3',5'-cíclico 8-carbamoilado para realizar una sustitución de sililo

en el oxígeno 2'; y

g) separar los isómeros Rp y Sp de una mezcla isomérica Rp/Sp de un adenosin monofosforotioato 3',5'-cíclico 8-carbamoilados o un derivado del mismo.

6. Un adenosin fosforamidato 3',5'-cíclico 8-carbamoilado en la configuración Sp, en el que el sustituyente 8 es como se ha definido en la reivindicación 1.

7. Un adenosin fosforotioato 3',5'-cíclico 8-carbamoilado-2'-protegido en la configuración Rp, en el que el sustituyente 8 es como se ha definido en la reivindicación 1.

8. Un 8-halo adenosin fosforamidato 3',5-cíclico, en la configuración Sp, en el que el grupo amino del fosforamidato comprende un átomo de hidrógeno.

9. El compuesto de acuerdo con la reivindicación en 8 en el que dicho compuesto está 2'-protegido.

1. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 8 o la reivindicación 9, en el que dicha protección en 2' es 2'-sililación.

11. Una composición farmacéutica que comprende un adenosín monofosforotioato 3',5'-cíclico 8-carbamoilado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 junto con un vehículo o excipiente fisiológicamente aceptable.

12. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para su uso como un medicamento.

13. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para su uso en el tratamiento de enfermedades neoplásicas, inmunodeficiencia e infecciones virales.

14. El uso de un adenosín 3',5'-monofosforotioato cíclico 8-carbamoilado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para la preparación de un medicamento para su uso en el tratamiento de enfermedades

neoplásicas, inmunodeficiencias e infecciones virales.

15. Un método de ensayo para determinar adenosín monofosfato cíclico AMPc en una muestra, generalmente una muestra biológica, cuyo método implica poner en contacto dicha muestra con un análogo de AMPc y un reactivo de unión a AMPc, caracterizado por que dicho análogo es un adenosín 3',5'-monofosforotioato cíclico 8- carbamoilado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.