1. Unidad de balancín de una máquina de atar con fleje que comprende un balancín que comprende:

un extremo pivotante;

un extremo oscilante; y

un asiento conformado sobre el balancín, dispuesto adyacente al extremo oscilante y que comprende

una parte frontal correspondiente al extremo pivotante 11 del balancín;

una parte posterior correspondiente al extremo oscilante del balancín;

dos lados opuestos;

un hueco de montaje conformado en una superficie superior del asiento;

una parte inferior definida en el hueco de montaje; y

una protrusión de soporte conformada sobre la parte inferior del asiento y que se extiende hacia los lados del asiento;

un panel de posicionamiento montado en el hueco de montaje del asiento y sobre la protrusión de soporte;

dos paneles dentados montados sobre el panel de posicionamiento 30, dispuestos paralelos a la parte frontal y a la parte posterior del asiento y que se deslizan selectivamente hacia la parte frontal y la parte posterior del asiento, comprendiendo cada panel dentado:

dos lados que se corresponden respectivamente con los lados del asiento;

una superficie superior dentada; y

dos protrusiones deslizantes que sobresalen respectivamente de los lados del panel dentado; y

dos soportes montados bien sujetos en el hueco de montaje del asiento y dispuestos respectivamente adyacentes a los lados del asiento, y comprendiendo cada soporte un lado interior correspondiente a los paneles dentados; y

un hueco de deslizamiento conformado en el lado interior del soporte y montado alrededor de las protrusiones deslizantes correspondientes del panel dentado.

2. Unidad de balancín según la reivindicación 1, en el que el asiento del balancín comprende adicionalmente un hueco interior conformado en la parte inferior del asiento y que se extiende hacia los lados del asiento;

La unidad de balancín comprende además un soporte montado en el hueco interior del balancín;

La protrusión de soporte se conforma sobre una parte superior del soporte y sobresale introduciéndose en el hueco de montaje del asiento.

3. Unidad de balancín según la reivindicación 1, en la que cada panel dentado comprende además un hueco de la parte inferior conformado en una parte inferior del panel dentado y a través de una parte frontal y una parte posterior del panel dentado y montado alrededor del panel de posicionamiento.

4. Unidad de balancín según la reivindicación 2, en la que cada panel dentado comprende además un hueco de la parte inferior conformado en una parte inferior del panel dentado y a través de una parte frontal y una parte posterior del panel dentado y montado alrededor del panel de posicionamiento.

5. Unidad de balancín según las reivindicaciones 2 ó 4, en la que el soporte es una varilla redonda.

6. Unidad de balancín según las reivindicaciones 2 ó 4, en la que el soporte se corresponde con el hueco interior del asiento y se incrusta en el interior del mismo; y

La protrusión de soporte es convexa.

7. Unidad de balancín según las reivindicaciones 2 ó 4, en la que el soporte se corresponde con el hueco interior del asiento y se incrusta en el interior del mismo; y

La protrusión de soporte presenta una sección transversal rectangular.

8. Unidad de balancín según las reivindicaciones 2 ó 4, en la que el soporte se corresponde con el hueco interior del asiento y se incrusta en el interior del mismo; y

La protrusión de soporte presenta una sección transversal triangular.

9. Unidad de balancín según la reivindicación 1, en la que el asiento del balancín comprende además un hueco interior conformado en la parte inferior del asiento y que se extiende hacia los lados del asiento; y la unidad de balancín comprende además una pluralidad de soportes esféricos montados en el interior del hueco interior del balancín y dispuestos a lo largo del mismo.

Nanocomposiciones sacarídicas para la preparación de vacunas

Campo técnico

La presente invención se refiere al desarrollo de formulaciones basadas en el diseño de vehículos nanométricos, capaces de inducir o potenciar una repuesta inmunológica frente a un antígeno asociado. Más en concreto, se refiere a nanosistemas de aplicación en el campo de las enfermedades infecciosas. Adicionalmente, la invención se refiere a las composiciones farmacéuticas que los comprenden, así como a procedimientos para su preparación.

Antecedentes

Las vacunas se componen tradicionalmente de microorganismos atenuados o muertos que son capaces de generar protección inmunológica frente a la enfermedad que causan una vez inoculados al organismo. El éxito de este tipo de vacunas reside en que el organismo reconoce dicho patógeno y comienza una respuesta inmunitaria frente al mismo, así como la generación de memoria inmunológica, lo que permite desencadenar una respuesta inmediata cuando el microorganismo patógeno entra en el organismo. Sin embargo, la utilización de este tipo de vacunas puede ir acompañada de cierta problemática relacionada principalmente con (i) la posible reactivación del agente infeccioso como consecuencia de mutaciones en el genoma, (ii) la presencia de agentes tóxicos que pueden acompañar al patógeno como son los lipopolisacáridos (LPS) , o (iii) la pérdida de potencia debido a deficiencias en el transporte y almacenamiento en las condiciones de refrigeración requeridas (Plotkin SA. Vaccines: past, present and future. Nat Med 2005;11 (4 (suppl) ) :S5-11) .

Para solventar algunos de estos problemas, en los últimos años se han obtenido antígenos subunidad formados por las partes mejor conservadas de los patógenos, o plásmidos ADN codificadores de estos antígenos, para que el organismo pueda reconocerlos como invasores una vez administrados, y que presentan un mejor perfil de seguridad al evitar la inoculación del microorganismo entero. Sin embargo, este aumento en la seguridad de la vacuna suele conllevar una disminución en la inmunogenicidad de la misma, lo que da lugar a una menor potencia de la respuesta inmune generada. Por esta razón, tanto los antígenos subunidad como las vacunas ADN requieren (i) una dosificación múltiple con dosis de recuerdo para asegurar la protección inmunológica, así como (ii) el apoyo de algún tipo de agente adyuvante, de forma que ayude a la inducción y potenciación de la respuesta inmunitaria frente al antígeno/material genético administrado, y por tanto, frente al propio patógeno.

Actualmente, sólo las sales insolubles de aluminio (álum) están aprobadas por las agencias regulatorias de todo el mundo, y las únicas por la FDA (US Food and Drug Administration) , para su uso en humanos con este fin. Sin embargo, se han identificado múltiples inconvenientes relacionados con este adyuvante, tales como:

- aparición de síntomas locales tras la inyección como hinchazón, eritemas o nódulos cutáneos (Lindbald EB. Aluminium adjuvants - in retrospect and prospect. Vaccine 2004;22:3658-3668) ,

- pérdida de potencia por congelación accidental (Zapata MI, Peck GE, Hem SL, White JL, Feldkamp JR. Mechanism of freeze-thaw instability of aluminum hydroxycarbonate and magnesium hydroxide gels. J Pharm Sci 1984;73:3-9) ,

- inducción de una respuesta inmune únicamente de tipo humoral, lo que lo hace menos adecuado para aquellos microorganismos que requieran una respuesta celular para ser eliminados del organismo (Brewer JM. (How) do alumiun adjuvants work? Immunol Lett 2006;102:10-15) ,

- aparición de reacciones alérgicas (Brewer JM. (How) do alumiun adjuvants work? Immunol Lett 2006;102:10-15) ,

- necesidad de administrarlo por vía parenteral y en varias dosis para generar protección.

Por lo tanto, se hace necesario el desarrollo de nuevos sistemas adyuvantes que sean menos tóxicos, más tolerables por el paciente, que permitan la potenciación y modulación de las respuestas inmunes frente a una amplia variedad de microorganismos patógenos, así como una reducción en el número de dosis necesaria para alcanzar protección frente a enfermedades infecciosas.

Nuevos sistemas basados en lípidos y tensioactivos (emulsiones) han sido introducidos recientemente en el mercado europeo formando parte de vacunas frente a la gripe pandémica: MF59TM, AS03TM y la AF03 TM, desarrollados respectivamente por las empresas farmacéuticas Novartis, GlaxoSmithKline (GSK) y Sanofi Pasteur (EMEA – pandemic influenza vaccines: http://tinyurl.com/5vw5yyn ) :

• MF59TM (Novartis) : Aflunov® (H5N1) , Focetricia® (H1N1) , Foclivia® (H5N1)

• AS03TM (GSK) : Prepandrix® (H5N1)

• AF03 TM (Sanofi Pasteur) : Humenza® (H1N1)

Dichas formulaciones adyuvantes basadas en emulsiones se han aprobado acompañando a virus inactivados provenientes de diversas cepas de influenza relacionadas con el brote pandémico. Su aplicación junto con antígenos subunidad no se encuentra aprobada por las agencias regulatorias, aunque no obstante, esta aplicación se encuentra recogida en numerosos documentos (por ejemplo: US2009191226 (A2) , US2009304742 (A1) , WO 2010125461 (A1) , US 2005136073 (A1) , WO2007006939 (A3) , WO 0168129 (A2) ) . Las emulsiones adyuvantes descritas en dichos documentos presentan como composición común, la parte oleosa compuesta por escualeno y una mezcla de tensioactivos no iónicos que le confieren estabilidad al sistema. A mayores pueden ir acompañadas de agentes antioxidantes como el a-tocoferol (por ejemplo: WO2006100110 (A1) , WO 2009127676, WO 2009127677, US 2010183667 (A1) ) u otras moléculas inmunomoduladoras como el CpG (por ejemplo: EP 1572124 (A4) ) , muramil dipéptidos (por ejemplo: US2003147898 (A1) , EP0315153 (A2) ) , monofosforil lípido A (por ejemplo: WO9956776 (A2) , EP1951298 (A1) ) ó también éste último combinado con QS21 (por ejemplo: US 2007196394 (A1) , WO9517210 (A1) ) . Pero no tienen ninguna cubierta polimérica ni de ninguna otra naturaleza.

También se han descrito otros sistemas nanocapsulares, en concreto cabe mencionar una composición de nanocápsulas polisacarídicas (EP1834635 A1) . Sin embargo, este sistema emplea en el núcleo oleoso aceites compuestos por ácidos grasos y sus derivados (ésteres ó amidas) y además requiere la presencia de un compuesto polioxialquilenado para estabilizar el sistema.

Breve descripción de la invención La presente invención proporciona un sistema al cual es posible asociar antígenos en su superficie de forma eficaz. Este sistema presenta ventajas especialmente relevantes en el campo de las vacunas. Por un lado por ser menos tóxico que las vacunas que se comercializan actualmente, debido a que los materiales que lo componen son materiales seguros desde un punto de vista regulatorio y biocompatibles. Por otro lado porque su empleo permite alcanzar protección frente a enfermedades infecciosas empleando un número de dosis de antígeno más reducido que en el caso de las vacunas que se comercializan.

Así, en un primer aspecto, la invención se dirige a un sistema para la administración de antígenos que comprende nanocápsulas con un tamaño medio inferior a 1 micrómetro, que comprenden:

caracterizadas por presentar una estructura tipo reservorio, donde el núcleo está compuesto por componentes lipídicos y está recubierto por al menos un polisacárido catiónico. En otro aspecto, la invención se refiere a un sistema como se ha definido anteriormente que se encuentra en forma liofilizada.

En otro aspecto, la invención se refiere a una vacuna que comprende un sistema como se ha definido anteriormente.

En otro aspecto, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un sistema como se ha definido anteriormente. En otro aspecto, la invención hace referencia a una composición farmacéutica que comprende un sistema como se ha definido anteriormente para su uso en la prevención de enfermedades infecciosas. En un aspecto adicional, la invención se dirige a un procedimiento para la preparación de un sistema como se ha definido anteriormente que comprende: a) preparar una solución acuosa de al menos un polisacárido catiónico; b) preparar una solución orgánica de al menos un componente oleoso de características inmunoestimulantes y al menos un tensioactivo aniónico; c) mezclar bajo agitación las soluciones formadas en a) y b) con la formación espontánea...

1. Un sistema para la administración de antígenos que comprende nanocápsulas con un tamaño medio inferior a 1 micrómetro, que comprenden: a) al menos un polisacárido catiónico; b) al menos un componente oleoso de características inmunoestimulantes; c) al menos un tensioactivo aniónico; y

d) al menos un antígeno; caracterizadas por presentar una estructura tipo reservorio, donde el núcleo está compuesto por componentes lipídicos y está recubierto por al menos un polisacárido catiónico.

2. Sistema según la reivindicación 1, donde el polisacárido catiónico se selecciona de entre el grupo consistente en policationes de dextrano, poliglucosaminas o polisacáridos cationizados.

3. Sistema según la reivindicación 2, donde el polisacárido catiónico es la poli-D-glucosamina, sus sales, fragmentos, derivados o derivados marcados.

4. Sistema según la reivindicación 1, donde el componente oleoso de características inmunoestimulantes se selecciona de entre el grupo consistente en vitaminas liposolubles, aceites minerales derivados de parafina e isoterpenos.

5. Sistema según la reivindicación 4, donde el componente oleoso es un isoterpeno.

6. Sistema según la reivindicación 1, donde el tensioactivo aniónico es un fosfolípido.

7. Sistema según reivindicaciones anteriores, que comprende adicionalmente otros tensioactivos de tipo neutro.

8. Sistema según la reivindicación 1, donde el antígeno es un antígeno de origen viral.

9. Sistema según reivindicación 8, donde el antígeno de origen viral se selecciona de entre el grupo consistente en antígenos subunidad característicos de virus de la hepatitis A, B, C ó E, virus del papiloma humano, virus de inmunodeficiencia humana tipo 1, virus de la influenza, citomegalovirus, virus del herpes simple, SARS coronavirus, rotavirus, virus sincicial respiratorio, virus de parainfluenza, virus de las paperas, virus del sarampión, virus de la encefalitis japonesa, virus de la rubeola, virus de Epstein-Barr, virus del dengue, virus de la varicela Zoster.

10. Sistema según reivindicación 9, donde el antígeno es un antígeno subunidad característico del virus de la hepatitis B.

11. Sistema según las reivindicaciones anteriores, que adicionalmente comprende una molécula bioactiva con propiedades inmunoestimulantes o inmunomoduladoras.

12. Sistema según reivindicación 11, donde la molécula bioactiva con propiedades inmunoestimulantes o inmunomoduladoras es de carácter hidrofóbico.

13. Sistema según las reivindicaciones anteriores, que adicionalmente comprende al menos un polímero catiónico no sacarídico.

14. Sistema según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que adicionalmente comprende al menos un compuesto capaz de facilitar el seguimiento de las nanocápsulas tras su aplicación a un ser vivo.

15. Sistema según la reivindicación 14, donde el compuesto se selecciona de entre el grupo consistente en un marcador, un agente de seguimiento y un agente de tinción.

16. Sistema según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde las nanocápsulas se encuentran en forma liofilizada.

17. Vacuna que comprende un sistema como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones de 1 a 16.

18. Composición farmacéutica que comprende un sistema como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16.

19. Composición farmacéutica, según la reivindicación 18, para su uso en la prevención de enfermedades infecciosas.

20. Un procedimiento para la preparación de un sistema como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, que comprende: a) preparar una solución acuosa de al menos un polisacárido catiónico; b) preparar una solución orgánica de al menos un componente oleoso de características inmunoestimulantes y al menos un tensioactivo aniónico;

c) mezclar bajo agitación las soluciones formadas en a) y b) con formación espontánea de las nanocápsulas; d) incubar al menos un antígeno sobre la superficie de las nanocápsulas preformadas.

21. Un procedimiento para la preparación de un sistema como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 que comprende: a) preparar una solución acuosa de al menos un polisacárido catiónico; b) preparar una solución orgánica de al menos un componente oleoso de características inmunoestimulantes y al menos un tensioactivo aniónico; c) mezclar la solución b) bajo agitación con una solución acuosa;

d) incubar la mezcla obtenida en c) con la solución a) ; e) incubar al menos un antígeno sobre la superficie de las nanocápsulas preformadas.

22. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 20 y 21, que comprende además la adición de una molécula bioactiva con propiedades inmunoestimulantes ó inmunomoduladoras y/o un compuesto capaz de facilitar el seguimiento de las nanocápsulas tras su aplicación a un ser vivo, en la solución orgánica b) .

23. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 20 y 21, en donde el polisacárido catiónico se ha marcado previamente con un compuesto capaz de facilitar el seguimiento de las nanocápsulas tras su aplicación a un ser vivo.

24. Procedimiento según la reivindicación 20, que comprende una etapa adicional después de la etapa c) ó d) en la que las nanocápsulas se someten a un proceso de liofilización.

25. Procedimiento según la reivindicación 21, que comprende una etapa adicional después de la etapa d) ó e) en el que las nanocápsulas se someten a un proceso de liofilización.

26. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 24 o 25, que comprende una etapa adicional en la que se regeneran las nanopartículas liofilizadas.

27. Uso de un sistema como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 en la preparación de una vacuna.

28. Uso, según la reivindicación 27, para la preparación de una vacuna para la prevención de enfermedades infecciosas.

29. Uso, según la reivindicación 28, para la prevención de enfermedades infecciosas causadas por agentes víricos.

30. Uso, según reivindicación 29, para la prevención de enfermedades infecciosas víricas seleccionadas de entre el grupo consistente en hepatitis A, B, C y E, cáncer cervical causado por el virus del papiloma humano, síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) , gripe estacional, gripe pandémica, mononucleosis infecciosas por citomegalovirus ó por virus de Epstein-Barr, infección por herpes simple, gastroenteritis por rotavirus, síndrome respiratorio agudo severo (SARS) , parainfluenza, neumonía por virus sincicial respiratorio, encefalitis japonesa, dengue, rubeola, paperas, sarampión y varicela Zoster.

Figura 1

Figura 2

Figura 3

Tamaño (nm) Tamaño (nm)

300 250 200 150 100 50 0

250 200 150 100 50 0

19 Figura 4 (A)

Nanocápsulas polisacarídicas sin antígeno Antes 2, 5 5

% Trehalosa

Figura 4 (B)

Nanocápsulas polisacarídicas con antígeno Antes 20

% Trehalosa

Anti-HBsAg IgG (mIU/mL)

Figura 5

Inmunización nasal frente a rHBsAg con nanocápsulas polisacarídicas con núcleo de escualeno Anti-rHBsAg IgG (mIU/mL)

400 300 200 100 0

Figura 6

0 5 10152025

Tiempo tras primera inmunización (semanas)

Figura 7

Anti-HBsAg IgG (mIU/mL)

Tiempo tras primera inmunización (semanas)