PROCEDIMIENTO DE PURIFICACIÓN PARA LA PREPARACIÓN DEL TRAZADOR RADIOACTIVO 3'-DESOXI-3'-[18F]-FLUORTIMIDINA ([18F]FLT).

Procedimiento de purificación para la preparación del trazador radioactivo 3-desoxi-3-[18f]-fluortimidina ([18f]flt) OBJETO DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a la preparación del trazador radioactivo 3-Deoxi-3-[ 18 F]fluortimidina ([ 18 F]FLT). En concreto, esta invención se refiere a la preparación del trazador radioactivo 3-Deoxi-3-[ 18 F]fluortimidina ([ 18 F]FLT) por medio de módulos universalmente conocidos y comúnmente usados para la síntesis del trazador radioactivo [ 18 F]FDG que, por esta razón en concreto, es usado habitualmente en la gran mayoría de centros de Tomografía de Emisión de Positrones (TEP) por todo el mundo. Esta invención se refiere también, a un conjunto de reagentes/materiales para la preparación del trazador radioactivo 3-Deoxi-3-[ 18 F]fluortimidina ([ 18 F]FLT). ESTADO DE LA TÉCNICA El [ 18 F]FLT es un trazador radioactivo desarrollado en años recientes y usado en el procedimiento de diagnóstico TEP en el campo de la oncología. Su utilidad radica en su capacidad para diferenciar entre tejidos benignos y malignos, en la posibilidad de medir la agresividad del tumor y en poder evaluar la respuesta a terapias antitumorales en una fase temprana. A pesar del considerable interés en este compuesto, el número de centros equipados para llevar a cabo este procedimiento es extremadamente limitado, como lo es el número de estudios llevados a cabo sobre este tema. La razón radica en la falta actual de un procedimiento de síntesis de [ 18 F]FLT extremadamente simple y efectivo y, sobre todo, que pueda ser fácilmente automatizado, lo que no es el caso del trazador radioactivo [ 18 F]FDG que, por esta y otras razones, es habitualmente usado en la mayoría de centro de TEP por todo el mundo. La Figura 1 muestra un procedimiento conocido que se usa para la preparación del trazador radioactivo 3- Deoxi-3-[ 18 F]fluortimidina ([ 18 F]FLT). En el caso en cuestión, se usa el precursor 3-N-Boc-1-[5-O-(4,41-dimetoxitritil)-3-O-nitrofenilsulfonil-2-deoxiß-D-lixofuranosil]timidina, como se ha informado recientemente en la literatura. La introducción de [ 18 F]Fluoruro y la consiguiente eliminación de los grupos protectores con HCl son también procedimientos notoriamente conocidos y comúnmente usados. Los procedimientos publicados difieren básicamente en las condiciones en las que se llevan a cabo las reacciones (temperatura, tiempo, concentración, volumen) y en la presencia de, si alguna, una fase de purificación intermedia antes de la reacción de hidrólisis. La fase de purificación final representa el punto débil de estos procedimientos, en cuenta se usa a menudo HPLC (costoso, engorroso, difícil de manejar en preparaciones ordinarias, más difícil de automatizar) y debe ser seguido por una fase de formulación (eliminación del solvente orgánico y redisolución del residuo en solución acuosa o salina). La producción radioquímica es generalmente baja y, más importante, el producto final no siempre cumple con las exigencias necesarias para ser inyectado en humanos. Esto es debido a un número de razones tal como una excesiva cantidad de solventes residuales y, si no se lleva a cabo la purificación con HPLC, pureza radioquímica insuficiente y la presencia de impurezas químicas. El procedimiento descrito en la solicitud de patente internacional nº WO-A-2006/133732 incluye una fase intermedia de purificación antes de la hidrólisis, consistente en una reacción de hidrólisis sobre un soporte sólido, y una fase de purificación final inusual usando columnas disponibles en el mercado (comúnmente llamadas cartuchos o SepPaks). Sin embargo, debería ser indicado que la implementación de este procedimiento lleva a una serie de problemas tales como: - La automatización del procedimiento es laboriosa y, en todo caso, exige un número mayor de válvulas de lo que está normalmente presente en un módulo [ 18 F]FDG; - Hay considerables problemas de reproducibilidad debidos a obstrucciones en los tubos causados por compuestos parcialmente insolubles; - Pueden estar presentes cantidades significativas de impurezas frías. 2   - El producto final es disuelto en una solución acuosa que contiene un porcentaje de EtOH (15-30 %) que es demasiado elevado para uso en humanos (la Farmacopea Oficial fija un valor máximo de 0.5 %); - En adición a estas limitaciones, la producción radioquímica final está en una media baja. La publicación Radiosíntesis de 3-Desoxi-3-[ 18 F]fluortimidina ([ 18 F]FLT para formación de imágenes de proliferación celular in vivo Grierson J.R., Shields A.F., Nuclear Medicine Biology 27, 143-156 (2000) describe un procedimiento relativamente complejo y laborioso que, precisamente por razón de las dificultades que serían causadas por su automatización, se lleva a cabo casi completamente de forma manual. Este procedimiento incluye las siguientes etapas: a) Preparación del [ 18 F]F-Fluoruro anhidroso; b) Marcado del precursor; c) Hidrólisis; en este caso, se exige pre purificación, consistente en enfriar la mezcla de racción at temperatura ambiente, pasarla por un columna de Al2O3 neutral, eluyendo el producto con CH3CN y concentrando esta solución por medio de evaporación a 100º C. El residuo es hidrolizado con una solución en CH3CN-EtOH-H2O de nitrato de amonio cérico a 100º C durante 3 minutos. La reacción es amortiguada por adición de 4% de NaHCO3. Se forma una suspensión que se concentra a 100ºC y entonces de diluye con 2.5 cc de H2O. Como se mencionó supra, Esta fase es, en general, extremadamente laboriosa y altamente compleja. Debería indicarse que el nitrato de amonio cérico genera derivados de oxidación y también degrada el [ 18 F]FLT llevando a una considerable separación de 18 F como fluoruro. La publicación High radiochemical yield synthesis of 3-Desoxy-3-[ 18 F]fluorothymidine using (5-Odimethosytrityl-2-desoxy-3-O-nnosyl-_-D-threo pentofuranosyl)thymine and its 3-N-BOC-protected analogue as a labeling precurosr, Yun M., Oh S.Jl, Ha H-J., Ryu J.S., Moon D.H. Nuclear Medicine Biology 30, 151-157 (2003) describe el análisis de dos precursores, el primero de los cuales es designado como A (y que se corresponde a lo mostrado en la figura 1) y el segundo como B (similar al precursor A pero sin el grupo protector BOC). No está claro de la publicación si el procedimiento se lleva a cabo manualmente o por medio de un módulo. Las fases del procedimiento son las siguientes: a) Preparación del [ 18 F]F-Fluoruro anhidroso; b) Marcado de los precursores; c) Hidrólisis; d) Purificación. El resultado del procedimiento es una producción radioquímica de 42% para el precursor A y de 40% para el precursor B, y una pureza radioquímica del 97% para el precursor A y del 98% para el precursor B. Pueden ser detectados solventes residuales, con un alto porcentaje (15%) de EtOH. El procedimiento descrito en esta publicación implica una serie de problemas y desventajas que limitan su uso. En concreto: - Exige purificación por medio de HPLC; - No puede ser transferido a un módulo normal para [ 18 F]FDG; - No es posible usar cantidades de precursor mayores que 40-45 mg en cuanto estropean la separación por medio de HPLC; - El procedimiento lleva un largo tiempo para realizarse. La principal desventaja, sin embargo, es la imposibilidad de inyectar el producto final en humanos debido al alto porcentaje de EtOH. La solicitud de patente internacional PCT nº WO 2005/025519 describe un procedimiento consistente en las siguientes etapas: e) Preparación del [ 18 F]F-Fluoruro anhidroso; f) Marcado de los precursores; g) Hidrólisis; h) Purificación. 3   En esta última fase, se añade una solución de acetato de sodio a la mezcla en el reactor con objeto de neutralizar el pH de la solución. El volumen de la solución de acetato de sodio es suficiente para diluir el DMSO de la mezcla de reacción a 1:7. La mezcla diluida y neutralizada es transferida a un cartucho C18 sobre el cual se ubica una masa (2pm) que hace posible bloquear cualquier precipitado que pudiera obstruir el cartucho C18. En cuanto la masa puede también ser obstruida una vez que parte de la mezcla ha pasado a través, una válvula se insertó en la estructura, haciendo posible evitar la masa y cargar la mezcla restante directamente en el cartucho C18. Esta válvula es controlada por un lector de presión linear que, cuando la presión se incrementa (debido a la obstrucción) sobre un cierto límite, activa la válvula y dirige el flujo hacia la línea de evitación. Puede hacerse notar que esta evitación realmente lleva a una considerable pérdida de actividad (y, así, de producto) en la masa y en las líneas que conectan la masa al sistema, en cuanto permanecen llenas de mezcla de reacción y no pueden ser lavadas. Adicionalmente, los módulos de síntesis comercial no prevén, por regla general, este sistema de evitación controlado por un lector de presión.... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para la preparación del trazador radioactivo 3-Deoxi-3-[ 18 F]fluortimidina ([ 18 F]FLT), comprendiendo las siguientes etapas: a) Preparación de [ 18 F]F-fluoruro anhidroso; b) Marcado de un precursor, por ejemplo 3-N-Boc-1-[5-O-(4,4-dimetoxitritil)-3-O-nitrofenilsulfonil-2deoxi-ß-D-lixofuranosil]timidina; c) Hidrólisis de la mezcla obtenida por medio de las fases previas; d) Purificación de la mezcla para obtener el trazador radioactivo [ 18 F]FLT, En los que las fases a), b) y c) son llevadas a cabo por medio de procedimientos conocidos, Estando el procedimiento caracterizado porque la mezcla obtenida después de la fase c) está purificada por medio del paso a través de un filtro ventilado y uno o más cartuchos del tipo de cambio catiónico (por ejemplo, un Cromafix PS-H+), uno o más cartuchos del tipo de fase reversa, y, finalmente, un paso a través de cartuchos o bien del tipo N de alúmina, o cartuchos de diolo, o cartuchos de cambio aniónico o una combinación de los mismos, y porque la mezcla con la que se presenta en los cartuchos es diluida con H2O para inyección, con lo que el producto resultante es enviado a un contenedor o ampolla para la recogida de [ 18 F]FLT. 2. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho contenedor o ampolla para la recogida de [ 18 F]FLT es precedido por un filtro estéril. 3. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que antes de la síntesis el filtro ventilado y los cartuchos son acondicionados, en concreto el filtro es acondicionado sólo con H2O para inyección, con lo que los cartuchos son acondicionados con EtOH y H2O para inyecciones y se dejan llenos de agua. 4. Un procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que después de la dilución con H2O, una cantidad predeterminada de producto que ha pasado a través de los cartuchos de purificación es dirigida a través de un contenedor para la recogida de residuos de producción con objeto de eliminar cualesquiera impurezas y el CH3CN residual. 5. Un equipo para ejecutar el procedimiento para la preparación del trazador radioactivo 3-Deoxi-3- [ 18 F]fluortimidina (